【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药和药物制剂学领域，具体涉及一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、rna疗法指利用具有治疗疾病功能的核酸从根源上调控致病基因表达的疗法，主要分为mrna、小核酸以及核酸适配体。从2018年首款sirna药物成功获得fda批准，到2020年辉瑞和moderna开发的mrna新冠疫苗先后获得美国fda的“紧急使用授权”，rna疗法逐渐进入成果收获期。
2、核酸药物本身具备诸多优势，包括研发周期短、抗原选择广泛、安全性高、低剂量、稳定表达等特点。然而核酸药物由于分子量较大，分子被攻击破坏的位点较多，因此稳定性差，在体内容易被降解。此外核酸药物的磷酸二酯键骨架使核酸的负电性和亲水性极强，因此不易跨过细胞膜，体内递送效率极低。为了突破诸多的细胞外屏障和细胞内屏障，将核酸药物递送进入细胞和亚细胞器，递送载体是助力核酸药物发挥效果的关键之一。
3、脂质纳米粒(lipid nano particles，lnps)是目前最先进和主流的mrna递送系统，lnp通常含有四种组分即可离子化阳离子脂质、辅助磷脂、胆固醇和peg脂质，其中纳米颗粒外表面的peg脂质在提升纳米颗粒稳定性的同时，这种peg修饰也会使机体产生相应的抗体，从而导致多次给药后，机体自身往往会加快对此类纳米疫苗的清除。利用细胞外囊泡作为核酸的天然递送载体具有很大的潜力，然而生物囊泡往往面临着外源性的核酸药物包封效率低，溶酶体逃逸效率低下，以及难以纯化等挑战。如何进一步提高纳米疫苗在体内的生物相容性，提升长循环并
技术实现思路
1、为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒及其制备方法和应用，通过核酸与脂质的复合实现高效药物负载以及高效胞浆递送，并通过红细胞膜包被保证该递药系统在机体内具有良好的生物相容性，不易诱导机体产生抗体，实现长循环；解决现有技术的核酸递送药物在体内的生物相容性差、易被清除、核酸负载效率低、靶向递送效率低、胞浆递送效率低的问题。
2、为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
3、一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，包括：位于外层的红细胞壳层，位于中间层并包裹核酸的lpx核层；红细胞壳层与lpx核层的质量比为1:0.1-5；优选为1：0.5-1。
4、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分由可离子化脂质组成。
5、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75辅助磷脂；优选45-55可离子化脂质:45-55辅助磷脂。
6、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：90-99可离子化脂质:1-10peg脂质；95-99可离子化脂质:1-5peg脂质。
7、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75胆固醇；优选60-70可离子化脂质:30-40胆固醇。
8、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：40-60可离子化脂质:1-20辅助磷脂:20-59胆固醇；45-55可离子化脂质:1-10辅助磷脂:35-54胆固醇。
9、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：40-98可离子化脂质:1-55辅助磷脂:1-5peg脂质；优选85-98可离子化脂质:1-10辅助磷脂:1-5peg脂质。
10、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：50-75可离子化脂质:20-49胆固醇:1-5peg脂质；优选55-69可离子化脂质:30-40胆固醇:1-5peg脂质。
11、前述的任一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，可离子化脂质包括：1,2-二油醇-3－二甲基氨基-丙烷dodma、二油酰丙基氯化三甲铵dotma、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵dotap、十二烷基三甲基溴化铵dtab、溴化三甲基十四烷基铵ttab、溴化三甲基十六烷基铵ctab、溴化二甲基双十八烷基铵ddab、n-(2-精胺甲酰基)-n’,n’-双十八烷基甘氨酰胺dogs、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯dosc、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵dospa、1-辛基壬基8-[(2-羟乙基)[6-o-6-(十一烷氧基)己基]氨基]-辛酸酯sm-102、((4-羟基丁基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)alc-0315、4-(n,n-二甲基氨基)丁酸(二亚油基)甲酯dlin-mc3-dma、1,2-二油基-3-二甲氨基丙烷dodap或n,n-二甲基十六烷基胺c16-dma一种或多种。
12、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，辅助磷脂包括：二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、氢化大豆卵磷脂(hspc)、蛋黄卵磷脂(pc)或二油酰基卵磷脂(dopc)中的一种或多种。
13、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，peg脂质包括：培化二肉豆寇酸甘油酯(dmg-peg2000)。
14、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的粒径为50-250nm，优选为80-150nm。
15、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的制备方法，包括如下步骤：
16、s1，制备红细胞膜壳层囊泡，具体步骤包括：
17、将血液离心清洗，去除血红蛋白，离心得到红细胞膜原料，将得到的红细胞膜原料通过超声、初步破碎之后逐次挤出通过孔径为1000nm和400nm的聚碳酸酯多孔膜，得到均一的红细胞膜壳层囊泡；
18、s2，制备核酸脂质复合物核层lpx，具体步骤包括：
19、使用微流控法按照脂质组分配方合成lpx，获得的lpx用缓冲液稀释，用透析管纯化，换液多次，放置摇床直至透析结束；
20、s3，制备cm-lpx，具体步骤包括：
21、将红细胞膜与lpx以1:0.1-5(w/w)的比例混合均匀，之后用200nm的多孔膜挤出，反复挤出多次，得到cm-lpx，并透析纯化。
