【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗评价，特别是一种鸡滑液支原体疫苗评价方法，还涉及实现所述评价方法的鸡滑液支原体攻毒模型。
技术介绍
1、滑液支原体(mycoplasma synoviae,ms)是感染禽类的一种重要的致病性支原体，是危害禽类养殖最严重的支原体之一。ms感染主要引起关节炎、滑膜炎等，可引起鸡精神沉、跛行、消瘦，跗关节、趾关节、胧骨突肿胀，鸡冠萎缩，绿色粪便，生长发育迟缓等症状，还可以引起免疫抑制导致新城疫、传染性支气管炎、大肠杆菌和链球菌等的继发感染。目前，对鸡滑液支原体疫苗进行疫苗效力评价较困难，这是由于现有ms攻毒模型不稳定，导致疫苗有效性难以评价。疫苗的效力评价模型是制约该疫苗研发的瓶颈。因此，建立标准攻毒模型评价菌株毒力，建立科学的效力评价模型评价疫苗的有效性对于我国ms疫苗的开发和质量评价有重要意义。
2、尹丽萍等人在《鸡滑液囊支原体致病模型建立与灭活疫苗免疫效果评价》(中国兽医杂志，2023,59(8)：67-71)公开了一株lhms106滑液支原体的攻毒模型，该模型在青岛易邦生物制品有限公司开发的鸡滑液支原体灭活疫苗(ybf株)攻毒模型的基础上，将临床症状总体划分为5个等级，但最终仍是以鸡群脚垫肿胀比例作为评价依据，仍难以解决有效评价产品质量的难题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种有效性和准确性更高的鸡滑液支原体疫苗评价方法。
2、为了实现上述方法，本专利技术首先分离得到了一株鸡滑液支原体ms-yy株，该支原体于2024年3月19
3、本专利技术还提供上述鸡滑液支原体ms-yy株在制备鸡滑液支原体感染动物模型中的应用。
4、本专利技术提供一种鸡滑液支原体动物模型，取浓度为104ccu/ml鸡滑液支原体ms-yy株的菌液，足垫接种spf鸡0.2ml/只。
5、作为一种优选的实施方式，所述spf鸡是60日龄spf鸡。
6、本专利技术还提供上述鸡滑液支原体动物模型在评价鸡滑液支原体疫苗效力中的应用。
7、基于此，本专利技术还提供一种鸡滑液支原体疫苗评价方法，所述方法包括：
8、(1)免疫及攻毒
9、以待评价的鸡滑液支原体疫苗免疫28d spf鸡，每组10只，免疫后28d，以10只未免疫的相同日龄的spf鸡作为对照组，分别脚垫攻毒毒标准攻毒鸡滑液支原体ms-yy菌株稀释液，攻毒剂量为0.2ml/只，菌液浓度为104ccu/ml，观察21d；
10、(2)发病程度分类
11、分别获取免疫组鸡和对照组鸡的打分分数，计算病变减少率：
12、病变减少率＝(对照组打分-免疫组打分)/对照组打分
13、(3)获得增重率
14、对免疫组和对照组，分别在攻毒前测定鸡原始体重，攻毒21d后记录鸡免疫后体重，计算增重比：
15、增重比＝免疫组增重/对照组增重
16、(4)效力评价
17、以步骤(2)得到的病变减少率和步骤(3)的增重比作为效力评价指标，病变减少率越高、增重比越高表明疫苗的效力越好。
18、其中，步骤(1)中，通过通过注射免疫28d spf鸡，得到免疫组。
19、其中，步骤(3)中，打分标准为：
20、精神状态0～4分、每侧脚垫0～6分，每侧指关节、跗关节、翅关节各0～4分，胧骨突0～5分，共计45分，死亡以最高分计算；
21、其中：精神状态(0-4)：0分表示正常；1分表示精神沉郁；2分表示跛行；3分表示缩头，反应迟缓、消瘦、喜卧；4分表示卧地不起；
22、脚垫(0-6分)：0分表示正常；1表示轻微肿胀，脚垫相对健康鸡硬；2表示明显肿胀，是原脚垫2倍大，但不影响走路；3分表示非常明显肿胀，是原脚垫3倍大；4分表示严重肿胀，走路跛行；5分表示脚掌、脚背指缝间均肿胀，有肉芽肿和明显积液；6分表示脚垫极度肿胀，脚不敢着地；
23、趾关节(0-4分)：0分表示正常；1分表示关节轻微肿胀，不影响功能；2分表示明显肿胀；3分表示严重肿胀，有积液；4分表示非常严重肿胀，有明显积液，按压有波动感；
24、跗关节(0-4分)：0分表示正常；1分表示关节轻微肿胀；2分表示明显肿胀；3分表示严重肿胀，有积液和波动感；4分表示非常严重肿胀，有大量积液和波动感；
