【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及抗体的领域。具体地，本公开涉及治疗性抗体的领域，该治疗性抗体用于治疗涉及异常细胞的疾病。更具体地，本公开涉及多特异性结合部分，该多特异性结合部分包含与pd-1结合的结合域和与tgf-βrii结合的结合域。
技术介绍
1、尽管已知t淋巴细胞在肿瘤免疫监视中的作用，但癌细胞能够通过诱导抑制性免疫通路而逃避免疫控制。因此，免疫检查点阻断(icb)(其中使用抗体来阻断抑制性免疫通路)已成为一种有前景的治疗选择，并且已经在临床前和临床研究中证明可以增强和维持对某些癌症的内源性免疫。
2、程序性死亡1(pd-1)和程序性死亡配体1(pd-l1)是在正常生理学中抑制t细胞活性的免疫抑制网络的组成部分，但可被肿瘤利用来抑制t细胞介导的抗肿瘤免疫反应。针对pd-1和pd-l1的抗体已经改善了一些患有几种不同癌症的患者的反应和存活率。然而，尽管具有良好的临床活性，但只有少数患者对抗pd-1/pd-l1疗法有响应，且持久性有限。因此，迫切需要开发新的、安全且有效的治疗癌症的疗法。
3、程序性细胞死亡1蛋白(pd-1)为一种细胞表面受体，其属于cd28受体家族，并在t细胞和前b细胞上表达。目前已知pd-1结合两种配体pd-l1和pd-l2。pd-1作为免疫检查点，通过抑制t细胞的活化在下调免疫系统中发挥重要作用，而pd-1在体细胞上存在时，会降低自身免疫并促进自我耐受。pd-1的抑制作用被认为是通过促进淋巴结中抗原特异性t细胞的凋亡(程序性细胞死亡)，而同时减少调节性t细胞(抑制性t细胞)的凋亡的双重机制来实现的。还已
4、已批准靶向pd-1的单克隆抗体用于治疗各种恶性肿瘤。例如，尽管70％至80％的患者最初有反应，但用抗pd-1抗体(帕博利珠单抗)治疗的黑素瘤患者在3年时的反应率为33％(ribas a.等人，association of pembrolizumab with tumor response andsurvival among patients with advanced melanoma，jama，2016年4月19日，第315卷第15期：第1600-1609页)。
5、tgf-β信号传导调节了过多的生理和病理过程，包括上皮细胞和造血细胞的细胞周期停滞、间充质细胞增殖和分化的控制、伤口愈合、细胞外基质产生、免疫抑制和致癌作用(massaguéj.，tgfβsignalling in context，nat rev mol cell biol，2012年10月，第13卷第10期：第616-630页)。此外，tgf-β信号传导调节了许多癌细胞功能，包括细胞周期进程、凋亡、粘附和分化(liu s等人，signal transduction and targeted therapy，2021年)。tgf-β表现出双相功能，使得在正常细胞和癌变前的细胞中，tgf-β主要被报道用作肿瘤抑制剂；而在肿瘤细胞中，tgf-β允许生长促进功能和上皮细胞向间充质细胞的转化，从而允许肿瘤细胞迁移、侵袭、内渗和外渗。
6、tgf-βrii是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族和tgfb受体亚家族的成员。已知其具有各种同义词，包括tgfbr2、aat3、faa3、lds1b、lds2、lds2b、mfs2、riic、taad2、tgfr-2、tgfβ-rii、转化生长因子β受体2、tbr-ii和tbrii。tgf-βrii与另一种受体蛋白形成异二聚体复合物，并结合tgf-β。这种受体/配体复合物使蛋白质磷酸化，然后这些蛋白质进入细胞核并调节与细胞增殖相关的基因子集的转录。
7、几种靶向tgf-β通路的抑制剂正处于临床前和临床开发阶段，并在不同水平上(即在配体水平、配体-受体水平或细胞内水平上)抑制tgf-β。这些抑制剂包括例如，tgf-β中和单克隆抗体、抗tgf-βrii抗体、可溶性受体、抗体配体陷阱(例如，抗pd-l1-tgf-βriiecd)、阻止tgf-β合成的反义寡核苷酸、tgf-β2反义基因修饰的同种异体癌细胞疫苗和靶向tgf-βri的激酶结构域的小分子。
8、据报道，用单特异性抗体靶向tgf-β通路在体外和体内显示出抗肿瘤活性；然而，持续存在疗效低且毒性不可接受的不良临床结果，包括主要的细胞因子释放综合征(crs)。已经尝试用bintrafuspα(一种抗pd-l1–tgfbrii双功能融合蛋白)联合靶向tgf-β通路和免疫检查点抑制，但临床效果不明显。
9、仍然需要新的治疗干预措施，它们选择性地抑制局部处于肿瘤微环境中的活化的表达肿瘤特异性pd-1的t细胞中的tgf-β信号传导，以便促进t细胞肿瘤浸润，并恢复和维持t细胞抗肿瘤效应活性。这种靶向将缓解免疫抑制通路，以有效促进ctl功能和t细胞记忆，从而有效持久地消除癌症，同时最大限度地减少与全身tgf-β阻断相关联的毒性。
技术实现思路
1、本公开的目的中的一个目的是提供一种用于治疗人类疾病，特别是用于治疗癌症的新型药物制剂。通过提供结合pd-1和tgf-βrii的多特异性结合部分，例如双特异性抗体，实现了该目的。多特异性结合部分的pd-1结合域旨在驱动多特异性结合部分对肿瘤和肿瘤引流淋巴结中活化/耗竭的效应t细胞的特异性，其中tgf-βrii结合域可局部阻断tgf-β与tgf-βrii的结合，从而降低tgf-β抑制对非t细胞的全身毒性。另外，多特异性结合部分缓解pd1-和tgf-β两者介导的免疫抑制通路，以提升肿瘤微环境中细胞毒性t淋巴细胞的活性。
2、本公开提供了一种包含pd-1结合域和tgf-βrii结合域的多特异性结合部分，其中pd-1结合域阻断pd-1介导的信号传导，并且tgf-βrii结合域阻断tgf-βrii介导的信号传导。
3、本公开还提供了一种包含pd-1结合域和tgf-βrii结合域的多特异性结合部分，其中pd-1结合域包含重链可变区，该重链可变区包含如本文进一步描述的cdr1、cdr2和cdr3序列。
4、本公开还提供了一种包含pd-1结合域和tgf-βrii结合域的多特异性结合部分，其中tgf-βrii结合域包含重链可变区，该重链可变区包含如本文进一步描述的cdr1、cdr2和cdr3序列。
