【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病理检测，具体为一种术中快速免疫组化质控品的制备方法。
技术介绍
1、术中冰冻切片病理诊断是现代病理重要组成，病理医师通过镜下观察冰冻切片he染色结果，根据细胞状态及组织形态来作出诊断，它是临床医师在术中明确肿瘤良恶性及决定手术方式的重要辅助手段，这需要极高的诊断准确率。但目前而言，由于取材、制片等多种因素，冰冻切片常常无法作出明确诊断，存在较大的局限性。术中快速免疫组化技术是对冰冻切片进行免疫组化染色，不需要抗原修复，可在短时间内完成，能帮助病理医师作出精确的鉴别诊断和病理诊断，极大地提高诊断符合率。
2、免疫组织化学是利用抗原抗体特异性结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原进行定位、定性或者定量的一种技术，特异性强、灵敏度高。免疫组化染色需要设置阳性对照，合理的阳性对照能提高检测的特异性、敏感性和稳定性，从而确保结果的有效性，是不可或缺的一个步骤。同样的，要确保术中快速免疫组化的结果有效性，必须设置阳性对照。
3、目前所使用的快速免疫组化阳性对照为内对照或者单一细胞系悬液，存在以下缺点：1.不是所有抗体在组织内都有内对照；2.单一细胞系对照使用面受限，不同抗体需选择相应的对照，增大了工作量且容易混淆出错。以上也是现有技术没有广泛推行的原因，现亟需一种操作简便、使用灵活、覆盖面广的阳性对照品。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，以解决现有技术中存在的问题。
2、为了解决上述
3、(1)将阳性细胞系离心后，倒掉上清液，用pbs洗涤固体后，再次离心去除pbs，加入冻存液，调节细胞密度为5*105，得阳性细胞冻存液；
4、(2)如制作单一对照，将凝固的琼脂打孔制作成一个外方内圆的小琼脂柱；如制作细胞芯片，将凝固的琼脂修成琼脂块，用管状工具根据设计方案打孔，也可用数个小琼脂柱拼凑排列，在打孔时，注意不能打到底，底部应保留一层薄薄的琼脂封口；
5、(3)在预冷处理的样本托上将阳性细胞冻存液滴入步骤(2)得到的琼脂孔洞中，如若制作细胞芯片，根据设计方案排序将阳性细胞冻存液依次加入琼脂块孔洞，或者先将各阳性细胞冻存液分装至小琼脂柱，再根据设计方案摘选对应小琼脂柱排列码放在样本托上，得琼脂样本；
6、(4)快速地用冰冻包埋剂对琼脂样本进行包埋，立即放入液氮速冻，得阳性对照样本；
7、(5)将阳性对照样本放入切片机切片，贴于防脱片上三分之一处，再将待检组织切片贴片于同一张玻片下三分之一处，立即将玻片放入固定液，进行免疫组化染色。
8、进一步的，步骤(1)所述阳性细胞系可按需购买商业化阳性细胞系，或基于商业化阳性细胞系培养的细胞。
9、进一步的，步骤(1)所述离心的条件：转速为1500rpm、时间为5min。
10、进一步的，步骤(1)所述冻存液配方的质量百分比为:基础培养液70％、胎牛血清20％、二甲基亚砜10％，或选择供应商推荐的冻存液配方。
11、进一步的，所述基础培养液为为prmi1640、dmem等。
12、进一步的，步骤(2)所述琼脂块的规格为：边长2cm、高0.5cm。
13、进一步的，步骤(2)所述琼脂封口的厚度为0.5～2mm。
14、进一步的，步骤(4)所述阳性对照样本可将多余的分装有阳性细胞冻存液的琼脂柱可冻存，并标记好名称和日期，备用。
15、进一步的，步骤(5)所述贴片过程保持玻片处于冰冻状态下进行。
16、进一步的，所述术中快速免疫组化质控品的制备方法可按需制作不同细胞芯片，例：制作乳腺癌分型细胞芯片，选择以下细胞系：①mcf-7，表达er、pr，不表达her2；②skbr3，过表达her2，不表达er、pr；③hcc1806，不表达er、pr、her2；④hcc38，表达p53、ck19，不表达er、pr、her2。
17、与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：本专利技术利用液氮将阳性细胞冻存，从而能够最大限度保存细胞抗原，使得在免疫组化染色时免去了修复步骤，大大缩短染色时间，使操作变得简便，进而减轻工作量；本专利技术可只选择单一细胞系作单一对照，也可选择多个细胞系制作细胞芯片，灵活通用，覆盖面广，适用大部分肿瘤。
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1.一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
2.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述阳性细胞系可按需购买商业化阳性细胞系，或基于商业化阳性细胞系培养的细胞。
3.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的条件：转速为1500rpm、时间为5min。
4.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述冻存液配方的质量百分比为:基础培养液70％、胎牛血清20％、二甲基亚砜10％，或选择供应商推荐的冻存液配方。
5.根据权利要求3所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述基础培养液为为PRMI1640、DMEM等。
6.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述琼脂块的规格为：边长2cm、高0.5cm。
7.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述琼脂
8.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述阳性对照样本可将多余的分装有阳性细胞冻存液的琼脂柱可冻存，并标记好名称和日期，备用。
9.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述贴片过程保持玻片处于冰冻状态下进行。
10.根据权利要求1～9所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述此方法可按需制作不同细胞芯片，例：制作乳腺癌分型细胞芯片，选择以下细胞系：①MCF-7，表达ER、PR，不表达HER2；②SKBR3，过表达HER2，不表达ER、PR；③HCC1806，不表达ER、PR、HER2；④HCC38，表达P53、CK19，不表达ER、PR、HER2。
...【技术特征摘要】
1.一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
2.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述阳性细胞系可按需购买商业化阳性细胞系，或基于商业化阳性细胞系培养的细胞。
3.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的条件：转速为1500rpm、时间为5min。
4.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述冻存液配方的质量百分比为:基础培养液70％、胎牛血清20％、二甲基亚砜10％，或选择供应商推荐的冻存液配方。
5.根据权利要求3所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述基础培养液为为prmi1640、dmem等。
6.根据权利要求1所述的一种术中快速免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述琼脂块的规格为：...
【专利技术属性】
技术研发人员：邵晨宁，葛荣，
申请(专利权)人：宁波市临床病理诊断中心，
类型：发明
国别省市：
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