【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及tgf-β受体胞外域融合分子及其用途。更具体地，本专利技术涉及tgf-β超家族受体胞外域融合分子及其在tgf-β配体中和方面的用途。
技术介绍
1、tgf-β是超过30种配体的超家族的一部分，这些配体调节几种生理过程，包括细胞增殖、迁移和分化。它们的水平和/或信号的扰动(perturbation)引起了显著的病理学效应。例如，tgf-β和激活素配体在包括癌症在内的许多疾病中发挥关键的致病作用(hawinkels&ten dijke,2011；massague等,2000；rodgarkia-dara等,2006)。特别地，tgf-β被认为是肿瘤进展的关键调节因子，并被大多数肿瘤类型过度表达。它通过在上皮肿瘤细胞中诱导上皮-间充质转化(emt)而部分有利于肿瘤发生，导致侵袭性转移(thiery等,2009)。tgf-β还通过作为肿瘤微环境中免疫应答的强力抑制剂来促进肿瘤发生(li等,2006)。事实上，tgf-β被认为是肿瘤微环境中存在的最有效免疫抑制因子之一。tgf-β干扰许多免疫细胞类型(包括树突细胞、巨噬细胞、nk细胞、中性粒细胞、b细胞和t细胞)的分化、增殖和存活；因此，它调节先天免疫和适应性免疫(santarpia等，2015；yang等，2010)。有证据突出了tgf-β在肿瘤微环境中的重要性，表明在几种肿瘤类型(包括黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌和乳腺癌)中，tgf-β配体水平的升高与疾病进展和复发、转移及死亡率相关。因此，已经投入了大量努力来设计涉及tgf-β抑制的抗肿瘤治疗方法(ar
2、开发抑制tgf-β功能的治疗剂的一种方法是使用抗体或可溶性诱饵受体(也称为基于受体胞外域(ecd)的配体捕获物(trap))来结合和螯合(sequester)配体，从而阻止配体接触其细胞表面受体(zwaagstra等,2012)。通常，基于受体ecd的捕获物是一类能够螯合大范围配体的治疗剂，并且可使用蛋白质工程方法进行优化(economides等,2003；holash等,2002；jin等,2009)。
3、以前，使用了新的蛋白质工程设计策略来生成单链的二价tgf-βii型受体胞外域(tβrii-ecd)捕获物，由于亲合力(avidity)效应而能够有效中和tgf-β配体超家族的成员(zwaagstra等,2012)[wo2008/113185；wo2010/031168]。在这种情况下，通过使用位于tβrii-ecd的结构化配体结合结构域侧翼的固有无序区(idr)的区域，通过两个tβrii胞外域的共价连接实现了二价。这些单链二价捕获物t22d35的一个例子表现出比单价非工程化tβrii胞外域高约100倍的tgf-β中和效力，尽管二价捕获物不能中和tgf-β2同种型并具有相对较短的循环半衰期。
4、提供具有改善性质(例如增强的效力)的基于tβrii-ecd的捕获物将是有用的。
技术实现思路
1、本专利技术提供了具有增强的抑制tgfβ的效力的多肽构建体。
2、本专利技术的多肽构建体包含第一区和第二区，其中第一区包含第一和/或第二tgfβ受体胞外域(ecd)；且其中第二区包含抗体重链的第二恒定结构域(ch2)和/或第三恒定结构域(ch3)。在优选的非限制性实施方案中，第一区的c-末端与第二区的n-末端连接。在优选的非限制性实施方案中，多肽构建体的第一区包含第一tβrii-ecd(ecd1)和/或第二tβrii-ecd(ecd2)，其中ecd1和ecd2串联连接。
3、提供了多肽构建体，其中第一区包含在其c-末端与抗体恒定结构域连接的(tβrii-ecd)-(tβrii-ecd)二联体，与具有在其c-末端与抗体恒定结构域连接的单个tβrii-ecd的对应构建体(即当不存在第二ecd时，在本文中也称为单体)相比，所述多肽构建体抑制tgfβ活性的效力高至少600倍。
4、所提供的多肽构建体包含与第一ecd串联连接的第二tgfβ受体胞外域ecd，其中与抗体恒定结构域连接的多肽构建体(即ecd二联体构建体)表现出比不存在抗体恒定结构域的对应构建体(即ecd二联体构建体，在本文中也称为未融合fc的二联体)高至少100、200、300、400、500、600、700、800或900倍的tgfβ中和(抑制)。