5、本公开还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含有效量的如本文所述的多特异性结合部分。
6、本公开还提供了一种用于治疗的如本文本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种包含PD-1结合域和TGF-βRII结合域的多特异性结合部分，其特征在于，所述PD-1结合域阻断PD-1介导的信号传导，并且所述TGF-βRII结合域阻断TGF-βRII介导的信号传导。
2.根据权利要求1所述的多特异性结合部分，其特征在于，在活化的T细胞，特别是活化的肿瘤特异性T细胞中，所述PD-1结合域阻断PD-1介导的信号传导，并且所述TGF-βRII结合域阻断TGF-βRII介导的信号传导。
3.根据权利要求1或2所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分包含与PD-1结合的单个Fab结构域、与TGF-βRII结合的单个Fab结构域和Fc区。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分阻断TGF-βRII介导的信号传导的效力在表达PD-1和TGF-βRII两者的细胞中比在表达TGF-βRII且不表达、基本上不表达或表达低水平的PD-1的细胞中更高。
5.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达PD-1和TGF-βRII两者的细胞为Jurkat
6.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达PD-1和TGF-βRII两者的细胞为活化的CD4+和/或CD8+细胞，并且所述表达TGF-βRII且不表达PD-1的细胞为未活化的CD4+和/或CD8+细胞。
7.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达PD-1和TGF-βRII两者的细胞为HEK-Blue TGF-β-PD-1+细胞，并且所述表达TGF-βRII且不表达PD-1的细胞为HEK-Blue TGF-β细胞。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断TGF-βRII介导的信号传导的效力在磷酸化SMAD2/3测定中测量。
9.根据权利要求4或7所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断TGF-βRII介导的信号传导的效力在同基因PD-1-TGF-β报告基因测定中测量。
10.根据权利要求4至9中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断TGF-βRII介导的信号传导的效力在表达PD-1和TGF-βRII两者的细胞中比在表达TGF-βRII且不表达、基本上不表达或表达低水平的PD-1的细胞中高至少约200倍；优选地，介于约200倍至30000倍之间。
11.根据权利要求4至10中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在表达TGF-βRII且不表达PD-1的细胞中阻断TGF-βRII介导的信号传导的所述效力比参考抗TGF-βRII抗体的所述效力更低，并且所述多特异性结合部分在表达TGF-βRII和PD-1两者的细胞中阻断TGF-βRII介导的信号传导的所述效力比所述参考抗TGF-βRII抗体的所述效力更高，其中所述参考抗TGF-βRII抗体为二价单特异性抗体，所述二价单特异性抗体包含具有如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列的轻链。
12.根据权利要求11所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在表达TGF-βRII和PD-1两者的细胞中阻断TGF-βRII介导的信号传导的所述效力比所述参考抗TGF-βRII抗体的所述效力高至少约100倍；优选地，介于约100倍至20000倍之间。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在减小肿瘤体积方面具有比参考抗体的组合更高的活性，其中所述参考抗体的组合为两种靶向PD-1和TGF-βRII的二价单特异性抗体，其中靶向PD-1的所述二价单特异性抗体包含具有如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的轻链，并且靶向TGF-βRII的所述二价单特异性抗体包含具有如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列的轻链。
14.根据权利要求13所述的多特异性结合部分，其特征在于，减小肿瘤体积的所述活性是通过在小鼠体内研究中，特别是在使用MDA-MB-231异种移植huCD34 NSG小鼠的小鼠体内研究中测量肿瘤体积减小来测定。
15.根据权利要求13或14所述的多特异性抗体，其特征在于，减小肿瘤体积的较高活性是肿瘤体积减小为所述参考抗体的组合的所述肿瘤体...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种包含pd-1结合域和tgf-βrii结合域的多特异性结合部分，其特征在于，所述pd-1结合域阻断pd-1介导的信号传导，并且所述tgf-βrii结合域阻断tgf-βrii介导的信号传导。
2.根据权利要求1所述的多特异性结合部分，其特征在于，在活化的t细胞，特别是活化的肿瘤特异性t细胞中，所述pd-1结合域阻断pd-1介导的信号传导，并且所述tgf-βrii结合域阻断tgf-βrii介导的信号传导。
