【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，特别是涉及一种人血清白蛋白/聚乳酸复合物纳米粒及其规模化制备方法。
技术介绍
1、免疫治疗是近年来兴起的一种全新的治疗方式，以激活或者恢复人体免疫系统的方式起到肿瘤杀伤功能。目前，全球获批被批准上市及临床试验研究的抗体大多数是单特异性的，只能与单个靶点相互作用。然而，癌症作为复杂的疾病往往由多因素诱发，涉及多种配体、受体以及信号传导通路之间的串扰，仅针对单一抗原的单特异性抗体治疗难以完全摧毁肿瘤细胞，因此，单抗药物的肿瘤免疫应答率低成为临床亟待解决的痛点问题。
2、随着抗体结构研究和生物工程技术的不断深入发展，双抗药物实现了产业化发展，同时也有许多研究机构开展了三抗、四抗等多抗药物研发。与单抗相比，双/多抗增加了抗原结合位点，显著提高患者应答率，成为目前药物研发的新趋势。据统计，目前针对双特异性抗体已有30多种平台被开发，用以改善由结构等因素诱发的制备和临床中的缺陷，例如fc片段抗体制备时容易发生重轻链错配，片段抗体分子量较小导致体内的半衰期短。这些构建技术基本都是采用了生物工程技术对分子进行改造，开发难度较大，双抗药物获批上市目前仅有6款，不过，其临床疗效和市场预期表现非常可观，未来仍有较高的市场增值空间。三特异性抗体的技术门槛更高，目前仍无产品上市，多数处于临床前研究。本专利技术的课题组前期采用基因重组技术，将片段抗体与白蛋白制备成融合蛋白，再将融合蛋白与高分子材料通过物理混合的方式制备成单/双/多特异性纳米抗体药物。这是一种变革性的单/双/多特异性抗体药物平台的构建策略，且通用性强，目前已申
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的目的提供了一种人血清白蛋白/聚乳酸复合物纳米粒的制备方法，并可以实现以片段抗体与白蛋白重组的融合蛋白/聚乳酸复合物纳米粒的规模化制备的同时，且获得的复合物纳米粒具有较高的蛋白载量和稳定性，粒径小于130nm且均一性好，为提供质量可控的单/双/多特异性抗体药物用于临床抗肿瘤治疗奠定基础。
2、本专利技术的第一方面，是提供了一种人血清白蛋白/聚乳酸复合物纳米粒的制备工艺。
3、一种复合物纳米粒的制备方法，所述复合物纳米粒由血清白蛋白和聚乳酸制备得到，所述制备方法包括如下步骤：
4、(1)高速分散混合：白蛋白的水相溶液与聚乳酸的有机相溶液通过高速分散机或分散机进行混合制备得到初乳；所述白蛋白和聚乳酸的质量比为1-12：1；
5、(2)高压均质：所述初乳经过微射流高压均质机均质后得到均一的o/w纳米乳液；
6、(3)减压干燥去除有机溶剂，得到稳定的纳米颗粒溶液；
7、(4)纯化：利用微滤膜除去纳米颗粒溶液中的大颗粒或杂质，然后再进行超滤除去游离蛋白，同时进行溶剂置换；
8、(5)膜过滤除菌，即得。
9、本专利技术的第二个目的是提供上述制备方法得到的血清白蛋白/聚乳酸复合物纳米粒。
10、本专利技术的第三个目的是提供所制备得到的所述复合物纳米粒在制备特异性抗体药物中的应用。
11、本专利技术通过优化制备工艺，特别是控制人血清白蛋白/聚乳酸的用量比以及制备时的体积比，获得了人血清白蛋白/聚乳酸复合物纳米粒的粒径小且均匀，具有较高的蛋白载量和稳定性，解决了实验室超声制备方法重复性差，乳化效果不佳，颗粒均一性较差、无法实现规模化制备等问题。
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1.一种复合物纳米粒的制备方法，所述复合物纳米粒由白蛋白和可降解的聚乳酸制备得到，其中，所述制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求所述的制备方法，其中，所述白蛋白和聚乳酸的质量比为2.5-10：1，优选为4-6：1，更优选为4.5-5.5：1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述水相溶液中白蛋白浓度为2.5mg/mL-20mg/mL，优选为2.5mg/mL-10mg/mL；更优选为3mg/mL-6mg/mL；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述白蛋白为血清白蛋白，优选所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、小鼠血清白蛋白或人血清白蛋白。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述聚乳酸为酯封端或为羧基封端的左旋聚乳酸，优选所述酯封端的左旋聚乳酸的分子量为10000Da～250000Da，优选为15000Da～240000Da，更优选为19000Da～140000Da；
6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或几种，优选为氯仿和二氯甲烷的一种或两者的混合溶剂。<...
【技术特征摘要】
1.一种复合物纳米粒的制备方法，所述复合物纳米粒由白蛋白和可降解的聚乳酸制备得到，其中，所述制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求所述的制备方法，其中，所述白蛋白和聚乳酸的质量比为2.5-10：1，优选为4-6：1，更优选为4.5-5.5：1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述水相溶液中白蛋白浓度为2.5mg/ml-20mg/ml，优选为2.5mg/ml-10mg/ml；更优选为3mg/ml-6mg/ml；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述白蛋白为血清白蛋白，优选所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、小鼠血清白蛋白或人血清白蛋白。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述聚乳酸为酯封端或为羧基封端的左旋聚乳酸，优选所述酯封端的左旋聚乳酸的分子量为10000da～250000da，优选为15000da～240000da，更优选为19000da～140000da；
6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或几种，优选为氯仿和二氯甲烷的一种或两者的混合溶剂。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述混合通过批次式高速分散机进行；所述批次式高速分散机进行混合的转速为6000rpm-22000rpm，优选为14000rpm-20000rpm；分散时间为30s-5min，优选为1min-2min。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述混合方式为管道式在线分散机混合，所述管道式在线分散机进行混合的线速度为10m/s-40m/s，进一步优选为20m/s-40m/s，更优选为20m/s-30m/s。
9.根据权利要求1-8任一项所述的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈松，黄晓仪，
申请(专利权)人：广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院，
类型：发明
国别省市：
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