【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物培养，涉及一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌及其应用，具体涉及铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株、包含其的培养物、包含其的菌剂、及其在石油采收中的应用。
技术介绍
1、微生物表面活性物质是指微生物在一定的培养条件下合成的同时具有亲水亲油基团，在溶液表面能定向排列的两亲化合物。生物表面活性物质结构复杂，种类丰富，具有与化学表面活性剂相同的功能，如增溶、乳化、润湿、发泡、分散、降低界面张力等。同时生物表面活性物质还具有可生物降解、生态毒性低和生产原料广泛等特点。生物表面活性物质依据其微生物来源和结构特征可分为糖脂、脂肽、脂蛋白、脂肪酸、磷脂、中性脂以及聚合物表面活性剂。
2、生物表面活性物质在石油领域常用于石油污染修复和提高石油的生物可利用率。生物表面活性物质主要通过两种途径来提高石油的生物可利用率：一方面通过降低油水界面张力并促进水油两相的乳化，以增大界面面积，促使微生物与较大油滴之间的直接有效接触；另一方面是利用表面活性物质对烃类物质的增溶机制，使石油相在水相中分散，从而便于微生物吸收粒径小于自身的油滴，达到提高石油的生物可利用率的目的。
3、但是，生物表面活性物质属于微生物的次生代谢产物，整个基因表达和代谢途径复杂而冗长，现有技术主要针对单个基因进行改造，但是获得基因工程菌的效率较低、操作流程复杂且周期较长，产量和功能的提升也具有一定的局限性。
4、因此，借助现有诱变育种等手段，探索细胞代谢中除了生物合成表面活性物质外未知影响基因，
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌及其应用，具体提供一种铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株、包含其的培养物、包含其的菌剂、及其在石油采收中的应用
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌，所述用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株，保藏编号为cgmcc no.25491，保藏日期为2022年08月03日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号
4、本专利技术以铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株为出发菌株，使用等离子体诱变育种仪诱变获得一株铜绿假单胞菌，将其命名为铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-6菌株，该菌株可以生产糖脂类表面活性物质，促进原油乳化，提高原油采收率。且微生物糖脂类表面活性物质毒性低，易降解，还可以在环境污染治理中作为生物降解佐剂，用于降低油/水界面张力，促进乳化作用，增加油水界面接触面积，增加降解微生物与污染液滴的相互作用，达到促进污染物降解的效果。
5、铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株的保藏编号为cgmcc no.1.2620，2020年04月30日购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
6、本专利技术所涉及的铜绿假单胞菌的筛选步骤如下：
7、(1)以铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株为出发菌株，使用等离子体诱变育种仪诱变育种后，涂布在lb固体培养基上，在30℃培养18h后，挑取单菌落接种至lb液体培养基30℃培养24h，随后将菌液点样至哥伦比亚血琼脂筛选平板上初筛，选出溶血圈直径较出发菌株增加10％以上的菌株。
8、(2)将步骤(1)初筛菌株发酵培养96h，提取表面活性物质进行复筛，选择表面活性物质产量高的菌株，并在30℃下使用液体培养基扩大培养，再使用质量终浓度为15％的甘油进行保藏，随后进行菌株鉴定，并将该菌株命名为铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-6菌株。
9、第二方面，本专利技术提供一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌的培养物，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
10、将第一方面中所述的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株接种于培养基中，在25-35℃(例如25℃、27℃、29℃、31℃、33℃、35℃等)下培养1-4天(例如1天、2天、3天或4天)即得。
11、上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
12、本专利技术优选上述培养条件，铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株在上述培养条件中能够达到生长稳定期，并且具有更加优异的碳源利用能力。
13、第三方面，本专利技术提供一种提高原油采收率的菌剂，所述提高原油采收率的菌剂中的菌株包括如第一方面中所述的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株。
14、本专利技术所涉及的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株可以被单独地应用于相关产品中，也可以与其他化合物或菌株联合应用于相关产品中。
15、优选地，在所述提高原油采收率的菌剂中，所述铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-6菌株的活菌数不低于1×108cfu/ml或1.5×108cfu/g。
16、所述不低于1×108cfu/ml的具体数值可以选择1×108cfu/ml、2×108cfu/ml、4×108cfu/ml、6×108cfu/ml、8×108cfu/ml或1×109cfu/ml等。
17、所述不低于1.5×108cfu/g的具体数值可以选择1.5×108cfu/g、3×108cfu/g、4.5×108cfu/g、6×108cfu/g、7.5×108cfu/g或1×109cfu/g等。
18、上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
19、优选地，所述菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂、片状菌剂或颗粒状菌剂。
20、优选地，所述菌剂还包括保护剂和/或辅助添加剂。
21、优选地，所述保护剂包括脱脂奶粉、甘露醇、蔗糖或乳糖中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括脱脂奶粉和甘露醇的组合、甘露醇和蔗糖的组合或蔗糖和乳糖的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
22、优选地，所述辅助添加剂包括鼠李糖脂、脂肽或十二烷基磺酸钠中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括鼠李糖脂和脂肽的组合、脂肽和十二烷基磺酸钠的组合或鼠李糖脂和十二烷基磺酸钠的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
23、优选地，所述提高原油采收率的菌剂中的菌株还包括枯草芽孢杆菌bacillussubtilis 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌，其特征在于，所述用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-6菌株，保藏编号为CGMCC No.25491，保藏日期为2022年08月03日。
2.一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
3.一种提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述提高原油采收率的菌剂中的菌株包括如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-6菌株。
4.如权利要求3所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，在提高原油采收率的菌剂中，所述铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-6菌株的活菌数不低于1×108CFU/mL或1.5×108CFU/g。
5.如权利要求3或4所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂、片状菌剂或颗粒状菌剂。
6.如权利要求3-5中任一项所述的提高原油采收率的
7.如权利要求6所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述保护剂包括脱脂奶粉、甘露醇、蔗糖或乳糖中的任意一种或至少两种的组合；
8.如权利要求3-7中任一项所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述提高原油采收率的菌剂中的菌株还包括枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WL-5菌株；所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WL-5菌株的保藏编号为CGMCCNo.24712，保藏日期为2022年04月18日。
9.如权利要求8所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-6菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WL-5菌株的活菌数比为(0.5-4):1。
10.如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-6菌株、如权利要求2所述的培养物或如权利要求3-9中任一项所述的提高原油采收率的菌剂在石油采收中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌，其特征在于，所述用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株，保藏编号为cgmcc no.25491，保藏日期为2022年08月03日。
2.一种用于生产表面活性物质的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
3.一种提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述提高原油采收率的菌剂中的菌株包括如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株。
4.如权利要求3所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，在提高原油采收率的菌剂中，所述铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-6菌株的活菌数不低于1×108cfu/ml或1.5×108cfu/g。
5.如权利要求3或4所述的提高原油采收率的菌剂，其特征在于，所述菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂、片状菌剂或颗粒状菌剂。
6.如权利要求3-5中任一项所述的提...
【专利技术属性】
技术研发人员：王璐，宋文枫，田茂章，王鸿，吕伟峰，张群，修建龙，俞理，崔庆锋，伊丽娜，黄立信，马原栋，
申请(专利权)人：中国石油天然气集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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