【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及用于刺激免疫应答的组合物和方法。更具体地，本专利技术涉及一种新颖重组多肽，以及用于刺激对人疱疹病毒的保护性或治疗性免疫应答的方法。
技术介绍
1、健康个体的原发性人巨细胞病毒(hcmv)通常是无症状的，从而建立伴有偶尔再激活和从粘膜表面脱落的潜伏状态。在一些情况下，原发性hcmv感染伴有单核细胞增多症样疾病的临床症状，类似于由爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barr virus)引起的临床症状。存在两种重要的临床环境，其中hcmv导致显著的发病率和死亡率。这些包含先天性原发性感染和免疫抑制成人体内的病毒的原发性或再激活。
2、hcmv包膜糖蛋白b(gb)蛋白是一种高度保守的糖蛋白，并且在介导病毒-宿主细胞融合病毒进入所有细胞类型中发挥重要作用。在hcmv融合和进入宿主细胞过程期间，hcmvgb与其它hcmv包膜蛋白(如gh、gl、go和ul128/ul130/ul131a)相互作用。hcmv gb蛋白的天然构象以三聚体的形式存在，所述三聚体随后在病毒包膜内二聚化。hcmv gb蛋白是一种高度免疫原性抗原，因为在所有自然感染的个体中都可以检测到gb特异性抗体。因此，gb蛋白被认为是用于疫苗开发的主要靶抗原。
3、在各种ii期临床试验中，最广泛测试的hcmv疫苗调配物含有弗林蛋白酶切割位点被去除的修饰，因为蛋白水解切割位点的保留干扰重组蛋白的产生(spaete,《移植学进展(transplant proc.)》,1991)。此类产生方法产生gb蛋白的单体可溶形式。值得注意的是，具有mf
4、因为hcmv gb蛋白的天然形式是三聚体，所以这被认为是用于引起中和抗体的最佳物理结构(fu等人,《疫苗(vaccine)》,2014)。最近的研究已经描述了完全三聚体重组hcmv gb蛋白的产生，所述蛋白在小鼠体内引起的血清hcmv中和抗体的滴度显著高于其单体对应物(cui等人,《疫苗》,2018)。这种三聚体重组蛋白的产生看到弗林蛋白酶切割位点被15个氨基酸(gly4ser)3接头序列替代以及6x his序列被添加到3'端以更好地实现蛋白质纯化。
技术实现思路
1、本专利技术至少部分地基于专利技术人的鉴定，即通过去除天然全长gb蛋白的跨膜结构域的至少一部分来产生多聚化成三聚体的经修饰的gb多肽。这些经修饰的gb多肽引起实质性免疫应答，并且因此在治疗和/或预防cmv感染和/或cmv相关疾病中具有明确的临床实用性。
2、因此，一方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括经修饰的gb多肽的经分离的同源三聚体。适当地，所述经修饰的gb多肽包括与人巨细胞病毒(hcmv)gb蛋白相对应的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列缺乏跨膜区的至少一部分。
3、在一些实施例中，跨膜结构域与seq id no:1中所示的天然全长多肽序列的氨基酸残基751至771相对应。在一些优选的实施例中，所述经修饰的gb多肽氨基酸序列基本上缺乏所述跨膜区。
4、在一些实施例中，所述经修饰的gb多肽包括与gb蛋白病毒粒子表面结构域的至少一部分相对应的第一区；以及与gb蛋白病毒粒子内结构域的至少一部分相对应的第二区。通常，所述病毒粒子表面结构域包括seq id no:1中所示的序列的氨基酸残基32至705。在一些实施例中，所述病毒粒子内结构域包括seq id no:1中所示的序列的氨基酸残基772至906。
5、在一些实施例中，所述经修饰的gb多肽进一步包括n末端信号肽。在一些实施例中，所述信号肽促进从细胞中分泌所述经修饰的gb多肽。在一些实施例中，所述信号肽衍生自免疫球蛋白同型。在此类型的一些实施例中，所述免疫球蛋白同型选自以下中的任一种：iga、igd、ige、igg和igm。在一些优选的实施例中，所述信号肽包括seq id no:7中所示的氨基酸序列、由其组成或由其组成。
6、在一些实施例中，所述经修饰的gb多肽不包含弗林蛋白酶切割位点基序。在此类型的一些实施例中，与野生型hcmv gb蛋白的位置456相对应的氨基酸残基(即，seq id no:1中所示的序列)是除精氨酸以外的氨基酸。通常，与野生型hcmv gb蛋白的位置456相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。在相同实施例中的一些实施例和其它一些实施例中，与野生型hcmv gb蛋白的位置458相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。通常，与野生型hcmv gb蛋白的位置458相对应的氨基酸残基是苏氨酸或谷氨酰胺。在相同实施例中的一些实施例和一些其它实施例中，与野生型hcmv gb蛋白的位置459相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。通常，与野生型hcmv gb蛋白的位置459相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。
7、在一些实施例中，所述经修饰的gb多肽同源三聚体二聚化以形成六聚体。
8、在一些实施例中，所述经修饰的gb多肽复合物存在于融合前确认中。
9、另一方面，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码经修饰的gb多肽，所述经修饰的gb多肽包括与人巨细胞病毒(hcmv)gb蛋白相对应的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，其中所述氨基酸序列缺乏所述跨膜区的至少一部分。
10、又另一方面，本专利技术提供了一种表达载体，所述表达载体包含上文和/或本文其它地方描述的核酸分子，所述核酸分子与调节元件可操作地连接。在一些实施例中，所述调节元件是启动子。
