【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、嵌合抗原受体(car)t细胞疗法作为免疫疗法对于部分侵袭性血液恶性肿瘤来说是变革性的。此外，t细胞受体(tcr)转基因t细胞已在早期临床研究中显示出积极结果。然而，许多癌症(尤其是实体瘤)在对当前基于car或tcr的t细胞疗法产生初步反应后，无法做出反应或迅速进展。在肿瘤块内，免疫抑制微环境对抗肿瘤免疫的功效构成了关键障碍(参见，例如anderson,等,cancer cell31,311–325,2017；binnewies,等,nat.med.24,541–550,2018)。此外，持续暴露于抗原可能导致t细胞功能失调，突出了需要平衡工程改造的t细胞的效应功能和长期持久性(例如，vardhana,等,nat.immunol.21,1022–1033,2020；wei,等.,nature 576,471–476,2019)。正在测试对选定基因的靶向操作，作为增强过继性t细胞疗法疗效的策略。大规模crispr筛选可以加速发现基因扰动，从而增强工程改造的t细胞的功效。我们之前在原代人t细胞中开发了发现平台并将其应用于鉴定t细胞增殖的新型遗传调节因子(shifrut,等,cell 175,1958–1971.e15,2018；
2、wo2020/014235)。采用腺苷拮抗剂来模拟腺苷a2a抑制信号传导的升高，以响应缺氧肿瘤微环境中高水平的腺苷。
技术实现思路
1、本公开部分基于使用肿瘤微环境(tme)中常见的各种免疫抑制条件来鉴定可赋予对肿瘤微环境中发现的
2、因此，在一个方面中，本文提供了遗传修饰的造血细胞，其包含对编码t细胞刺激负调节因子的基因(在本文也称为t细胞负调节基因)的遗传修饰，例如，所述遗传修饰抑制由该基因编码的多肽产物的表达或活性，其中该多肽产物的表达或活性相较于对照野生型造血细胞被抑制至少60％。在一些实施方式中，对编码t细胞刺激负调节因子的基因进行遗传修饰使该基因失活。在一些实施方式中，遗传修饰的造血细胞是t细胞。在一些实施方式中，t细胞是cd8+t细胞或cd4+t细胞。在一些实施方式中，使用基因编辑技术抑制t细胞负调节基因，例如规律间隔成簇短回文重复序列(crispr)系统，包括crispr干扰(crispri)、crisproff和碱基编辑，以引入功能突变的缺失。或者，可以使用转录激活因子样效应子核酸酶(talen)系统、锌指核酸酶系统或大范围核酸酶系统抑制t细胞负调节基因。在一些实施方式中，使用反义rna、sirna、微小rna或短发夹rna抑制t细胞负调节基因。在一些实施方式中，经修饰的t细胞负调节基因是选自下组的基因：alas1、ambra1、ankrd32、arhgap15、c15orf40、c3orf33、c8orf44、carkd、cd300lb、cenpb、chl1、chst3、clec4m、col15a1、col25a1、coro1a、cul3、cwc27、cyc1、dok2、dusp4、eng、fam49b、fkbp1a、fubp1、gab3、glrx、greb1l、gtf2h2、gtf2i、haus1、hist1h2ad、hist1h2bc、hoxa10、igfbp4、irf2bp2、iyd、kcnk4、kdm6b、l1cam、lama3、lhx8、mob3c、mbtd1、mrpl17、mrpl33、mtif2、myo1h、nefl、nfkb1a、nfkb2、nmt1、orc6、pcbp2、pcgf1、pdcd6ip、pdcl、pfn1、pim2、piwil4、plglb2、plxna4、pde4c、nxx2-6、potej、ppia、ppp2r5d、ptprg、rfpl1、rnf13、rnf185、rnf7、rprd1b、rps6kl1、sel1l3、sepw1、sh3bgrl、sirt7、sit1、slc47a1、slc9a3、sp1、st5、stat6、tbl1y、tgfbr1、tgfbr2、tgif2、ticrr、tmem62、tnk1、tns2、tp53bp1、ttn、tufm、upk1b、uqcrc1、wwox、xcl1、zbtb7a、zfyve28、znf101、znf436、znf506、znf716和znf805。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是chst3、ttn、nmt1、rps6kl1、stat6、c8orf44、pdcl、tp53bp1、wwox、glrx、znf506、tns2或tbl1y。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是uqcrc1、irf2bp2、rprd1b、ambra1、dusp4或pcbp2。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是cul3、coro1a、rfpl1、hist1h2ad、plglb2、sh3bgrl、glrx、arhgap15、chl1、sit1、cyc1、ambra1、gab3、dok2、fubp1或pdcd6ip。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是kdm6b、col15a1、zfyve28、carkd、znf101、hoxa10、c3orf33、alas1、cyc1、zbtb7a、fam49b、mrpl17、greb1l、ppp2r5d、slc9a3、cwc27或gtf2h2。