【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体地，涉及细胞培养和固液分离的方法。
技术介绍
1、随着细胞培养工艺灌流和连续流工艺革新和改进，抗体产量从每升几百mg提高到5-10g甚至更高到50g/l以上，大规模抗体生产的“瓶颈”和生产成本逐渐从抗体表达转移到了抗体纯化，因此对提高纯化通量和效率，降低成本的需求越来越大，成为抗体生产工艺研究的一个重点。
2、提高抗体纯化效率一方面可以通过优化现有纯化工艺设备、方法和工艺，挖掘现有纯化技术的潜力。另一方面则可以通过开发创新性的介质和工艺，从根本上突破现有技术障碍。抗体分离纯化的主要目的是将抗体与工艺相关杂质和产品相关杂质分离，最终获得高纯度、低潜在危害的抗体药物。
3、纯化过程中需要去除的工艺相关杂质包括细胞、细胞碎片、宿主细胞蛋白、宿主细胞核酸及培养基与加料液成分，需去除的产品相关杂质主要包括抗体片段和聚集体。纯化过程还需具备足够的病毒灭活去除能力，以去除宿主细胞自身表达的内源病毒样颗粒和未及时发现的外源病毒。抗体为胞外分泌型表达，纯化的第一步是将培养液上清与细胞及细胞碎片分离开来。在实验室规模，分离可通过简单批次离心完成，但大规模抗体生产主要采用连续分离的方法，主要包括深层过滤和连续流离心。但是深层过滤的一次性滤芯使用费用高和处理量有限，在处理大体积培养液时需并联多个滤器，费用和占地面积显著增加，所以深层过滤的试用范围限于100-2000l的中试规模的抗体纯化；连续流离心机的弱点是设备和操作相对复杂，机械和操作故障风险相对较高，同时离心时形成的细胞团有可能造成局部营养缺失或副产
4、由此，新的细胞培养和分离纯化方法有待研究。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种细胞培养和固液分离的方法，该方法对细胞进行级联放大培养，并利用连续流离心和深层过滤进行固液分离，从而进入到下游纯化，固液分离的处理量大，分离速度快，适于大规模生产。
2、根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供一种细胞培养和固液分离的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：利用基础培养基对细胞进行培养，并在所述培养过程中进行补料和调整通气量；以及所述培养结束后，通过碟片式离心和深层过滤进行固液分离，以便获得上清液和培养细胞。
3、根据本专利技术实施例的细胞培养和固液分离的方法，对细胞进行级联放大培养，表达目的蛋白，并利用连续流离心和深层过滤二者结合进行固液分离，从而进入到下游纯化，固液分离的处理量大，分离速度快，效率高，同时减少了因深层过滤的膜包不足而造成堵塞的风险，适于大规模生产应用。
4、另外，根据本专利技术上述实施例的细胞培养和固液分离的方法，还可以具有如下附加的技术特征：
5、根据本专利技术的实施例，所述培养的初始培养温度为36.8℃，转速为90rpm，ph值为6.95，do值为40％。
6、根据本专利技术的实施例，所述第二培养的时间为14天。
7、根据本专利技术的实施例，所述培养过程中，级联底部空气(air-sp)和氧气(o2-sp)自动调节，底部(t-sp)初始通气量为5l/min，从所述培养的第8天开始，底部通气量为10l/min。
8、根据本专利技术的实施例，所述细胞的密度达到9.0×106cells/ml后，降温至33℃进行培养。
9、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基为含有3g/l半乳糖和0.1％体积的50μm硫酸铜溶液的cd cho培养基。由此，满足细胞培养过程中的糖分等养分的需求。
10、根据本专利技术的实施例，所述补液包括：在所述第二培养的第3天、第6天和第9天，均添加10％初始培养量的流加液c；在所述第二培养的第4天、第5天、第7天、第8天、第10天、第11天、第12天和第13天，均添加1.5％初始培养量的流加液g和0.5％初始培养量的流加液h。
11、根据本专利技术的实施例，所述流加液c为含有75-85g/kg cd efficientfeedtm cagttm营养添加液。
12、根据本专利技术的实施例，所述流加液g为含有60-70g/kg tk cd feed g、0.2-0.3g/kg四水氯化锰和50-55g/kg半乳糖的营养添加液。
13、根据本专利技术的实施例，所述流加液h为含有6.5-7.5g/kg l-酪氨酸、30-33g/kg l-半胱氨酸盐酸盐一水物的营养添加液。
14、根据本专利技术的实施例，所述固液分离的流速为10.5-12.5l/min，优选地，为10.8-11.9l/min。
15、根据本专利技术的实施例，所述碟片式离心的转速为9000rpm，所述深层过滤的排渣时间：100s、出口压力：100kpa；深层过滤泵速：7-12l/min，且膜包前后两端压力小于0.3mpa。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种细胞培养和固液分离的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养的初始培养温度为36.8℃，转速为90rpm，pH值为6.95，DO值为40％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞培养的时间为14天。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养过程中，级联底部空气(Air-SP)和氧气(O2-SP)自动调节，所述通气量的初始值为5L/min，从所述培养的第8天开始，所述通气量为10L/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞的密度达到9.0×106cells/mL后，降温至33℃进行培养。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基础培养基为含有3g/L半乳糖和0.1％体积的50μM硫酸铜溶液的CD CHO培养基。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述补液包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述流加液C为含有75-85g/Kg CDEfficientFeedTMC AGTTM营养添加液
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固液分离的流速为10.5-12.5L/min，优选地，为10.8-11.9L/min。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碟片式离心的转速为9000rpm，所述深层过滤的排渣时间：100s、出口压力：100kpa、深层过滤泵速：7-12L/min，且膜包前后两端压力小于0.3MPa。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞培养和固液分离的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养的初始培养温度为36.8℃，转速为90rpm，ph值为6.95，do值为40％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞培养的时间为14天。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养过程中，级联底部空气(air-sp)和氧气(o2-sp)自动调节，所述通气量的初始值为5l/min，从所述培养的第8天开始，所述通气量为10l/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞的密度达到9.0×106cells/ml后，降温至33℃进行培养。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁满生，陆游，代虎，付小朋，沈红，俞嘉乐，王昌，魏守祥，吕俊阁，
申请(专利权)人：江苏泰康生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。