11、在仍又另一方面，本专利技术提供了一种细胞，所述细胞包括上文和/或本文其它地方描述的表达载体。
12、另一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括制剂，所述制剂包括与hcmv包膜gb蛋白相对应的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，其中所述氨基酸序列缺乏跨膜区的至少一部分；以及药学上可接受的载剂、赋形剂和/或稀释剂。在一些实施例中，所述药物组合物可以进一步包括佐剂。
13、在一些实施例中，跨膜结构域与seq id no:1中所示的天然全长多肽序列的氨基酸残基751至771相对应。
14、在一些实施例中，所述经修饰的多肽进一步包括n末端信号肽。在一些实施例中，所述信号肽促进从细胞中分泌所述多肽。
15、在一些实施例中，所述信号肽衍生自免疫球蛋白同型。在此类型的一些实施例中，所述免疫球蛋白同型选自以下中的任一种：iga、igd、ige、igg和igm。在一些优选的实施例中，所述信号肽包括seq id no:7中所示的氨基酸序列、由其组成或由其组成。
16、在一些实施例中，所述多肽包括与gb病毒粒子表面结构域的至少一部分相对应的第一区；以及与gb病毒粒子内结构域的至少一部分相对应的第二区。通常，所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其包括经修饰的gB多肽的经分离的同源三聚体。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述经修饰的gB多肽包括与人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白B(gB)相对应的氨基酸序列，其中所述经修饰的gB多肽缺乏跨膜结构域的至少一部分。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述跨膜结构域与SEQ ID NO:1中所示的天然全长多肽序列的氨基酸残基751至771相对应。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的gB多肽进一步包括N末端信号肽。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述信号肽使得从细胞中分泌所述经修饰的gB多肽。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的组合物，其中所述信号肽源自免疫球蛋白同型。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述免疫球蛋白同型选自以下中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。
8.根据权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述信号肽包括SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
9.根据权利要求1
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述天然gB蛋白病毒粒子表面结构域包括SEQID NO:5中所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的组合物，其中所述gB蛋白病毒粒子表面结构域不包括疏水性膜近侧区。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的组合物，其中所述gB蛋白病毒粒子内结构域包括SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述多肽不包括弗林蛋白酶切割位点基序。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置456相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置456相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置458相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置458相对应的氨基酸残基是苏氨酸或谷氨酰胺。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置459相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物，其中与野生型HCMV gB的位置459相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的组合物，其中所述氨基酸序列包括SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的组合物，其中三聚体经修饰的gB多肽复合物形成二聚体。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物，其中与天然gB多肽相比，所述经修饰的gB多肽增强免疫原性。
23.一种核酸组合物，其编码权利要求1至22中任一项所定义的所述经修饰的gB多肽。
24.一种表达载体，其编码任一权利要求23的核酸，所述核酸与调节元件可操作地连接。
25.一种细胞，其包括根据权利要求24所述的表达载体。
26.一种药物组合物，其包括呈三聚体形式的经修饰的gB多肽的基本上同质的制剂；以及药学上可接受的载剂、稀释剂和/或赋形剂。
27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述经修饰的gB多肽包括与人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白B(gB)相对应的氨基酸序列，其中所述经修饰的gB多肽缺乏跨膜结构域的至少一部分。