3.根据权利要求1或2所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分包含与pd-1结合的单个fab结构域、与tgf-βrii结合的单个fab结构域和fc区。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分阻断tgf-βrii介导的信号传导的效力在表达pd-1和tgf-βrii两者的细胞中比在表达tgf-βrii且不表达、基本上不表达或表达低水平的pd-1的细胞中更高。
5.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达pd-1和tgf-βrii两者的细胞为jurkat-pd-1+细胞，并且所述表达tgf-βrii且不表达或基本上不表达pd-1的细胞为jurkat-pd-1null细胞。
6.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达pd-1和tgf-βrii两者的细胞为活化的cd4+和/或cd8+细胞，并且所述表达tgf-βrii且不表达pd-1的细胞为未活化的cd4+和/或cd8+细胞。
7.根据权利要求4所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述表达pd-1和tgf-βrii两者的细胞为hek-blue tgf-β-pd-1+细胞，并且所述表达tgf-βrii且不表达pd-1的细胞为hek-blue tgf-β细胞。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断tgf-βrii介导的信号传导的效力在磷酸化smad2/3测定中测量。
9.根据权利要求4或7所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断tgf-βrii介导的信号传导的效力在同基因pd-1-tgf-β报告基因测定中测量。
10.根据权利要求4至9中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述阻断tgf-βrii介导的信号传导的效力在表达pd-1和tgf-βrii两者的细胞中比在表达tgf-βrii且不表达、基本上不表达或表达低水平的pd-1的细胞中高至少约200倍；优选地，介于约200倍至30000倍之间。
11.根据权利要求4至10中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在表达tgf-βrii且不表达pd-1的细胞中阻断tgf-βrii介导的信号传导的所述效力比参考抗tgf-βrii抗体的所述效力更低，并且所述多特异性结合部分在表达tgf-βrii和pd-1两者的细胞中阻断tgf-βrii介导的信号传导的所述效力比所述参考抗tgf-βrii抗体的所述效力更高，其中所述参考抗tgf-βrii抗体为二价单特异性抗体，所述二价单特异性抗体包含具有如seq id no:76所示的氨基酸序列的重链和具有如seq id no:77所示的氨基酸序列的轻链。
12.根据权利要求11所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在表达tgf-βrii和pd-1两者的细胞中阻断tgf-βrii介导的信号传导的所述效力比所述参考抗tgf-βrii抗体的所述效力高至少约100倍；优选地，介于约100倍至20000倍之间。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述多特异性结合部分在减小肿瘤体积方面具有比参考抗体的组合更高的活性，其中所述参考抗体的组合为两种靶向pd-1和tgf-βrii的二价单特异性抗体，其中靶向pd-1的所述二价单特异性抗体包含具有如seq id no:78所示的氨基酸序列的重链和具有如seq id no:79所示的氨基酸序列的轻链，并且靶向tgf-βrii的所述二价单特异性抗体包含具有如seq id no:76所示的氨基酸序列的重链和具有如seq id no:77所示的氨基酸序列的轻链。
14.根据权利要求13所述的多特异性结合部分，其特征在于，减小肿瘤体积的所述活性是通过在小鼠体内研究中，特别是在使用mda-mb-231异种移植hucd34 nsg小鼠的小鼠体内研究中测量肿瘤体积减小来测定。
15.根据权利要求13或14所述的多特异性抗体，其特征在于，减小肿瘤体积的较高活性是肿瘤体积减小为所述参考抗体的组合的所述肿瘤体积减小的至少约1.5倍；优选地，介于约1.5倍至100倍之间。
16.一种包含pd-1结合域和tgf-βrii结合域的多特异性结合部分，其特征在于，所述pd-1结合域包含重链可变区，所述重链可变区包含：
17.根据权利要求16所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述pd-1结合域包含重链可变区，所述重链可变区具有如seq id no:1、5、9、13、14、18和19中任一项所示的氨基酸序列或与其具有至少80％，优选85％，更优选90％，或最优选95％序列同一性的氨基酸序列。
18.根据权利要求16或17所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述pd-1结合域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含分别具有如seq id no:49、seq id no:50和seq id no:51所示的氨基酸序列或其变体的轻链cdr1(lcdr1)、轻链cdr2(lcdr2)和轻链cdr3(lcdr3)。
19.根据权利要求16至18中任一项所述的多特异性结合部分，其特征在于，所述pd-1结合域包含轻链可变区，所述轻链...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·A·W·热延，P·梅耶斯，S·M·斯图维尔特，王亮权，
申请(专利权)人：美勒斯公司，
类型：发明
国别省市：
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