【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肽螯合硒，尤其涉及一种裂殖壶菌肽螯合硒、制备方法及其在仔猪体内抑制猪繁殖与呼吸综合征的应用。
技术介绍
1、裂殖壶菌肽螯合硒是一种利用裂殖壶菌(schizochytrium sp.)制备的生物活性物质，它结合了裂殖壶菌肽和硒元素的特性，具有潜在的健康促进和疾病预防作用。在仔猪体内，裂殖壶菌肽螯合硒可能通过增强免疫力和抗氧化能力来抑制猪繁殖与呼吸综合征(prrs)的感染和传播。
2、裂殖壶菌是一种能够生产大量多不饱和脂肪酸(如dha)的微生物。通过代谢工程和基因表达体系的优化，可以实现裂殖壶菌中dha的高效生产。硒是一种重要的微量元素，对动物健康至关重要。通过酵母等生物转化方式生产的有机硒形式，比无机硒更易被动物吸收利用。裂殖壶菌肽与硒的螯合可以通过特定的化学或生物方法实现，制备出具有高生物活性的裂殖壶菌肽螯合硒产品。
3、猪繁殖与呼吸综合征(prrs)是一种对全球养猪业造成重大经济损失的病毒性疾病，表现为母猪繁殖障碍和仔猪、生长猪的呼吸道症状。裂殖壶菌不仅在dha生产上有应用，还有研究开发了基于裂殖壶菌的多基因表达体系，为生产其他生物活性物质提供了可能。
4、目前裂殖壶菌肽螯合硒在抑制prrs方面的应用尚未见报道，本专利技术考虑到裂殖壶菌肽和硒的各自健康益处，这种螯合物可能具有提高仔猪免疫力和抵抗prrs感染的潜力。
5、中国专利技术专利授权cn106632597b公开了一种海洋源钙螯合肽及其制备方法，以裂殖壶菌粕蛋白为原料，通过碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶分步酶解，再
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种胃肠螯合率的保留率高的裂殖壶菌肽螯合硒、制备方法及其在仔猪体内抑制猪繁殖与呼吸综合征的应用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、一种裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法如下：
4、步骤1、将裂殖壶菌菌体使用0.1～0.3mol/l氢氧化钠水溶液按料液比1:80～120(w/v)在85～95℃下提取20～40分钟，2～6℃下以8000～12000rpm离心15～25分钟，取上清，将提取的蛋白质用4～6mol/l盐酸调节ph至3～4，进行酸沉，取沉淀弃上清，冷冻干燥，得到裂殖壶菌粕蛋白；
5、步骤2、对步骤1制备的裂殖壶菌粕蛋白加水，得到底物；再使用碱性蛋白酶对底物进行酶解，酶解温度为45～55℃，时间为6～10小时，ph为8～10；再采用复合风味蛋白酶酶解，酶解温度为35～45℃，ph为5～6.5，时间为3～5小时；酶解完成后，在沸水浴中灭酶5～15分钟，冷却后以8000～12000rpm离心5～15分钟，收集上清液；
6、步骤3、在上清液中加入亚硒酸钠，采用0.5～2mol/l盐酸调节ph至5～6，加入螯合剂，调整温度为40～50℃，作用时间为0.5～2小时，得到混合物；
7、步骤4、色谱分离：使用凝胶过滤色谱对步骤3的混合物进行初步分离，流速为0.4～0.5ml/min，收集具有最高金属螯合活性的峰，随后使用反相高效液相色谱进行进一步纯化，50～70wt％乙腈水溶液作为洗脱液梯度洗脱，流速为2～4ml/min，得到裂殖壶菌肽螯合硒。
8、所述碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶的酶底质量比均为8～12％，底物浓度为0.5～2％。
9、所述加入亚硒酸钠中硒的最终浓度为10～20ppm。
10、所述螯合剂与硒的摩尔比为0.5～1：1。
11、所述螯合剂的制备方法如下，以重量份计：
12、s1、将3-氯-2-羟基丙硫酸钠盐加入水中，搅拌直至完全溶解，制成150～250份质量浓度为30～40％的水溶液；将15～20份间苯三酚加入到上述水溶液中，使用预先配制好的0.5～2mol/l氢氧化钠水溶液调节体系ph值至8～10，将溶液转移到变频微波反应器中处理，得到反应液；
13、s2、在步骤s1制备的反应液冷却至室温后，加入8～12份(三氯甲基)环氧乙烷和4～8份二乙烯三胺和4～8份三(2-氨基乙基)胺；加热并维持在70～80℃，搅拌处理2～4小时，处理结束后，自然冷却至20～40℃，然后加入10～20份磷酸二氢钠，搅拌混合至均匀；
14、s3、在保持25～35℃的条件下，滴加15～25份30wt％乙醛水溶液，滴加完成后，升温至80～95℃处理2～4小时，然后使用8000～12000rpm离心5～15分钟，收集离心后的上清液，进行过滤，得到螯合剂。
15、所述变频微波反应器中处理的微波功率为300～800w，加热并维持温度在80～95℃，处理时间为0.5～2小时。