5、关于tβrii-ecd和它们抑制tgf-β活性的效力，已经发现，通过仔细选择它们的构成可以令人惊讶地增强效力。当某些tβrii-ecd串联连接且其c-末端与抗体恒定结构域(fc)的n-末端连接时，就会发生这种情况。当处于其融合且二聚的形式时，包含通过每个多肽的恒定结构域之间的半胱氨酸桥相交联的两个这种多肽，得到的所谓“fc融合物”在两个“臂”的每一个上都具有两个tβrii-ecd(ecd“二联体”)，与在两个“臂”的每一个上具有一个胞外域的“fc融合物”相比，能够表现出超过600倍的更高tgf-β1抑制活性和超过20倍的更高tgf-β3抑制活性，如通过人非小细胞肺癌(nsclc)a549细胞的tgf-β1和tgf-β3诱导的il-11分泌的抑制所证实的，等等。相对于缺少fc区或缺少第二ecd(即ecd“单体”)的对应构建体，效力增强是明显的。融合fc的二联体的效力增强比融合fc的单体高至少100、200、300、400、500或600倍。fc融合二联体的效力增强比未融合fc的二联体高至少100、200、300、400、500、600、700、800、900倍和约1000倍。相对于缺少fc区(与未融合fc的二联体相比，fc融合二联体t22d35-fc针对tgf-β1和tgf-β3分别好972倍和243倍)或者缺少第二ecd(ecd“单体”；与未融合fc的二联体相比，fc融合二联体t22d35-fc针对tgf-β1和tgf-β3分别好615倍和24倍)的对应构建体，效力增强是明显的。更具体而言，与未融合fc的ecd二联体相比，fc-二联体(t22d35-fc)表现出高至少970倍的针对tgf-β1的效力增强和高至少240倍的针对tgf-β3的效力增强。此外，与fc-单体(t2m-fc)相比，fc-二联体(t22d35-fc)表现出高至少600倍的针对tgf-β1的效力增强，高超过20倍的针对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于抑制转化生长因子β(TGF-β)同种型的作用的多肽构建体，所述构建体包含：
2.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述多肽构建体抑制TGF-β活性的效力比具有单个TβR-ECD的对应构建体高至少20倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍或600倍。
3.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述多肽构建体抑制TGF-β活性的效力比未融合Fc的TβR-ECD二联体高至少100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍或900倍。
4.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述第二区包含抗体重链的Fc区。
5.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述TβR-ECD包含TGF-βII型受体胞外域(TβRII-ECD)。
6.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中第一TβR-ECD和第二TβR-ECD结合相同的TGF-β同种型。
7.根据权利要求6所述的多肽构建体，其中第一TβR-ECD和第二TβR-ECD各自都结合TGF-β1和TGF-β3两者。
8.根据
9.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述TβR-ECD包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
10.根据权利要求1至9所述的多肽构建体，其中所述第二区包含IgG抗体重链的CH2和CH3结构域。
...【技术特征摘要】
1.用于抑制转化生长因子β(tgf-β)同种型的作用的多肽构建体，所述构建体包含：
2.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述多肽构建体抑制tgf-β活性的效力比具有单个tβr-ecd的对应构建体高至少20倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍或600倍。
3.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述多肽构建体抑制tgf-β活性的效力比未融合fc的tβr-ecd二联体高至少100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍或900倍。
4.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述第二区包含抗体重链的fc区。
5.根据权利要求1所述的多肽构建体，其中所述tβr...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·E·G·伦恩弗林克，J·C·茨瓦格拉，T·苏莱亚，M·D·奥康纳麦考特，
申请(专利权)人：加拿大国家研究委员会，
类型：发明
国别省市：
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