22、前述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的制备方法，s2，制备核酸脂质复合物核层lpx：
23、将核酸溶于缓冲液中，脂质溶于乙醇中，通过微流控法合成得到悬液，并采用透析的方式进行纯化，得到lpx；本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，包括：位于外层的红细胞壳层，位于中间层并包裹核酸的LPX核层；红细胞壳层与LPX核层的质量比为1:0.1-5。
2.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分由可离子化脂质组成。
3.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75辅助磷脂。
4.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分按照摩尔比包括：90-99可离子化脂质:1-10PEG脂质。
5.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75胆固醇。
6.根据权利要求1所述的一种
7.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分按照摩尔比包括：40-98可离子化脂质:1-55辅助磷脂:1-5PEG脂质。
8.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述LPX核层的脂质组分按照摩尔比包括：50-75可离子化脂质:20-49胆固醇:1-5PEG脂质。
9.根据权利要求2-8所述的任一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述可离子化脂质包括：1,2-二油醇-3－二甲基氨基-丙烷DODMA、二油酰丙基氯化三甲铵DOTMA、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵DOTAP、十二烷基三甲基溴化铵DTAB、溴化三甲基十四烷基铵TTAB、溴化三甲基十六烷基铵CTAB、溴化二甲基双十八烷基铵DDAB、N-(2-精胺甲酰基)-N’,N’-双十八烷基甘氨酰胺DOGS、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯DOSC、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵DOSPA、1-辛基壬基8-[(2-羟乙基)[6-O-6-(十一烷氧基)己基]氨基]-辛酸酯SM-102、((4-羟基丁基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)ALC-0315、4-(N,N-二甲基氨基)丁酸(二亚油基)甲酯Dlin-MC3-DMA、1,2-二油基-3-二甲氨基丙烷DODAP或N,N-二甲基十六烷基胺C16-DMA中的一种或多种。
10.根据权利要求6或7所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述辅助磷脂包括：二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、蛋黄卵磷脂(PC)或二油酰基卵磷脂(DOPC)中的一种或多种。
11.根据权利要求4、7、8所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，PEG脂质包括：培化二肉豆寇酸甘油酯(DMG-PEG2000)。
12.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的粒径为50-250nm。
13.一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
14.根据权利要求13所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的制备方法，其特征在于，S2，制备核酸脂质复合物核层LPX：
15.根据权利要求13所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的制备方法，其特征在于，S3，制备CM-LPX：
16.根据权利要求1-15任一项所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒的应用，其特征在于，应用于核酸药物递送；核酸包括：mRNA、RNAi；药物包括：治疗剂、抑制剂或疫苗；所述mRNA优选用于为预防或治疗疾病表达的功能性蛋白、治疗性单克隆抗体、B细胞表位、T细胞表位或肿瘤新抗原肽段的完整mRNA分子。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，包括：位于外层的红细胞壳层，位于中间层并包裹核酸的lpx核层；红细胞壳层与lpx核层的质量比为1:0.1-5。
2.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分由可离子化脂质组成。
3.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75辅助磷脂。
4.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：90-99可离子化脂质:1-10peg脂质。
5.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：25-75可离子化脂质:25-75胆固醇。
6.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：40-60可离子化脂质:1-20辅助磷脂:20-59胆固醇。
7.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：40-98可离子化脂质:1-55辅助磷脂:1-5peg脂质。
8.根据权利要求1所述的一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述红细胞壳层由红细胞膜壳层囊泡组成；所述lpx核层的脂质组分按照摩尔比包括：50-75可离子化脂质:20-49胆固醇:1-5peg脂质。
9.根据权利要求2-8所述的任一种细胞膜包被核酸脂质复合物纳米粒，其特征在于，所述可离子化脂质包括：1,2-二油醇-3－二甲基氨基-丙烷dodma、二油酰丙基氯化三甲铵dotma、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵dotap、十二烷基三...
【专利技术属性】
技术研发人员：莫凡，
申请(专利权)人：杭州纽安津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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