16、所述乙醛水溶液的滴加时间为15～25分钟。
17、所述过滤选择孔径为0.5～3μm的滤膜进行过滤。
18、所述裂殖壶菌肽螯合硒可以应用在仔猪体内抑制猪繁殖与呼吸综合征。
19、在这个裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法中，各个物质的作用如下：
20、裂殖壶菌作为生物原料，通过酶解步骤释放出裂殖壶菌肽，通过其生物转化作用，可以富集硒元素。
21、培养基提供裂殖壶菌生长所需的营养物质和环境条件，使其能够在适宜的温度和ph值下生长繁殖。
22、氢氧化钠水溶液用于提取裂殖壶菌中的蛋白质，通过破坏细胞结构和溶解细胞内蛋白质，从而得到裂殖壶菌粕蛋白。
23、碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶这两种酶用于水解裂殖壶菌粕蛋白，将其分解成较小的肽段。碱性蛋白酶在较高ph值下作用，而复合风味蛋白酶在较低ph值下作用，这样可以在不同的ph条件下获得不同长度和特性的肽段。
24、亚硒酸钠作为硒源，提供了硒元素，用于与裂殖壶菌肽进行螯合反应，形成裂殖壶菌肽螯合硒。
25、螯合剂与硒离子形成稳定的螯合物，提高硒的稳定性和生物利用率。
26、3-氯-2-羟基丙硫酸钠盐作为螯合剂的基础原料，提供了硫酸根和氯原子，增强了螯合剂的溶解性和与硒离子的配位能力。
27、间苯三酚含有酚羟基，能够提高螯合物的稳定性。
28、(三氯甲基)环氧乙烷与二乙烯三胺和三(2-氨基乙基)胺作用，形成含有多个氨基的螯合剂，增加了螯合剂与硒离子的结合位点。
29、磷酸二氢钠在螯合剂的制备过程中，用于中和多余的碱性物质，调节ph值，保证螯合剂的稳定性。
30、乙醛水溶液在螯合剂的制备中，可能用于进一步交联和稳定螯合剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，制备方法如下：
2.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶的酶底质量比均为8～12％，底物浓度为0.5～2％。
3.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述加入亚硒酸钠中硒的最终浓度为10～20ppm。
4.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述螯合剂与硒的摩尔比为0.5～1：1。
5.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述螯合剂的制备方法如下，以重量份计：
6.如权利要求5所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述变频微波反应器中处理的微波功率为300～800W，加热并维持温度在80～95℃，处理时间为0.5～2小时。
7.如权利要求5所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述乙醛水溶液的滴加时间为15～25分钟。
8.如权利要求5所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述过滤选择孔径为0.5～3μm的滤膜
9.一种裂殖壶菌肽螯合硒，其特征在于，采用如权利要求1～8任一项所述的制备方法制备而成。
10.如权利要求9所述的裂殖壶菌肽螯合硒的应用，其特征在于，所述裂殖壶菌肽螯合硒在仔猪体内抑制猪繁殖与呼吸综合征的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，制备方法如下：
2.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶的酶底质量比均为8～12％，底物浓度为0.5～2％。
3.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述加入亚硒酸钠中硒的最终浓度为10～20ppm。
4.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述螯合剂与硒的摩尔比为0.5～1：1。
5.如权利要求1所述的裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，所述螯合剂的制备方法如下，以重量份计：
6.如权利要求5所述的裂殖壶菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：柳高峰，张运强，周探科，欧阳芬，
申请(专利权)人：湖南加农正和生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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