【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种神经干细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
1、神经干细胞(neural stem cells，nscs)对神经系统的发育、再生和修复至关重要。成年哺乳类动物的大脑中，大部分处于静止状态的nscs在受到外部刺激以及内在的信号分子、转录因子等多种因素之间的协调作用时，可以被再激活，为神经系统疾病的细胞治疗带来前景。
2、现有的方法得到的神经干细胞成活率低，数量无法达到要求，鉴于此，提出本申请。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种神经干细胞及其制备方法和应用，本专利技术所述的扩增培养基能够提供神经干细胞培养过程中粘度的载体，促进神经干细胞的分裂和增殖，提高神经干细胞的活性以及稳定性，提高存活率和细胞数量，具有广泛的应用前景。
2、一种神经干细胞的制备方法，包括以下步骤：
3、（1）将海马组织用pbs缓冲液漂洗，将漂洗后的海马组织置于消化液中进行消化，加入消化终止液终止消化，离心，得到细胞沉淀，将细胞沉淀用pbs缓冲液洗涤，离心，用dmem/f12培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×104个/ml；
4、（2）将步骤（1）的细胞加入到dmem/f12培养基中，培养至细胞融合80~90％，得到原代细胞；
5、（3）将原代细胞以1.5×104个/ml接种于扩增培养基中进行扩增培养，每天半数换液，传至第5代，得到神经干细胞。
6、作为本专利技术的优选实施方案，所述消化液包括以下质量百分比的组分
7、作为本专利技术的优选实施方案，所述消化终止液为质量分数为10％的胎牛血清的pbs溶液。
8、作为本专利技术的优选实施方案，所述步骤（2）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的co2浓度的条件下进行培养。
9、作为本专利技术的优选实施方案，所述步骤（3）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的co2浓度的条件下进行培养。
10、作为本专利技术的优选实施方案，所述扩增培养基由以下组成：dmem/f12无血清培养基、20~50 ng/ml 生育酚、50~100ng/ml 谷胱甘肽、200~500 ng/ml egf、200~500 ng/mlbfgf、0.5~2mg/ml二十碳五烯酸、5~10mg/ml丝瓜络粉、10~40mg/ml mnfe-ldh、10~40mg/ml水解壳多糖、10~30mg/ml胎牛血清、10~50mg/ml白蛋白。
11、本专利技术所述的mnfe-ldh和水解壳多糖二者联用，mnfe-ldh和水解壳多糖在培养基中能够均匀分散，在培养基中形成三维网络，能够为神经干细胞的培养提供载体，为神经干细胞的粘附和增殖提供更大的空间，有效的提高扩增效果，提高细胞活力，二者具有显著的协同增效作用。
12、作为本专利技术的优选实施方案，所述扩增培养基由以下组成：dmem/f12无血清培养基、20~40 ng/ml 生育酚、50~80ng/ml 谷胱甘肽、200~400 ng/ml egf、300~500 ng/mlbfgf、1~2mg/ml二十碳五烯酸、6~10mg/ml丝瓜络粉、10~30mg/ml mnfe-ldh、20~40mg/ml水解壳多糖、15~30mg/ml胎牛血清、30~50mg/ml白蛋白。
13、作为本专利技术的优选实施方案，所述扩增培养基由以下组成：dmem/f12无血清培养基、30 ng/ml 生育酚、60ng/ml 谷胱甘肽、300 ng/ml egf、400 ng/ml bfgf、1.8mg/ml二十碳五烯酸、8mg/ml丝瓜络粉、20mg/ml mnfe-ldh、30mg/ml水解壳多糖、20mg/ml胎牛血清、45mg/ml白蛋白。
14、作为本专利技术的优选实施方案，所述mnfe-ldh的片径为50~400nm。
15、本专利技术还提供了一种上述所述的制备方法制备得到的神经干细胞在制备 治疗神经系统类疾病药物中的应用。
16、本专利技术的有益效果：（1）本专利技术所述的扩增培养基能够提供神经干细胞培养过程中粘度的载体，促进神经干细胞的分裂和增殖，提高神经干细胞的活性以及稳定性，提高存活率和细胞数量，具有广泛的应用前景；（2）本专利技术所述的mnfe-ldh和水解壳多糖二者联用，mnfe-ldh和水解壳多糖在培养基中能够均匀分散，在培养基中形成三维网络，能够为神经干细胞的培养提供载体，为神经干细胞的粘附和增殖提供更大的空间，有效的提高扩增效果，提高细胞活力，二者具有显著的协同增效作用。
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1.一种神经干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述消化液包括以下质量百分比的组分：0.6~1%氯化钠注射液、1~4%胶原酶Ⅰ、2~5%木瓜蛋白酶、4~6%葡萄糖、8~15%氯化钙、15~25%白蛋白、余量水。
3.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述消化终止液为质量分数为10％的胎牛血清的PBS溶液。
4.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的CO2浓度的条件下进行培养。
5.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的CO2浓度的条件下进行培养。
6.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述扩增培养基由以下组成：DMEM/F12无血清培养基、20~50 ng/mL 生育酚、50~100ng/mL 谷胱甘肽、200~500 ng/mL EGF、200~500 ng/mL
7.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述扩增培养基由以下组成：DMEM/F12无血清培养基、20~40 ng/mL 生育酚、50~80ng/mL 谷胱甘肽、200~400 ng/mL EGF、300~500 ng/mL bFGF、1~2mg/mL二十碳五烯酸、6~10mg/mL丝瓜络粉、10~30mg/mLMnFe-LDH、20~40mg/mL水解壳多糖、15~30mg/mL胎牛血清、30~50mg/mL白蛋白。
8.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述扩增培养基由以下组成：DMEM/F12无血清培养基、30 ng/mL 生育酚、60ng/mL 谷胱甘肽、300 ng/mL EGF、400ng/mL bFGF、1.8mg/mL二十碳五烯酸、8mg/mL丝瓜络粉、20mg/mL MnFe-LDH、30mg/mL水解壳多糖、20mg/mL胎牛血清、45mg/mL白蛋白。
9.根据权利要求6所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述MnFe-LDH的片径为50~400nm。
10.权利要求1~9任一所述的制备方法制备得到的神经干细胞在制备治疗神经系统疾病类药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种神经干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述消化液包括以下质量百分比的组分：0.6~1%氯化钠注射液、1~4%胶原酶ⅰ、2~5%木瓜蛋白酶、4~6%葡萄糖、8~15%氯化钙、15~25%白蛋白、余量水。
3.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述消化终止液为质量分数为10％的胎牛血清的pbs溶液。
4.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的co2浓度的条件下进行培养。
5.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）在37.0±0.5℃的温度、5.0±0.2％的co2浓度的条件下进行培养。
6.根据权利要求1所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述扩增培养基由以下组成：dmem/f12无血清培养基、20~50 ng/ml 生育酚、50~100ng/ml 谷胱甘肽、200~500 ng/ml egf、200~500 ng/ml bfgf、0.5~2mg/ml二十碳五烯酸、5~10mg/ml丝瓜络粉、10~40mg/mlmnfe-ldh、10~40mg/ml水解壳多糖...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐智峰，张新，李智耀，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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