28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述跨膜结构域对应于SEQ ID NO:1中所示的天然全长多肽序列的氨基酸残基751至771。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的gB多肽进一步包括N末端信号肽。
30.根据权利要求29所述的组合物，其中所述信号肽使得从细胞中分泌所述经修饰的gB多肽。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的组合物，其中所述信号肽源自免疫球蛋白同型。
32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述免疫球蛋...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，其包括经修饰的gb多肽的经分离的同源三聚体。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述经修饰的gb多肽包括与人巨细胞病毒(hcmv)糖蛋白b(gb)相对应的氨基酸序列，其中所述经修饰的gb多肽缺乏跨膜结构域的至少一部分。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述跨膜结构域与seq id no:1中所示的天然全长多肽序列的氨基酸残基751至771相对应。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的gb多肽进一步包括n末端信号肽。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述信号肽使得从细胞中分泌所述经修饰的gb多肽。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的组合物，其中所述信号肽源自免疫球蛋白同型。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述免疫球蛋白同型选自以下中的任一种：iga、igd、ige、igg和igm。
8.根据权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述信号肽包括seq id no:7中所示的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的gb多肽包括与天然gb蛋白病毒粒子表面结构域的至少一部分相对应的第一区；以及与天然gb蛋白病毒粒子内结构域的至少一部分相对应的第二区。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述天然gb蛋白病毒粒子表面结构域包括seqid no:5中所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的组合物，其中所述gb蛋白病毒粒子表面结构域不包括疏水性膜近侧区。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的组合物，其中所述gb蛋白病毒粒子内结构域包括seq id no:6中所示的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述多肽不包括弗林蛋白酶切割位点基序。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置456相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置456相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置458相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置458相对应的氨基酸残基是苏氨酸或谷氨酰胺。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置459相对应的氨基酸残基是除精氨酸以外的氨基酸。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物，其中与野生型hcmv gb的位置459相对应的氨基酸残基是谷氨酰胺或苏氨酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的组合物，其中所述氨基酸序列包括seq id no:4中所示的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的组合物，其中三聚体经修饰的gb多肽复合物形成二聚体。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物，其中与天然gb多肽相比，所述经修饰的gb多肽增强免疫原性。
23.一种核酸组合物，其编码权利要求1至22中任一项所定义的所述经修饰的gb多肽。
24.一种表达载体，其编码任一权利要求23的核酸，所述核酸与调节元件可操作地连接。
25.一种细胞，其包括根据权利要求24所述的表达载体。
26.一种药物组合物，其包括呈三聚体形式的经修饰的gb多肽的基本上同质的制剂；以及药学上可接受的载剂、稀释剂和/或赋形剂。
27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述经修饰的gb多肽包括与人巨细胞病毒(hcmv)糖蛋白b(gb)相对应...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·卡纳，V·达萨里，
申请(专利权)人：昆士兰医学研究所理事会，
类型：发明
国别省市：
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