【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于gc-ims的大麦禾谷镰刀菌污染判别方法，属于快速分析检测。
技术介绍
1、大麦是啤酒生产的主要原料，在生产和储存过程中存在着禾谷镰刀菌侵染的隐患。禾谷镰刀菌侵染后可在大麦中分泌大量的真菌毒素，不仅会造成巨大的经济损失，还对人类健康构成威胁。因此，对大麦受禾谷镰刀菌是否污染进行简单、快速、有效判定至关重要。
2、现有的大麦禾谷镰刀菌污染判别方法为酶联免疫法和高效液相色谱法。酶联免疫法特异性强、灵敏度高，但elisa试剂盒以及检测设备较昂贵。高效液相色谱法灵敏度高、可以定量检测大麦中的禾谷镰刀菌所产生的毒素含量，但操作过程较繁琐且需要专业人员操作，另外检测设备价格昂贵无法用于基层粮库中大麦的质量检测。
技术实现思路
1、为了解决目前存在的检测成本高和操作步骤繁琐问题，本专利技术提供了一种基于gc-ims对大麦禾谷镰刀菌污染的快速判别方法，所述技术方案包括：对大麦样品进行gc-ims检测，若大麦样品的gc-ims谱图中存在标记物的迁移谱特征峰，则根据所述标记物的迁移谱特征峰，判定大麦样品是否被禾谷镰刀菌污染。
2、可选的，所述标记物包括：2-丁烯酸己酯、2-己醛、3-甲基丁醛和5-甲基糠醛。
3、可选的，所述标记物的确定过程包括：
4、步骤1：建立对比样品数据库；
5、选取大小相近且表面无伤的市售大麦进行无菌处理，并视作对比样品；拍照留取原始样品形态图；采用gc-ims技术检测其物质组分；将形态图和gc-
6、步骤2：样品处理；
7、选取大小相近且表面无伤的市售大麦无菌处理后，接种经过活化处理的禾谷镰刀菌孢子，接种后的样品各取m个平行试验样品，m为5到20之间的正整数，接种后，将样品贮藏于无菌恒温恒湿培养箱中，分别在不同时间取样进行检测和分析；
8、步骤3：建立受禾谷镰刀菌污染的大麦数据库；
9、将步骤2中已经处理过的样品拍照留取形态图；采用gc-ims技术检测其物质组分，将形态图和gc-ims数据合并，共同构建受禾谷镰刀菌污染样品的数据库；
10、步骤4：建立完整的数据库；
11、将所述对比样品数据库和受禾谷镰刀菌污染的大麦数据库进行合并，从而得到完整样品数据库；
12、步骤5：确定受污染样品的标记物；
13、根据完整大麦数据库生成指纹谱图，在指纹谱图中选取迁移谱特征峰对应的物质，以初步确定对比样品及受污染样品之间备选标记物的差异；采用偏最小二乘判别分析法，将对比样品和受污染样品的所有物质进行分组和筛选，以差异度贡献值>1的物质作为备选标记物；
14、步骤6：确定标记物的有效性；
15、测定了各受污染样品中禾谷镰刀菌的相对含量，结合观察指纹谱图，当禾谷镰刀菌含量呈增长趋势，此标记物含量也呈增加趋势，则确定使用此标记物是合理且有效的。
16、可选的，所述方法还包括：首先对样品进行外观观察，如果样品外观出现明显霉菌污染现象，则直接判断大麦样品受污染已发生至中期或晚期，无需再做检测；如果大麦样品外观无异常，则对大麦样品进行gc-ims检测。
17、可选的，所述步骤1进行gc-ims检测的过程包括：初始流速为1.5ml/min，保持2min；随后在10min内线性增至50ml/min，并在之后的6min内线性增到160ml/min。
18、可选的，所述步骤2分别在污染第1、4、7、10、13和16天取样进行检测和分析。
19、可选的，所述禾谷镰刀菌孢子的处理过程包括：
20、将禾谷镰刀菌孢子转移到制备好的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，置于28℃、75％湿度的恒温恒湿箱中进行活化培养至菌丝布满整个培养皿，然后将其转入现制pda培养基中进行大量扩增培养；
21、采用扩增培养两周的培养基制备禾谷镰刀菌孢子液，每个培养基中加入8ml无菌水，用接种环轻轻来回刮蹭培养基表面，然后用滤纸除去菌丝收得孢子液，最后通过血球计数板法调节孢子液浓度至5×105cfu/ml。
22、可选的，所述步骤1的无菌处理包括：采用100mws/cm2的紫外灯下灭菌24h。
23、本专利技术有益效果是：
24、本专利技术通过gc-ims技术结合标记物的迁移谱特征峰，可以快速、灵敏地获得待测物质丰富的组分信息，解决了检测成本高昂，操作过程繁琐等技术缺点，达到了便捷、快速的检测仓储大麦是否受禾谷镰刀菌感染的效果。
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1.一种大麦禾谷镰刀菌污染的判别方法，其特征在于，所述方法包括：对大麦样品进行GC-IMS检测，若大麦样品的GC-IMS谱图中存在标记物的迁移谱特征峰，则根据所述标记物的迁移谱特征峰，判定大麦样品是否被禾谷镰刀菌污染。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物包括：2-丁烯酸己酯、2-己醛、3-甲基丁醛和5-甲基糠醛。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物的确定过程包括：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：首先对样品进行外观观察，如果样品外观出现明显霉菌污染现象，则直接判断大麦样品受污染已发生至中期或晚期，无需再做检测；如果大麦样品外观无异常，则对大麦样品进行GC-IMS检测。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1进行GC-IMS检测的过程包括：初始流速为1.5mL/min，保持2min；随后在10min内线性增至50mL/min，并在之后的6min内线性增到160mL/min。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2分别在污染第1、4、7
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述禾谷镰刀菌孢子的处理过程包括：
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1的无菌处理包括：采用100mWs/cm2的紫外灯下灭菌24h。
...【技术特征摘要】
1.一种大麦禾谷镰刀菌污染的判别方法，其特征在于，所述方法包括：对大麦样品进行gc-ims检测，若大麦样品的gc-ims谱图中存在标记物的迁移谱特征峰，则根据所述标记物的迁移谱特征峰，判定大麦样品是否被禾谷镰刀菌污染。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物包括：2-丁烯酸己酯、2-己醛、3-甲基丁醛和5-甲基糠醛。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物的确定过程包括：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：首先对样品进行外观观察，如果样品外观出现明显霉菌污染现象，则直接判断大麦样品受污染已发生至中期或晚期，无需再做检测；如果大麦样品...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱江胜，范超，陆健，周国娟，吴殿辉，陈星光，
申请(专利权)人：江苏省农垦麦芽有限公司，
类型：发明
国别省市：
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