【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、流感是美国成年人死亡的主要原因。每年约有36,000人死于流感，并且超过200,000人住院。流感是高度传染性疾病，其通过咳嗽、打喷嚏以及与携带病毒的物体(诸如门把手和电话)直接物理接触而传播。流感的症状包括发烧、极度疲劳、头痛、发冷和身体疼痛；大约50％的感染者没有症状但仍具有传染性。只要正在流行的病毒株的抗原性与疫苗的抗原性相匹配，免疫接种在65岁以下的健康人群中在预防流感方面50％至60％有效。
2、接种疫苗是预防流感的主要方法，并且目前可用的是减毒活病毒疫苗和灭活(杀灭)病毒疫苗。通常鼻内施用的活病毒疫苗激活免疫系统的所有阶段，并可以刺激对多种病毒抗原的免疫应答。因此，活病毒的使用克服了在制备灭活的病毒疫苗期间可能发生的病毒抗原破坏的问题。此外，活病毒疫苗产生的免疫力通常比灭活疫苗诱导的免疫力更持久、更有效且交叉反应更强，并且活病毒疫苗的生产成本低于灭活病毒疫苗。然而，减毒病毒的突变通常是不明确的，并且回复(reversion)是一个问题。
技术实现思路
1、在一方面，本专利技术提供了具有突变体bm2基因的重组流感b病毒，所述突变体bm2基因包括seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4或seq id no:5。在一些实施方式中，bm2基因中的突变导致病毒不能表达bm2蛋白，或导致病毒表达截短的bm2蛋白。在一些实施方式中，在体外宿主细胞系统中至少10代，突变体bm2基因不回复为编码功能性bm2
2、在一方面，本公开提供了组合物，包含：具有突变体bm2基因的重组流感b病毒，所述突变体bm2基因包括seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4或seq idno:5。在一些实施方式中，bm2基因的突变导致病毒不能表达bm2蛋白，或导致病毒表达截短的bm2蛋白。在一些实施方式中，病毒在感染有所述病毒的哺乳动物中引发免疫应答。在一些实施方式中，病毒对于感染有所述病毒的哺乳动物是非致病性的。在一些实施方式中，组合物还包含佐剂。
3、在一方面，本公开提供了用于繁殖重组流感b病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4或seq id no:5的重组流感病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞经修饰以产生功能型的流感bm2基因，从而向所述病毒反向地提供基因产物。在一些实施方式中，该方法还包括分离子代病毒颗粒。在一些实施方式中，该方法还包括将病毒颗粒配制为疫苗。在一些实施方式中，病毒不能表达bm2蛋白，或表达截短的bm2蛋白。在一些实施方式中，病毒在感染有病毒的哺乳动物中引发免疫应答。在一些实施方式中，病毒对于感染有所述病毒的哺乳动物是非致病性的。在一些实施方式中，在宿主细胞中至少10代，突变体bm2基因不回复为编码功能性bm2蛋白的野生型序列或非野生型序列持续。在一些实施方式中，宿主细胞是mdck细胞或vero细胞。
4、在一方面，本公开提供了用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生野生型的流感bm2基因从而向所述病毒反向地提供bm2基因产物的mdck细胞。
5、在一方面，本公开提供了用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生选自由seq id no:28、seq id no:29、seqid no:30、seq id no:31和seq id no:32组成的组的嵌合型的流感a m2基因和流感b bm2基因从而向所述病毒反向地提供嵌合的m2:bm2基因产物的vero细胞。
6、在一方面，本公开提供了用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生包含seq id no:27的密码子优化型的bm2基因从而向所述病毒反向地提供bm2基因产物的vero细胞。
7、在一方面，本公开提供了包含突变体bm2蛋白的重组流感a病毒。
8、在一方面，本公开提供了用于繁殖重组流感病毒的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生由选自由seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30、seqid no:31和seq id no:32组成的组的cdna序列编码的基因产物的vero细胞。在一些实施方式中，重组流感病毒是包含如seq id no:33中所示的突变体m2基因的流感a病毒。在一些实施方式中，重组流感病毒是包含如seq id no:4或seq id no:6中所示的突变体bm2基因的流感b病毒，并且其中，vero细胞经修饰以产生由seq id no:27编码的基因产物。
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1.一种用于繁殖重组流感A病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含SEQ ID NO:33的重组流感A病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生野生型的流感BM2基因从而向所述病毒反向地提供BM2基因产物的MDCK细胞。
2.一种用于繁殖重组流感A病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含SEQ ID NO:33的重组流感A病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生选自由SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ IDNO:31和SEQ ID NO:32组成的组的嵌合型的流感A M2基因和流感B BM2基因从而向所述病毒反向地提供嵌合的M2:BM2基因产物的Vero细胞。
3.一种用于繁殖重组流感A病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含SEQ ID NO:33的重组流感A病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生包含SEQ ID NO:27的密码子优化型的BM2基因从
4.一种重组流感A病毒，包含突变体BM2蛋白。
5.一种用于繁殖重组流感病毒的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生选自由SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31和SEQ IDNO:32组成的组的cDNA序列编码的基因产物的Vero细胞。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述重组流感病毒是包含如SEQ ID NO:33中所示的突变体M2基因的流感A病毒。
7.根据权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述重组流感病毒是包含如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6中所示的突变体BM2基因的流感B病毒，并且其中，所述Vero细胞经修饰以产生由SEQ ID NO:27编码的基因产物。
...【技术特征摘要】
1.一种用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生野生型的流感bm2基因从而向所述病毒反向地提供bm2基因产物的mdck细胞。
2.一种用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细胞足够的时间，其中，所述宿主细胞是经修饰以产生选自由seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30、seq idno:31和seq id no:32组成的组的嵌合型的流感a m2基因和流感b bm2基因从而向所述病毒反向地提供嵌合的m2:bm2基因产物的vero细胞。
3.一种用于繁殖重组流感a病毒的方法，包括：使宿主细胞与包含seq id no:33的重组流感a病毒接触；以及在适合于病毒复制的条件下孵育所述宿主细...
【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·J·莫泽，八田靖子，帕穆克·比尔赛尔，
申请(专利权)人：复尔健有限公司，
类型：发明
国别省市：
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