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是znf716、xcl1、nfkb2、potej、sp1、nefl、kcnk4、tnk1、clec4m、pcgf1、rnf13、slc47a1、znf436、wwox、ankrd32、sel1l3、sepw1或col25a1。在一些实施方式中，t细胞负调节基因是cenpb、cd300lb、iyd、st5、rnf7、mbtd1、mrpl33、myo1h、piwil4、znf805、hist1h2bc、upk1b、lama3、eng、orc6、ticrr、c15orf40、tufm、rnf185、ptprg、haus1、tmem62、igfbp4、l1cam或mtif2。
3、在另一方面中，本文提供了这样的细胞群，其包含如本文所述(例如在本段中所述)的遗传修饰本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种遗传修饰的造血细胞，其包含对T细胞负调节基因的遗传修饰，所述遗传修饰在肿瘤微环境(TME)中的一种或多种免疫抑制条件下抑制所述T细胞负调节基因编码的多肽产物的表达或活性，其中所述多肽产物的表达或活性相比对照野生型造血细胞被抑制至少60％。
2.如权利要求1所述的遗传修饰的造血细胞，其中，所述对T细胞负调节基因的遗传修饰使所述基因失活。
3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的造血细胞，其中，所述遗传修饰的造血细胞是T细胞。
4.如权利要求3所述的遗传修饰的细胞，其中，所述T细胞是CD8+T细胞或CD4+T细胞。
5.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)系统抑制所述T细胞负调节基因。
6.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)系统抑制所述T细胞负调节基因。
7.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用锌指核酸酶系统抑制所述T细胞负调节基因。
8.如权
9.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用抑制性RNA抑制所述T细胞负调节基因。
10.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用shRNA、siRNA、微小RNA或反义RNA抑制所述T细胞负调节基因。
11.如权利要求1所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因选自下组：ALAS1、AMBRA1、ANKRD32、ARHGAP15、C15orf40、C3orf33、C8orf44、CARKD、CD300LB、CENPB、CHL1、CHST3、CLEC4M、COL15A1、COL25A1、CORO1A、CUL3、CWC27、CYC1、DOK2、DUSP4、ENG、FAM49B、FKBP1A、FUBP1、GAB3、GLRX、GREB1L、GTF2H2、GTF2I、HAUS1、HIST1H2AD、HIST1H2BC、HOXA10、IGFBP4、IRF2BP2、IYD、KCNK4、KDM6B、L1CAM、LAMA3、LHX8、MOB3C、MBTD1、MRPL17、MRPL33、MTIF2、MYO1H、NEFL、NFKB1A、NFKB2、NMT1、ORC6、PCBP2、PCGF1、PDCD6IP、PDCL、PFN1、PIM2、PIWIL4、PLGLB2、PLXNA4、PDE4C、NXX2-6、POTEJ、PPIA、PPP2R5D、PTPRG、RFPL1、RNF13、RNF185、RNF7、RPRD1B、RPS6KL1、SEL1L3、SEPW1、SH3BGRL、SIRT7、SIT1、SLC47A1、SLC9A3、SP1、ST5、STAT6、TBL1Y、TGFBR1、TGFBR2、TGIF2、TICRR、TMEM62、TNK1、TNS2、TP53BP1、TTN、TUFM、UPK1B、UQCRC1、WWOX、XCL1、ZBTB7A、ZFYVE28、ZNF101、
12.如权利要求1-11中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因是CHST3、TTN、NMT1、RPS6KL1、STAT6、C8orf44、PDCL、TP53BP1、WWOX、GLRX、ZNF506、TNS2或TBL1Y。
13.如权利要求1-11中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因是UQCRC1、IRF2BP2、RPRD1B、AMBRA1、DUSP4或PCBP2。
14.如权利要求12所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因是CUL3、CORO1A、RFPL1、HIST1H2AD、PLGLB2、SH3BGRL、GLRX、ARHGAP15、CHL1、SIT1、CYC1、AMBRA1、GAB3、DOK2、FUBP1或PDCD6IP。
