【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水产养殖，尤其涉及一种快速测定双壳贝类耐盐性能的方法。
技术介绍
1、盐度是贝类养殖中的关键生态因子，影响贝类生存和生长，使贝类的新陈代谢、生长发育以及渗透调节发生改变。当水体中盐度变化超过贝类耐受范围时，将对其生长和生存造成巨大压力，因此在养殖过程中需对其盐度耐受性能进行检测。目前对贝类盐度耐受性能的检测主要通过急性毒性实验来获取，观察不同盐度下贝类的死亡率，从而确定其对盐度的耐受性。常规急性毒性实验时间为96小时，这种检测方法对其他水生生物具有较好的检测结果，而双壳贝类具有保护自身的闭壳机制，在受到胁迫时会将壳闭紧，关闭进出水管，减少与外界环境中的水和离子的交换，并且这种保护机制在多种双壳贝类中均有发现。因此当环境发生变化时，贝类通过保护机制与环境相隔离，降低其摄食率，通过增加消化率和吸收率以及降低基本代谢率来维持正常的生存，短时间内不会出现死亡现象。有研究表明，对缢蛏进行毒性实验时，其合理观察时间至少为7d，从而保证其结果的准确性。因此急性毒性实验对双壳贝类具有不易观察、实验时间长及不能准确有效评价其盐度耐受性等缺点。
技术实现思路
1、为了克服上述技术缺陷，本专利技术的目的在于提供一种快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其包括：
2、步骤s1：把贝类暂养于适宜水体中，每天投喂适量藻液，使贝类适应环境，实验前48h停止投喂；
3、步骤s2：使用过滤自来水，通过海水晶配置成不同盐度的水体，全部溶解后稳定24h使用；
4、步骤s3：挑
5、步骤s4：待贝类适应2～3h后，加入藻液，双壳贝类可投喂角毛藻、金藻及小球藻，并调整其初始浓度为1x106个/ml记录实验起始时间，3h后结束实验；
6、步骤s5：实验结束后每组随机取水样并对藻类进行固定，在显微镜下采用血球计数板计算藻的浓度，将贝类软体部取出并在60℃烘箱中烘干至恒重，精确到0.001g；
7、步骤s6：首先，按以下公式计算不同盐度梯度下贝类摄食率：
8、fr＝v[ln(ce0/cet)-ln(cc0/cct)]/wt
9、其中，fr为摄食率，单位为l/(g·h)；v为实验水体体积，单位为l；ce0和cet为实验开始时和t时间后藻液浓度，单位为cell/ml；cc0和cct为空白对照组实验开始时和t时间后藻液浓度，单位为cell/ml；w为实验所用贝软体部干重，单位为g；t为实验所用时间，单位为h；
10、然后，通过线性回归方程进行分析，贝类摄食率为对照组摄食率的50％时的对应盐度为其半致死盐度。
11、进一步地，在步骤s1中，挑选大小均匀，活力良好的近江牡蛎在适宜海水中暂养，水温24.5±0.5℃，ph 7.8～8.0，期间投喂牟氏角毛藻与小球藻混合藻液。
12、进一步地，在步骤s2中，盐度组设置5个盐度梯度，分别为2.5、5、10、15和20，另外设置前述不同盐度的无贝空白对照组，以消除藻类繁殖和沉降的影响。
13、进一步地，在步骤s3中，实验水体为5l，每个浓度梯度组设置3个重复，每个重复放3个近江牡蛎，每一个近江牡蛎的重量为9.06±4.03g。
14、进一步地，在步骤s4中，待牡蛎在实验水体中适应2h后加入藻液，调整初始浓度为1x106 cell/ml，并记录实验开始时间，实验持续3h后结束。
15、进一步地，在步骤s5中，实验结束后取水样用鲁戈氏液固定，显微镜下用血球计数板对藻类计数，将牡蛎软体取出并在60℃烘箱中烘干至恒重，精确到0.001g。
16、进一步地，在步骤s6中，计算近江牡蛎在各个盐度梯度下的摄食率，经回归分析，近江牡蛎摄食率(fr)与盐度(s)的关系为：
17、fr＝-0.0035s2+0.1047s+0.2149
18、其中，fr为近江牡蛎摄食率，s为盐度，当摄食率为对照组50％时对应的盐度为2.50，即近江牡蛎的半致死盐度为2.50。
19、采用了上述技术方案后，与现有技术相比，具有以下有益效果：
20、本专利技术提供了一种快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，该方法通过测定急性盐度胁迫下贝类摄食率代替传统急性毒性实验中的存活率，能够在短时间内对双壳贝类的耐盐性能进行准确的测定。本申请的技术方案克服了现有技术中的由于双壳贝类闭壳导致难以观察其生存，以及由于其自身保护机制短时间内无死亡的情况，进而无法快速判定双壳贝类对盐度胁迫的耐受能力的难题。现有技术中的急性毒性实验闭壳会减少中毒，从而延长死亡时间，所以需要更长的时间得到更准确的结果。但是在本申请中的摄食率实验中，如果环境不适闭壳了就会立马通过摄食率体现出来，因此比较快速。另外通过摄食率测定也可以评估双壳贝类在盐度胁迫下的生长性能，在生产实践中具有重要意义。本专利技术独创性的利用贝类摄食率快速鉴定双壳贝类对盐度的耐受性能，该技术实验持续时间短，易于测量，利用本专利技术方法可在3～6h内测定双壳贝类的盐度耐受性能，极大地减少了工作量，提高了准确性，且受贝类种类局限性小，准确性高。
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1.一种快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤S1中，挑选大小均匀，活力良好的近江牡蛎在适宜海水中暂养，水温24.5±0.5℃，pH 7.8～8.0，期间投喂牟氏角毛藻与小球藻混合藻液。
3.如权利要求2所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤S2中，盐度组设置5个盐度梯度，分别为2.5、5、10、15和20，另外设置前述不同盐度的无贝空白对照组，以消除藻类繁殖和沉降的影响。
4.如权利要求3所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤S3中，实验水体为5L，每个浓度梯度组设置3个重复，每个重复放3个近江牡蛎，每一个近江牡蛎的重量为9.06±4.03g。
5.如权利要求4所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤S4中，待牡蛎在实验水体中适应2h后加入藻液，调整初始浓度为1x106 cell/mL，并记录实验开始时间，实验持续3h后结束。
6.如权利要求5所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其
7.如权利要求6所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤S6中，计算近江牡蛎在各个盐度梯度下的摄食率，经回归分析，近江牡蛎摄食率与盐度的关系为：
...【技术特征摘要】
1.一种快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤s1中，挑选大小均匀，活力良好的近江牡蛎在适宜海水中暂养，水温24.5±0.5℃，ph 7.8～8.0，期间投喂牟氏角毛藻与小球藻混合藻液。
3.如权利要求2所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤s2中，盐度组设置5个盐度梯度，分别为2.5、5、10、15和20，另外设置前述不同盐度的无贝空白对照组，以消除藻类繁殖和沉降的影响。
4.如权利要求3所述的快速测定双壳贝类耐盐性能的方法，其特征在于，在步骤s3中，实验水体为5l，每个浓度梯度组设置3个重复，每个重复放3个近江...
【专利技术属性】
技术研发人员：李燕，来琦芳，周凯，么宗利，高鹏程，孙真，卫宇星，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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