本发明专利技术属于劣质土地植被恢复及改良技术领域，具体涉及一种外生菌根真菌及其在促进盐渍土中黑松菌根化和定植中的应用，本发明专利技术得到的菌种及接种方法可应用于盐渍土等劣质土地的植被恢复，植物生长旺盛。在盐渍土进行菌根化侵染时，将固体基质埋于幼苗根部，对幼苗无需其他处理，大大简化了接种流程，操作简单，所需条件要求不高，是一种优良的植物外生菌根接种技术。幼苗移栽和固体基质埋入后，能大大提高黑松在盐渍土上的定植情况，提升其鲜重和菌根化率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于劣质土地植被恢复及改良，具体涉及一种外生菌根真菌及其在促进盐渍土中黑松菌根化和定植中的应用。
技术介绍
1、外生菌根真菌(ectomycorrhiza)是一类能与高等植物根系形成共生关系的大型真菌，植物-外生菌根真菌共生是自然界的一种普遍现象。利用外生菌根可使树木提前4-5年成材。外生菌根菌有利于在贫瘠土壤生长出茂盛树林，在低营养土壤环境中，外生菌根菌的感染力仍然较强，对荒地、矿山等劣质土地的植被恢复具有重要意义。外生菌根真菌在维护生态平衡和保护生物多样性方面起着至关重要的作用，是维持森林生态系统平衡的重要组成部分，在生态系统的物质和能量循环中起关键作用。
2、松(pinus)为高大木本植物，种类多，分布广，是我国常见的树种之一，不仅可以生长在各种不同的土壤上而且具有一定的抗旱能力，常被用于劣质地、荒地植被恢复的先锋树种。且在自然界中生长的松树常与外生菌根真菌形成菌根共生结构，大大提高了其耐逆性。日本黑松(p.thunbergii)原产于日本，后被我国引种种植，因其具备耐旱、耐瘠、抗海雾等优良特性，常在我国沿海地区(如辽宁大连、山东威海、江苏连云港等)种植，用于滨海盐碱地的植树造林。
3、在现有技术中，多为将黑松等木本植物预先进行菌根化后，再移栽至劣质地中，此方法流程较为繁琐，费时费力。国内外的相关研究中着重关注了外生菌根真菌的固体培养基质的优化，部分研究专利技术关注了部分已报道菌种在重金属污染修复领域的应用。对于新报道的菌种及固体培养基质在滨海盐渍土中植树造林固沙中的应用鲜有报道。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术自四川省凉山彝族自治州盐源县鱼多湾(27°
2、51'47"n,100°49'14"e)，从该地区的松树林下采集(hebeloma nanum，hn)子实体，经分离纯化得到纯培养菌株。菌种保藏号为cctcc no:m 2023834，系首次报道、应用该菌种。hn分离纯化完成后，使用固体基质对其进行培养，而后将固体基质应用于中度盐渍土中黑松的定植。结果表明，施加固体基质可以提升黑松在盐渍土中的存活率、促进植物生长和菌根化的形成。提升效果与菌种种类和施加量有关。效果最好的是施加20％(质量比)的h.nanum固体基质，相较于未施加该固体基质的黑松，其生物量提高近2.6倍。同时，黑松的菌根化率从9.53％提升至74.13％，提高7.8倍。基于此，ecm真菌固体培养基质是进行盐渍土植被恢复等作业的一种优良辅助手段，植物菌根化良好，生长旺盛。
3、为了实现上述的目的，本专利技术采用以下技术措施：
4、一株外生菌根真菌，所述外生菌根真菌保藏编号为cctcc no:m2023834，于2023年5月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为湖北省武汉市武昌区八一路299号，分类命名为heboloma nanum hn-bhl。
5、所述外生菌根真菌的序列如seq id no.1所示，真菌进化树如图2所示。
6、hn-bhl真菌its序列(seq id no.1)
7、cttggtgtggttgtcgctggccctctcgggggcatgtgcacacccaccatc
8、ctcatctctccacctgtgcacctcttgtagacttggattgactttccgagg
9、caactcggtcgggaggacttgctggcattagctggctttccttgcatttcc
10、agatctacgtttttcatataccccattgtatgtaacagaatgtctcattgggc
11、cttgtgcctataaaccttatacaactttcagcaacggatctcttggctctcg
12、catcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataagtaatgtgaattgcagaatt
13、cagtgaatcatcgaatctttgaacgcaccttgcgctccttggtattccgag
14、gagcatgcctgtttgagtgtcattaaattctcaacctttatcggcttttgtt
15、gataaaggcttggatatgggggcttattttgctggcttctttacagatggtc
16、agctccccttaaatgcattagccggtgcccctgcgtggactgtctattggt
17、gtgataattatctacgccgtggacatctgcaatcatatgggtttgcactgct
18、tctaactgtctgttcattcagacaatacatgacaatttgacctcaaatcaggtaggac。
19、本专利技术还提供一种菌剂，所述菌剂含有上述的外生菌根真菌。
20、本专利技术还提供上述的外生菌根真菌在在促进盐渍土中黑松生长中的应用。
21、进一步的，所述外生菌根真菌用于提升黑松在盐渍土中的存活率。
22、进一步的，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松的生长发育。
