一种生物转化二醇型人参皂甙Rb1的方法技术

技术编号:4193291 阅读:208 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开一种生物转化二醇型人参皂甙Rb1的方法,用番茄叶霉(Cladosporium?fulvum)水解Rb?1,制备稀有人参皂甙Rd或者Rg3。具有选择性好、活性高,工艺简单,生产路线短,产品纯度高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用真菌发酵转化人参皂甙的方法,属于生物制药领域。技术背景人参是中国名贵中药。人参皂甙是人参重要的活性成分,具有多种生物活性。Rbl、Rd、Rg3均属于人参皂甙。Rbl的含量最多,其次是Rd,Rg3的含量最少。Rg3具有多种药理作用预防和治疗癌症,改善心脏血管功能,抗血小板凝集,保护脑神经细胞,提高集体免疫力,抗疲劳,抗血栓,保肝,降低胆固醇,且无依赖性,对正常组织无毒性;尤其是明显的抑制肿瘤复发和转移的功能,使其成为许多国家研究的热点。利用生物转化可以将Rbl转化成Rd或者Rg3。
技术实现思路
本专利技术提供一种利用真菌将含量高的人参皂甙Rbl转化为含量低、药效高的人参皂甙Rd或者Rg3的方法。 本专利技术的技术解决方案是利用番茄叶霉(Cladosporium fulvum)高效转化Rb成Rd或者Rg3。包括以下步骤 a)活化菌种无菌操作接种于V-8汁固体培养基、90cm培养皿,25。C恒温暗培养5-10天; b)刮取孢子无菌条件下,刮下平板上的菌丝和孢子,用无菌水冲洗平板若干次,将菌丝及孢子全部转移到无菌水中。向含有菌丝及孢子的无菌水中加入玻璃珠,室温振荡l-2h,使孢子充分分散。四层纱布过滤,滤液离心,弃去上清,得到孢子(沉淀); c)液体培养将孢子加入到V-8液体培养基(不含琼脂)中,28°C 、 150r/min恒温振荡培养; d)滤取新生菌丝将液体培养48h-72h的孢子悬液用四层纱布过滤,得到新生菌丝; e)生物转化将新生菌丝加入到含有人参皂甙的醋酸缓冲液中,28t:恒温振荡培养。每隔24小时取出1组转化液离心,弃去菌体,取上清液加水饱和正丁醇终止反应,TLC检测。 f)回收皂甙用正丁醇终止反应,同时皂甙产物被萃取至有机层中。将有机层水浴蒸干,然后用乙睛(乙睛水=35 : 65)溶解,进行柱层析分离制备稀有人参皂甙纯品。具体实施例方式1.活化菌种无菌操作接种于V-8汁固体培养基,25°。恒温暗培养5-10天。 2.刮取孢子无菌条件下,刮下平板上的菌丝和孢子,用无菌水冲洗平板若干次,将菌丝及孢子全部转移到无菌水中。向含有菌丝及孢子的无菌水中加入玻璃珠,室温振荡l-2h, 200rpm,使孢子充分分散。3.液体培养四层纱布过滤培养液,滤液离心,弃去上清,得到孢子;将孢子加入到200mL的V-8液体培养基中,稀释调整浓度为5 X 106个/ml, 28°C 、 150rpm恒温振荡培养。 4.扩大培养将液体培养48h-72h的孢子悬液用四层纱布过滤,得到新生菌丝。 5.生物转化将新生菌丝加入到400ml醋酸缓冲液(0. 2M, pH 5)中,调整其浓度3为5X 106个/ml,加入人参皂甙Rbl,终浓度为0. 25mg/ml, , 28恒温振荡培养8天。6.回收皂甙离心,6000rpm,20min,取上清液,按正丁醇与培养液体积比1 : 2的比例,加水饱和正丁醇,皂甙产物被萃取至有机层中。重复三次,合并有机液。将有机层水浴蒸干,然后用乙睛(乙睛水=35 : 65)溶解,进行HPLC分离制备稀有人参皂甙纯品,得到人参皂甙Rd 68mg。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物转化人参皂甙Rb1制备Rd或者Rg3的方法,其特征在于利用番茄叶霉(Cladosporium fulvum)水解人参皂甙Rb1,制备Rd或者Rg3。

【技术特征摘要】
一种生物转化人参皂甙Rb1制备Rd或者Rg3的方法,其特征在于利用番茄叶霉(Cladosporium fulvum)水解人参皂甙Rb1,制备Rd或者Rg3。2. 根据权利要求1所述的生物转化Rbl,制备Rd或者Rg3的方法,其特征在于包含以 下主要步骤a) 活化菌种将番茄叶霉(Cladosporium fulvum)无菌操作接种于V_8汁固体培养基, 25t:恒温暗培养5-10天。b) 刮取孢子无菌条件下,刮下平板上的菌丝和孢子,用无菌水冲洗平板若干次,将 菌丝及孢子全部转移到无菌水中;向含有菌丝及孢子的无菌水中加入玻璃珠,室温振荡 l-2h,使孢...

【专利技术属性】
技术研发人员:周义发台桂花赵雪淞高娟付玲孙成新
申请(专利权)人:东北师范大学
类型:发明
国别省市:82[中国|长春]

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