鸡新城疫、Ｈ９亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其特征是，其制备步骤为：①生产用毒种的制备：②制苗用病毒液的制备：③取灭活的浓缩２倍ＮＤＶ Ｌａ Ｓｏｔａ株病毒液和ＡＩＶ ＨＬ株病毒液等量混合，取混合后的病毒液９７～９９（体积份）份，加入吐温－８０ １～３份（体积份），混合制成水相；取白油９６份（体积份）、司本－８０ ４份（体积份）、硬脂酸铝２份（体积份）制成油相；④将水相与油相混合，混合之比为１∶１．５～２．５，一起混合乳化即制成。该方法制成的禽流感二联灭活疫苗能有效解决预防目前鸡新城疫、禽流感Ｈ９亚型引起的发病，并且效果好等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及家禽类生物制药
，尤其涉及一种鸡新城疫、H9亚型禽 流感二联灭活疫苗的制备方法。
技术介绍
新城疫俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病，主要 经呼吸道和消化道感染，各种年龄的鸡均可感染，以雏鸡最为严重，发病率和 死亡率可达80%以上；禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染/或疾病综合症。感染后的舍饲禽包括家禽可表现出临诊症状、呼吸系统疾病、产蛋量 下降、致死率很高的急性出血性疾病，也可表现为亚临诊症状、轻的呼吸系统 感染到无症状带毒等多种流行形式。根据禽流感致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。最近国内外由H5N1 血清型引起的禽流感称高致病性禽流感，发病率和死亡率都很高，危害巨大。 1998年9月以来，在部分地区的鸡场，鸡群先后出现了呼吸道症状，普遍腹泻， 产蛋下降，产软皮蛋，初步诊断为中等毒力以下H9亚型禽流感。近几年，H5 亚型禽流感的疫苗广泛免疫接种，而H9亚型禽流感受到忽视，致使H9亚型禽 流感又呈流行趋势。联苗是指不同种微生物或其代谢产物组成的疫苗，联苗可简化接种程序， 减少接种动物应激反应的次数，此外对于产蛋鸡，尤其是种鸡应尽可能避免或减 少在产蛋期间做免疫接种，而鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗使用剂量与单苗 相当，但其效力与单苗相同，具有使用简便、接种程序简单等优点，减少疫苗的 免疫次数，避免家禽产生不必要的应激，达到事半功倍的效果，联苗复配最关 键的是抗原最佳配比问题。
技术实现思路
为了解决现有技术不足，本专利技术的目的是提供一种鸡新城疫、H9亚型禽流 感二联灭活疫苗的制备方法，以预防目前鸡新城疫、禽流感H9亚型引起的发病率高、死亡率高的问题，使二种抗原间的免疫干扰尽最大可能降低，降低畜禽 死亡率，减少养殖专业户的损失，造福人类。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案所述鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其制备步骤为① 、生产用毒种的制备将NDV La Sota株用灭菌的生理盐水作10—4稀释， 将AIVHL株毒种用灭菌的生理盐水作1(T3稀释，分别接种9 10日龄SPF鸡胚， 孵育，收获；② 、制苗用病毒液的制备将NDV La Sota株生产毒种用灭菌的生理盐水 作10—4稀释，将AIVHL株生产毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分别接种9 IO日龄易感鸡胚，孵育，收获。收获的病毒液分别作2倍浓縮、灭活；◎、取灭活的浓縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合， 取混合后的病毒液97 99份(体积份)，加入吐温-80 1 3份(体积份)，混合制 成水相；取白油96份(体积份)、司本-80 4份(体积份)、硬脂酸铝2份(体积份) 制成油相； 、将水相与油相混合，混合之比为1:1.5 2.5， 一起混合乳化，分装， 贴签，装箱、入库。所述对病毒液进行浓縮是指采用纤维膜超滤浓縮法，该方法可提高免疫抗 原在疫苗终产品的浓度达2倍以上，纤维膜超滤浓縮装置，设有二级孔径不同 的纤维滤柱， 一级滤柱的纤维可滤除部分细菌和杂质，二级超滤株的中空纤维 可截留病毒粒子。所述灭活是对NDV La sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液，在35 38C进行12 17小时灭活。本专利技术所采用的NDV La Sota株、AIV HL株毒种均购自中国兽医药品监察所。由于采用了上述的技术方案，本专利技术具有如下积极效果① 、其浓縮工艺可提高免疫抗原在疫苗终产品的浓度，本专利技术经过长期实验 采用纤维膜超滤浓縮法，可是使效价达大幅提高。② 、本专利技术中NDVLa sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液，在35 38'C灭活12 17小时，可彻底灭活病毒，并不影响其免疫原性。③ 、本专利技术采用的佐剂是白油、吐温-80、司盘-80等。实验证明含油相和水 相乳化剂的疫苗比仅含油相的疫苗免疫效果好，可使抗原充分混合均匀，不易 分层，在37C条件下更稳定，黏度也低。