【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机化合物及其应用，具体涉及一种检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物及其制法和应用。
技术介绍
1、硒代半胱氨酸(sec)是一种含硒硒醇基团的半胱氨酸(cys)类似物，是硒的主要形式。硒代半胱氨酸是第21个氨基酸，是硒的代谢产物，在动物体内以无机形式合成为有机形式。它将半胱氨酸(cys)中的含硫硫醇基团替换为含硒硒醇基团，是cys的类似物。值得注意的是，sec通常作为酶的活性位点并入硒蛋白(seps)，例如谷胱甘肽过氧化物酶(gpx)和硫氧还蛋白还原酶(trxr)。sec的异常水平与癌症、心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病和男性不育等人类疾病密切相关。
2、为了探索有关sec生理和病理作用的更精确信息，迫切需要一种准确且选择性的体内sec监测方法。到目前为止，检测sec的方法主要包括气相色谱法与质谱法、高效液相色谱法与质谱法、毛细管电泳电感耦合质谱法和一氯代二甲甲烷(mcb)法等。这些方法通常需要复杂的样品处理或组织或细胞的破坏，因此它们不适合视觉和非侵入性分析。与传统的检测方法相比，荧光成像因其高灵敏度、无损、方便以及高时空分辨率而成为研究生物分子的更广泛使用的工具。然而，大多数报道的sec探针由于荧光团的特性而存在发射波长短、水溶性和光稳定性差以及在水溶液中荧光量子产率低的问题。
3、因此，开发新的合适的小分子荧光探针是研究sec在生理和病理情况下的作用和机制的有效途径。
技术实现思路
1、本专利技术提供的一种检测硒代半胱氨酸sec的苯并
2、为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
3、本专利技术公开了一种检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物，具有如下式(i)所示的结构式：
4、
5、本专利技术还公开了一种如上所述的检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物的制备方法，包括如下步骤：
6、步骤1、在惰性气氛保护下，将cy7.5和无水哌嗪溶于n，n-二甲基甲酰胺dmf中，加热搅拌反应完毕后，冷却至室温旋干，真空干燥，得到蓝色固体化合物cy7.5-pq；
7、步骤2、在惰性气氛保护下，将荧光团cy7.5-pq和三乙胺添加到含有二氯甲烷的圆底烧瓶中，在第一设定温度下搅拌第一设定时间，得到混合物；
8、步骤3、在惰性气氛保护下，向步骤2的混合物中加入2,4-二硝基苯磺酰氯，然后并加入两滴n，n-二甲基甲酰胺dmf，在第二设定温度下搅拌反应第二设定时间后，继续在第三设定温度下搅拌反应第三设定时间，得到反应物；
9、步骤4、将步骤3的反应物在减压下除去溶剂，纯化得到的绿色固体，即为检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物。
10、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤1中，所述cy7.5和无水哌嗪的摩尔比为1:3-5，搅拌反应条件为：在80℃下搅拌1h。
11、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤2中，所述将荧光团cy7.5-pq和三乙胺的摩尔比为1:4-6。
12、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤3中，所述2,4-二硝基苯磺酰氯与荧光团cy7.5-pq的摩尔比为1:2-4。
13、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤2中，第一设定温度为0℃，第一设定时间为30min；步骤3中，第二设定温度为45℃，第二设定时间为1h；第三设定温度为25℃，第三设定时间为4h.
14、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤4中，通过硅胶色谱柱，并利用ch2cl2和ch3oh的混合液进行梯度洗脱，进行纯化。
15、优选的，所述ch2cl2和ch3oh的体积比为100∶1至5∶1。
16、本专利技术还公开了如上所述的苯并花菁衍生物在检测硒代半胱氨酸sec中的应用。
17、进一步的，应用于生物体内外或线粒体外膜上硒代半胱氨酸sec的检测。
18、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
19、本专利技术化合物用于作为检测细胞或生物体内的sec的荧光探针化合物，因为secys的pka(seh)值为5.2，远低于其硫醇对应物半胱氨酸(cys)的pka(sh)值8.3，而且还因为硒醇比硫醇具有更强的亲核试剂性质，使探针在生理条件下对sec具有良好的选择性。探针在sec的存在下有明显的荧光变化，进而可以用于生物体内外sec的检测。本专利技术化合物用作荧光探针，可用于细胞内sec进行检测，还可对细胞内的线粒体进行定位，这对深入研究sec在生物体内的生理及病理作用有重要的生物医学意义。
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1.一种检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物，其特征在于，具有如下式(I)所示的结构式：
2.一种如权利要求1所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述Cy7.5和无水哌嗪的摩尔比为1:3-5，搅拌反应条件为：在80℃下搅拌1h。
4.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述将荧光团Cy7.5-Pq和三乙胺的摩尔比为1:4-6。
5.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述2,4-二硝基苯磺酰氯与荧光团Cy7.5-Pq的摩尔比为1:2-4。
6.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2中，第一设定温度为0℃，第一设定时间为30min；步骤3中，第二设定温度为45℃，第二设定时间为1h；第三设定温度为25℃，第三设定时间为4
7.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤4中，通过硅胶色谱柱，并利用CH2Cl2和CH3OH的混合液进行梯度洗脱，进行纯化。
8.根据权利要求7所述的检测硒代半胱氨酸Sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，所述CH2Cl2和CH3OH的体积比为100∶1至5∶1。
9.如权利要求1所述的苯并花菁衍生物在检测硒代半胱氨酸Sec中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，应用于生物体内外或线粒体外膜上硒代半胱氨酸Sec的检测。
...【技术特征摘要】
1.一种检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物，其特征在于，具有如下式(i)所示的结构式：
2.一种如权利要求1所述的检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述cy7.5和无水哌嗪的摩尔比为1:3-5，搅拌反应条件为：在80℃下搅拌1h。
4.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述将荧光团cy7.5-pq和三乙胺的摩尔比为1:4-6。
5.根据权利要求2所述的检测硒代半胱氨酸sec的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述2,4-二硝基苯磺酰氯与荧光团cy7.5-pq的摩尔比为1:2-4。
6.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：于法标，王振凯，窦昆，邢艳珑，王锐，刘恒，程子译，赵琳璐，蒋童蒙，王蕊，王俊杰，杜芳芳，郑小洁，王娟，金剑锋，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：
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