15.如权利要求12所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因是KDM6B、COL15A1、ZFYVE28、CARKD、ZNF101、HOXA10、C3orf33、ALAS1、CYC1、ZBTB7A、FAM49B、MRPL17、GREB1L、PPP2R5D、SLC9A3、CWC27或GTF2H2。
16.如权利要求12所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述T细胞负调节基因是ZNF716、XCL1、NFKB2、POTEJ、SP1、NEFL、KCNK4、TNK1、
17.如权...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种遗传修饰的造血细胞，其包含对t细胞负调节基因的遗传修饰，所述遗传修饰在肿瘤微环境(tme)中的一种或多种免疫抑制条件下抑制所述t细胞负调节基因编码的多肽产物的表达或活性，其中所述多肽产物的表达或活性相比对照野生型造血细胞被抑制至少60％。
2.如权利要求1所述的遗传修饰的造血细胞，其中，所述对t细胞负调节基因的遗传修饰使所述基因失活。
3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的造血细胞，其中，所述遗传修饰的造血细胞是t细胞。
4.如权利要求3所述的遗传修饰的细胞，其中，所述t细胞是cd8+t细胞或cd4+t细胞。
5.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用规律间隔成簇短回文重复序列(crispr)系统抑制所述t细胞负调节基因。
6.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用转录激活因子样效应子核酸酶(talen)系统抑制所述t细胞负调节基因。
7.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用锌指核酸酶系统抑制所述t细胞负调节基因。
8.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用大范围核酸酶系统抑制所述t细胞负调节基因。
9.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用抑制性rna抑制所述t细胞负调节基因。
10.如权利要求1、2、3或4所述的遗传修饰的造血细胞，其中，使用shrna、sirna、微小rna或反义rna抑制所述t细胞负调节基因。
11.如权利要求1所述的遗传修饰的t细胞，其中，所述t细胞负调节基因选自下组：alas1、ambra1、ankrd32、arhgap15、c15orf40、c3orf33、c8orf44、carkd、cd300lb、cenpb、chl1、chst3、clec4m、col15a1、col25a1、coro1a、cul3、cwc27、cyc1、dok2、dusp4、eng、fam49b、fkbp1a、fubp1、gab3、glrx、greb1l、gtf2h2、gtf2i、haus1、hist1h2ad、hist1h2bc、hoxa10、igfbp4、irf2bp2、iyd、kcnk4、kdm6b、l1cam、lama3、lhx8、mob3c、mbtd1、mrpl17、mrpl33、mtif2、myo1h、nefl、nfkb1a、nfkb2、nmt1、orc6、pcbp2、pcgf1、pdcd6ip、pdcl、pfn1、pim2、piwil4、plglb2、plxna4、pde4c、nxx2-6、potej、ppia、ppp2r5d、ptprg、rfpl1、rnf13、rnf185、rnf7、rprd1b、rps6kl1、sel1l3、sepw1、sh3bgrl、sirt7、sit1、slc47a1、slc9a3、sp1、st5、stat6、tbl1y、tgfbr1、tgfbr2、tgif2、ticrr、tmem62、tnk1、tns2、tp53bp1、ttn、tufm、upk1b、uqcrc1、wwox、xcl1、zbtb7a、zfyve28、znf101、
12.如权利要求1-11中任一项所述的遗传修饰的t细胞，其中，所述t细胞负调节基因是chst3、ttn、nmt1、rps6kl1、stat6、c8orf44、pdcl、tp53bp1、wwox、glrx、znf506、tns2或tbl1y。
13.如权利要求1-11中任一项所述的遗传修饰的t细胞，其中，所述t细胞负调节基因是uqcrc1、irf2bp2、rprd1b、ambra1、dusp4或pcbp2。
14.如权利要求12所述的遗传修饰的t细胞，其中，所述t细胞负调节基因是cul3、coro1a、rfpl1、hist1h2ad、plglb2、sh3bgrl、...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·马森，E·士夫洛特，J·卡内瓦利，A·阿诗沃斯，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：
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