具体实施例方式实施例1:鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其制备步骤为 ①、生产用毒种的制备将NDV La Sota株用灭菌的生理盐水作10—4稀释， 将AIV HL株毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分别接种9 10日龄SPF鸡胚， 孵育，收获；②、制苗用病毒液的制备将NDV La Sota株生产毒种用灭菌的 生理盐水作10—4稀释，将AIV HL株生产毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分 别接种9 10日龄易感鸡胚，孵育，收获，对收获的病毒液分别采用纤维膜超滤 浓縮法，作2倍浓縮，对NDV La sota和AIVHL株采用0. 05%甲醛溶液，在35 。C进行17小时灭活；③、取灭活的浓縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合，取混合后的病毒液97(体积份)份，加入吐温-80 3份(体 积份)，混合制成水相；取白油96份(体积份)、司本-804份(体积份)、硬脂酸 铝2份(体积份)制成油相；④、将水相与油相混合，混合之比为1:1.5， 一起混 合乳化，分装，贴签，装箱、入库。 实施例2:鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其制备步骤为 、生产用毒种的制备将NDV La Sota株用灭菌的生理盐水作10—4稀释， 将AIV HL株毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分别接种9 10日龄SPF鸡胚， 孵育，收获；②、制苗用病毒液的制备将NDV La Sota株生产毒种用灭菌的生理盐水作10—4稀释，将AIV HL株生产毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分 别接种9 10日龄易感鸡胚，孵育，收获，对收获的病毒液分别采用纤维膜超滤 浓縮法，作2倍浓縮，对NDVLasota和AIVHL株采用O. 1%甲醛溶液，在37°。 进行16小时灭活；③、取灭活的浓縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株 病毒液等量混合，取混合后的病毒液98(体积份)份，加入吐温-80 2份(体积份)， 混合制成水相；取白油96份(体积份)、司本-80 4份(体积份)、硬脂酸铝2份(体 积份)制成油相；④、将水相与油相混合，混合之比为1:2.0， 一起混合乳化， 分装，贴签，装箱、入库。 实施例3:鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其制备步骤为 ①、生产用毒种的制备将NDV La Sota株用灭菌的生理盐水作10—4稀释， 将AIVHL株毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分别接种9 10日龄SPF鸡胚， 孵育，收获；②、制苗用病毒液的制备将NDV La Sota株生产毒种用灭菌的 生理盐水作10—4稀释，将AIV HL株生产毒种用灭菌的生理盐水作10—3稀释，分 别接种9 10日龄易感鸡胚，孵育，收获，对收获的病毒液分别采用纤维膜超滤 浓縮法，作2倍浓縮，对NDV La sota和AIVHL株采用0. 15%甲醛溶液，在38 。C进行14小时灭活；③、取灭活的浓縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合，取混合后的病毒液99(体积份)份，加入吐温-80 1份(体积 份)，混合制成水相；取白油96份(体积份)、司本-8本文档来自技高网...
【技术保护点】
鸡新城疫、Ｈ９亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其特征是，其制备步骤为： ①、生产用毒种的制备：将ＮＤＶ Ｌａ Ｓｏｔａ株用灭菌的生理盐水作１０↑［－４］稀释，将ＡＩＶ ＨＬ株毒种用灭菌的生理盐水作１０↑［－３］稀释，分别接种９～１０ 日龄ＳＰＦ鸡胚，孵育，收获； ②、制苗用病毒液的制备：将ＮＤＶ Ｌａ Ｓｏｔａ株生产毒种作用灭菌的生理盐水作１０↑［－４］稀释，将ＡＩＶ ＨＬ株生产毒种作用灭菌的生理盐水作１０↑［－３］稀释，分别接种９～１０日龄易感鸡胚，孵育，收获； 收获的病毒液分别作２倍浓缩、灭活； ③、取灭活的浓缩２倍ＮＤＶ Ｌａ Ｓｏｔａ株病毒液和ＡＩＶ ＨＬ株病毒液等量混合，取混合后的病毒液９７～９９（体积份）份，加入吐温－８０ １～３份（体积份），混合制成水相；取白油９６份（体积份）、司 本－８０４份（体积份）、硬脂酸铝２份（体积份）制成油相； ④、将水相与油相混合，混合之比为１∶１．５～２．５，一起混合乳化，分装，贴签，装箱、入库。
【技术特征摘要】
1、鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其特征是，其制备步骤为①、生产用毒种的制备将NDV La Sota株用灭菌的生理盐水作10-4稀释，将AIV HL株毒种用灭菌的生理盐水作10-3稀释，分别接种9～10日龄SPF鸡胚，孵育，收获；②、制苗用病毒液的制备将NDV La Sota株生产毒种作用灭菌的生理盐水作10-4稀释，将AIV HL株生产毒种作用灭菌的生理盐水作10-3稀释，分别接种9～10日龄易感鸡胚，孵育，收获；收获的病毒液分别作2倍浓缩、灭活；③、取灭活的浓缩2倍NDV La Sot...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔荣岑，习向锋，孙进忠，荣骏弓，闵亚杰，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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