23、进一步的，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松菌根化。
24、本专利技术还提供一种提升盐渍土中黑松存活率的方法，将上述的外生菌根真菌接种在mmn固体培养基上，待所述外生菌根真菌生长至旺盛期时，将培养基与固体基质混合，用于培养黑松。
25、进一步的，所述固体基质采用如下原料配制而成：泥炭75g、蛭石75g、沙子50g、小麦粉9g、150ml 1/4mmn液体培养基。所述1/4mmn液体培养基为mmn固体培养基去除agar后，按体积比例稀释4倍。
26、进一步的，所述mmn固体培养基包括：melt extract 3g；glucose 10g；
27、(nh4)2hpo4 0.25g；kh2po4 0.5g；cacl2 0.05g；nacl 0.025g；mgso4·7h2o 0.15g；vb1 1mg；fecl3 20mg；agar 12g，并采用hcl调ph 5.5-5.8。
28、进一步的，接种后25℃黑暗活化约4周。
29、外生菌根真菌及其固体培养基质对盐渍土中黑松菌根化和定植的应用，所述方法具体包括如下步骤：
30、s1：h.nanum子实体的分离纯化：在四川省凉山彝族自治州盐源县鱼多湾(27°51'47"n,100°49'14"e)，地区的松树林下采集子实体(图1)，经分离纯化得到纯培养菌株。分离的方法为：预先配制mmn固体培养基，121℃，灭菌20min后，添加使用0.22μm细菌过滤器过滤的盐酸四环素溶液，培养基中盐酸四环素的浓度为1mg/l。将h.nanum子实体取出，用75％酒精擦拭子实体表面消毒，然后，使用灭菌的镊子撕去子实体外皮，挑取子实体内部干净的菌肉(约2mm×2mm)置本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一株外生菌根真菌，其特征在于，所述外生菌根真菌保藏编号为CCTCC NO:M2023834，于2023年5月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为湖北省武汉市武昌区八一路299号，分类命名为Heboloma nanum Hn-BHL。
2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂含有权利要求1所述的外生菌根真菌。
3.权利要求1所述的外生菌根真菌在在促进盐渍土中黑松生长中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于提升黑松在盐渍土中的存活率。
5.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松的生长发育。
6.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松菌根化。
7.一种提升盐渍土中黑松存活率的方法，其特征在于，将权利要求1所述的外生菌根真菌接种在MMN固体培养基上，待所述外生菌根真菌生长至旺盛期时，将培养基与固体基质混合，用于培养黑松。
8.根据权利要求7所述的提升盐渍土中黑松存活率的方法，其特征在于，所述固体基质采用如下原料配制而成：泥炭75g、蛭石75g、沙子50g、小麦粉9g、150mL 1/4MMN液体培养基；所述1/4MMN液体培养基为MMN固体培养基去除Agar后，按体积比例稀释4倍。
9.根据权利要求7所述的提升盐渍土中黑松存活率的方法，其特征在于，所述MMN固体培养基包括：Melt extract 3g；Glucose 10g；(NH4)2HPO4 0.25g；KH2PO4 0.5g；CaCl20.05g；NaCl 0.025g；MgSO4·7H2O 0.15g；VB1 1mg；
10.根据权利要求7所述的提升盐渍土中黑松存活率的方法，其特征在于，接种后25℃黑暗活化约4周。
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【技术特征摘要】
1.一株外生菌根真菌，其特征在于，所述外生菌根真菌保藏编号为cctcc no:m2023834，于2023年5月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为湖北省武汉市武昌区八一路299号，分类命名为heboloma nanum hn-bhl。
2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂含有权利要求1所述的外生菌根真菌。
3.权利要求1所述的外生菌根真菌在在促进盐渍土中黑松生长中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于提升黑松在盐渍土中的存活率。
5.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松的生长发育。
6.根据权利要求3所述的应用，所述外生菌根真菌用于促进盐渍土中黑松菌根化。
7.一种提升盐渍土中黑松存活率的方法，其特征在于，将权利要求1所述的外生菌根真菌接种在mmn固...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘镔皞，史良，王杰，王胜晓，赵轩，王彬，陈亚华，
申请(专利权)人：南京原野绿色生态科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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