25、翅关节(0-4分)0分表示正常；1分表示关节轻微肿胀；2分表示明显肿胀，与对照比增厚，看不见囊肿；3分表示严重肿胀，有积液和波动感；4分表示非常严重肿胀，有大量积液和波动感；
26、胧骨突(0-5分)：1分表示轻微肿胀；2分表示明显肿胀；3分表示有较多积液和波动感，长轴约2cm；4分表示有大量积液，明显波动感，长轴超过3cm；5分表示可以摸到脓肿包及干酪样渗出凝块。
27、本专利技术分离、纯化得到一株鸡滑液支原体ms-yy株。该株毒力较强，单独感染即可使鸡出现典型的滑液支原体的病变，无需额外接种nd-ib疫苗或先感染某种呼吸道疾病(如ndv或ibv)造成免疫力下降时才能复制出病例。
28、毒力方面，以0.2ml 103ccu/ml的ms-yy菌液经卵黄囊接种鸡胚可致死鸡胚，0.2ml1～102ccu/ml菌液感染鸡胚，虽不致死鸡胚，但孵化21d后不能出壳，最终死亡。足垫注射0.2ml/只104ccu/ml的菌液可致鸡稳定发病，出现典型的滑液囊支原体的症状，且死亡率约10％。与现有的国内唯一批准上市的鸡滑液囊支原体灭活疫苗相比(现有疫苗的生产和检验用菌株0.2ml/只，注射106ccu/ml菌液可致鸡7/10发病，无死亡病例的报道)，本专利技术的ms-yy株毒力更强，且经多次测毒结果表明其毒力稳定。
29、在攻毒方面，脚垫注射104ccu/mlms-yy株菌液0.2ml/只即可使35d、60d、90d鸡发病，可用于稳定建立动物模型，且最小发病剂量显著小于现有技术。
30、本专利技术进一步建立了鸡滑液支原体疫苗评价方法，为提高评价模型的有效性，对病鸡每个发病部位根据发病的严重程度进行赋分，包括精神状态最高赋分为4分，每侧脚垫最高得分为6分，跗关节、指关节、翅关节每侧最高得分为4分，胧骨突最高得分为5分，死亡判定为最高分45分，以此衡量鸡的发病程度，效力评价模型建立时，以免疫组相对对照组的病变减少率作为疫苗有效性评价的指标之一。
31、现有技术中，ms菌液的浓度目前主要通过测定菌液的颜色变化单位数(ccu)，通常也只以ccu数评价疫苗效力，这种评价方法指标单一，按照绝对保护与发病数量进行疫苗有效性判定可行性不理想。本专利技术的疫苗评价方法的结果显示，免疫组与对照组除病变程度有显著差异外，生长特性也有显著的差异，免疫组的增重明显高于对照组，攻毒后21d，免疫组的增重是对照组的增重1.5倍以上，因此增重率也作为效力评价的重要指标之一，区别于现有技术中仅以菌液ccu作本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株鸡滑液支原体MS-YY株，所述鸡滑液支原体MS-YY株于2024年3月19日保藏于中国普通微生物保藏管理中心，其保藏编号为CGMCC No.45880。
2.权利要求1所述的鸡滑液支原体MS-YY株在制备鸡滑液支原体动物模型中的应用。
3.鸡滑液支原体动物模型，其特征在于取浓度为104CCU/ml权利要求1所述的鸡滑液支原体MS-YY株的菌液，足垫接种SPF鸡0.2ml/只。
4.根据权利要求3所述的鸡滑液支原体动物模型在评价鸡滑液支原体疫苗效力中的应用。
5.一种鸡滑液支原体疫苗评价方法，所述方法包括：
6.根据权利要求3所述的评价方法，其特征在于步骤(3)中，打分标准为：
【技术特征摘要】
1.一株鸡滑液支原体ms-yy株，所述鸡滑液支原体ms-yy株于2024年3月19日保藏于中国普通微生物保藏管理中心，其保藏编号为cgmcc no.45880。
2.权利要求1所述的鸡滑液支原体ms-yy株在制备鸡滑液支原体动物模型中的应用。
3.鸡滑液支原体动物模型，其特征在于取浓度为104ccu/...
【专利技术属性】
技术研发人员：王秀丽，刘燕，李俊平，刘元杰，李建，马欣，魏津，朱良全，姚文生，辛凌翔，王琦，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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