【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品检测，具体涉及一种基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的组合物及方法。
技术介绍
1、食品掺假是指在未注明标签的情况下，添加或减少了改变食品成分、影响营养价值，甚至不被社会所接受的物质。肉制品是人类的重要营养来源,为人体提供必需的氨基酸和蛋白质。不真实的肉制品产品标签，可能避开了检验检疫，使人畜共患的病毒传入人体，进而造成严重的公共卫生风险。目前对于肉类产品的快速消费，现有的方法很难满足大批量产品检测的需求。因此，亟需建立快速、有效、准确和高通量的检测技术，以防止肉制品掺假销售。
2、脱氧核糖核酸(dna)是大多数生物体的遗传物质，相比于蛋白质具有较高的稳定性和特异性，因此在现有的掺假检测分析方法中，基于dna的肉种类的检测技术运用最为广泛，其中包括传统pcr、荧光定量pcr(quantitative real-time pcr，qpcr)和数字pcr(digital pcr，dpcr)等pcr检测技术。传统pcr技术具有操作简单、成本低廉的优点，常被用作物种鉴定的首选检测方法，但其需要依赖电泳等后续操作，具有检测时间较长的缺点。荧光定量pcr技术和数字pcr技术相比于传统pcr无需后续分析，且可定量检测，但其成本较高、设备昂贵以及对人员专业程度要求较高，往往不适用现场检测分析。近年来，随着pcr衍生技术的发展，等温扩增技术如环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermalamplification，lamp)技术已被应用于加工肉制品中的肉的种类鉴定，尽管该方法在等温条
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的组合物及方法，以解决现有技术中对肉制品进行鼠源性成分检测时存在、检测时间较长、成本较高、设备昂贵、对人员专业程度要求较高、检测方法优化较难、扩增时间长容易出现假阳性的问题。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的组合物，基于rt-raa技术所述组合物能够用于检测肉制品中鼠源性成分；所述组合物包括引物和探针；其中，所述引物的序列为：
4、大鼠：
5、引物cox3-f：atcatccgtgaaggaacataccaaggccacc；
6、引物cox3-r：taattcctgttgggggtcagcaaccgccta；
7、小鼠：
8、引物16s-f：ttaacaaaacagcttttaaccattgtaggcc；
9、引物16s-r：tattgcctatagtctgattaactaacaatgg；
10、所述探针的序列为：
11、大鼠探针cox3-p：
12、tacggaataatcctgtttattgtctccgaag-rox-a-thf-bhq2-cttctttgccggatt；
13、小鼠探针16s-p：
14、aacttcctaaacttaaaattgggttaatcta-fam-a-thf-c-bhq1-ttatagatgcaacac。
15、本专利技术提供了一种基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术所述组合物。其中，还包括水化缓冲液、mgac缓冲溶液以及小鼠dna和大鼠dna；其中，大鼠引物cox3-f的浓度为400～600nmol/l，大鼠引物cox3-r的浓度为400～600nmol/l，小鼠引物16s-f的浓度为200～400nmol/l，小鼠引物16s-r的浓度为200～400nmol/l；大鼠探针cox3-p的浓度为120～320nmol/l，小鼠探针16s-p的浓度为60～120nmol/l。
16、本专利技术提供了一种基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的方法，具体包括如下步骤：
17、步骤1：获取待测样品；
18、步骤2：从步骤1得到的待测样品中提取基因组dna备用；
19、步骤3：步骤2提取的dna用本专利技术所述试剂盒进行扩增；其中，扩增的反应体系包括：大鼠引物cox3-f的浓度为400～600nmol/l，大鼠引物cox3-r的浓度为400～600nmol/l，小鼠引物16s-f的浓度为200～400nmol/l，小鼠引物16s-r的浓度为200～400nmol/l；大鼠探针cox3-p的浓度为120～320nmol/l，小鼠探针16s-p的浓度为60～120nmol/l；水化缓冲液、mgac缓冲溶液以及小鼠dna和大鼠dna；所述反应体系在35～39℃条件下进行30秒/循环、40个循环的扩增；
20、步骤4：实时荧光检测系统记录扩增产物的荧光信号强度变化，获取荧光曲线，确定设定的时间内达到设定阈值所需的扩增循环数，判断待测样品中是否含有鼠源性成分。
21、优选地，在步骤3中，增扩的反应体系中，大鼠引物cox3-f的浓度为400nmol/l，大鼠引物cox3-r的浓度为400nmol/l，小鼠引物16s-f的浓度为200nmol/l，小鼠引物16s-r的浓度为200nmol/l；大鼠探针cox3-p的浓度为200nmol/l，小鼠探针16s-p的浓度为60nmol/l。
22、优选地，所述反应体系在39℃条件下进行扩增。
23、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
24、本专利技术基于大鼠的cox3基因和小鼠的16s rrna基因序列，发现了具有特异性强、稳定性好的组合物，并以此为基础建立了real-time rpa反应检测体系，所建立的real-time rpa特异性强、稳定性好，多重体系分别检测大鼠和小鼠源性成分的检出限分别为0.5％和0.2％，同步检测两种源性成分检出限低至0.5％，并在模拟熟肉制品中同步检出限仍为0.5％。本专利技术所述方法检测速度快，对温度要求低，可用于肉制品中大鼠和小鼠源性成分的检测，为现场快速肉制品掺假检测提供了一种快捷、使用的检测方法。
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1.基于两重Rt-RAA技术检测肉制品中鼠源性成分的组合物，其特征在于，所述组合物能够用于检测肉制品中鼠源性成分；所述组合物包括引物和探针；其中，所述组合物的序列分别如下：
2.一种基于两重Rt-RAA技术检测肉制品中鼠源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述组合物。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，还包括水化缓冲液、MgAc缓冲溶液以及小鼠DNA和大鼠DNA；其中，大鼠引物Cox3-F的浓度为400～600nmol/L，大鼠引物Cox3-R的浓度为400～600nmol/L，小鼠引物16S-F的浓度为200～400nmol/L，小鼠引物16S-R的浓度为200～400nmol/L；大鼠探针Cox3-P的浓度为120～320nmol/L，小鼠探针16S-P的浓度为60～120nmol/L。
4.一种基于两重Rt-RAA技术检测肉制品中鼠源性成分的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，在步骤3中，增扩的反应体系中，大鼠引物Cox3-F的浓度为400nmol/L，大鼠引
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述反应体系在39℃条件下进行扩增。
...【技术特征摘要】
1.基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的组合物，其特征在于，所述组合物能够用于检测肉制品中鼠源性成分；所述组合物包括引物和探针；其中，所述组合物的序列分别如下：
2.一种基于两重rt-raa技术检测肉制品中鼠源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述组合物。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，还包括水化缓冲液、mgac缓冲溶液以及小鼠dna和大鼠dna；其中，大鼠引物cox3-f的浓度为400～600nmol/l，大鼠引物cox3-r的浓度为400～600nmol/l，小鼠引物16s-f的浓度为200～400nmol/l，小鼠引物16s-r的浓度为200～400nmol/l；大鼠探针cox...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘明明，周朝旭，肖昭竞，李根容，袁磊，颜海燕，
申请(专利权)人：重庆市计量质量检测研究院，
类型：发明
国别省市：
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