【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于烟草种植用检测，具体地说，本专利技术涉及一种烟嘧磺隆除草剂检测用抗原、抗体制备方法及其应用。
技术介绍
1、烟嘧磺隆是一种磺酰脲类除草剂，1987-1988年年由日本石原产业公司与美国杜邦公司联合开发，可有效去除玉米田中多种禾本科杂草以及阔叶杂草，现在也被用作烟田除草。其作用原理是通过抑制乙酰乳酸合酶(als)的合成，导致杂草体内缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合成受阻，最终杂草因细胞分裂受阻，生长停滞而枯死。研究表明，土壤对烟嘧磺隆的吸附性较弱，使其流动性较高，很容易污染地下水，且生产此类除草剂的农药厂所排放的废水中也含有较高浓度的烟嘧磺隆，对环境造成严重污染。因此，烟嘧磺隆残留的问题逐渐引起人们的关注。
2、专利号为cn201210132177.8的专利一种残留烟嘧磺隆对玉米毒性的检测方法，以烟嘧磺隆为目标除草剂，采用离心过滤装置直接分离土壤原位孔隙水并采用hplc测定其中的烟嘧磺隆浓度，以原位孔隙水中烟嘧磺隆浓度为基准建立适用于不同类型土壤的残留烟嘧磺隆对玉米毒性评价方法。该方法操作简单，快速，根据烟嘧磺隆在一种土壤中的剂量效应曲线和未知土壤中原位孔隙水浓度，能快速预测未知土壤中烟嘧磺隆的植物毒性；上述液相色谱法对烟嘧磺隆的检测是常用的方法，液相色谱法需要的仪器设备昂贵，并且操作复杂，对操作人员的要求较高，虽然检测准确，但多限于专业实验室内使用。
技术实现思路
1、为克服
技术介绍
中存在的问题，本专利技术公开了一种烟嘧磺隆除草剂检测用抗原、抗体制备方法及其应用
2、为实现上述目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：
3、所述烟嘧磺隆半抗原，其特征在于，烟嘧磺隆半抗原的结构式为：
4、
5、作为优选：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法包括：以甲酰胺磺隆为原料，经氧化反应，酰化反应两步对甲酰胺磺隆进行修饰，合成烟嘧磺隆半抗原。
6、作为优选：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法包括：还包括以下步骤：
7、(1)甲酰胺磺隆溶于乙醇溶液，并调节ph至9～10得到甲酰胺磺隆溶液；
8、(2)水浴条件下在甲酰胺磺隆溶液中分批加入kmno4反应，得到反应液；
9、(3)将反应液过滤洗涤，减压蒸馏后得到剩余物；
10、(4)剩余物溶于蒸馏水中，并调节至ph 4～3得到剩余物溶液；
11、(5)剩余物溶液用乙酸乙酯提取，合并有机相；
12、(6)有机相用无水硫酸钠干燥，脱溶，得棕黄色油状液体；
13、(7)棕黄色油状液体用硅胶干法上样柱层析提纯，脱溶，得到氨基甲酸磺隆；
14、(8)氨基甲酸磺隆溶于草酰氯，加入n,n-二甲基甲酰胺反应后得到氨基甲酸磺隆反应液；
15、(9)氨基甲酸磺隆反应液减压蒸馏得到剩余物，剩余物中加入正己烷，上述操作重复三次后蒸干得到酰氯化合物；
16、(10)酰氯化合物中加入无水四氢呋喃，冷却备用；
17、(11)制备2-氨基丁酸的氢氧化钠溶液；
18、(12)将酰氯化合物的四氢呋喃溶液分次加入2-氨基丁酸的氢氧化钠溶液中反应；
19、(13)反应液减压蒸馏，剩余物中加乙酸乙酯提取；
20、(14)提取液用无水硫酸钠干燥、蒸干，蒸干产品用硅胶柱层析提纯，脱溶后得到烟嘧磺隆半抗原；
21、所述步骤(1)中，乙醇溶液的体积比为：水：乙醇＝2～3:1；调节ph用2～6mo l/l的naoh溶液；
22、所述步骤(2)中，甲酰胺磺隆溶液和kmno4的摩尔比为1:1～1.2；kmno4加毕，保持冰浴反应30～35min，撤去冰浴后，室温反应4～5h得到反应液；
23、所述步骤(3)中，反应液过滤后用丙酮洗涤滤饼，收集洗涤液，减压蒸馏去除丙酮后得到剩余物；
24、所述步骤(4)中，用2～3mo l/l的hcl溶液调节ph；
25、所述步骤(6)中，硅胶干法上样柱层析提纯收集rf＝0.35的组分，所用展开剂为乙酸乙酯、石油醚、甲酸混合液，其中，乙酸乙酯：石油醚：甲酸＝5:1：0.2；
26、所述步骤(8)中，反应液的反应温度为80～85℃，反应时间为4～6h；所述步骤(11)中，取2-氨基丁酸溶于2～3mo l/l naoh溶液，低温冷却至0℃，得到2-氨基丁酸的氢氧化钠溶液；
27、所述步骤(12)中，将酰氯化合物的四氢呋喃溶液分5～8次加入4-氨基丁酸的氢氧化钠溶液中，每次至少间隔10～15min，2-氨基乙酸和化合物c的摩尔比为1～1.2:1，加毕，保持冰浴反应，3～4h；
28、所述步骤(14)中，硅胶柱层析提纯是收集rf＝0.08的组分，展开剂为乙酸乙酯、石油醚，乙酸乙酯：石油醚＝1:10。
29、作为优选：所述烟嘧磺隆检测用抗原为权利要求1所述半抗原通过edc法和混合酸酐法，分别和牛血清蛋白以及卵清蛋白偶联合成得到的烟嘧磺隆免疫原和烟嘧磺隆包被原；
30、所述烟嘧磺隆免疫原的结构式为：
31、
32、所述烟嘧磺隆包被原的结构式为：
33、
34、作为优选：所述烟嘧磺隆免疫原的制备方法包括以下步骤：
35、(1)烟嘧磺隆半抗原溶于n,n-二甲基甲酰胺，得到烟嘧磺隆半抗原的n,n-二甲基甲酰胺溶液；
36、(2)烟嘧磺隆半抗原溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、n-羟基琥珀酰亚胺酯反应，得到烟嘧磺隆半抗原活化溶液；(3)牛血清蛋白溶于bb缓冲液中，得到牛血清蛋白溶液；
37、(4)牛血清蛋白溶液澄清后滴加烟嘧磺隆半抗原活化溶液反应，得到反应液；
38、(5)反应液离心后，取上清液进行透析；
39、(6)吸出透析液后得到烟嘧磺隆免疫原，烟嘧磺隆免疫原分装冻存备用；
40、所述步骤(1)中，烟嘧磺隆半抗原在n,n-二甲基甲酰胺中的浓度为10～12mg/m l；
41、所述步骤(2)中，edc，nhs和烟嘧磺隆半抗原的摩尔比为2～2.5：1～1.2:1，反应时间1h，然后恢复室温反应过夜；
42、所述步骤(3)中，牛血清蛋白溶于0.02～0.05mo l/l的bb缓冲液中，牛血清蛋白在bb缓冲液中的浓度为12～15mg/ml，牛血清蛋白与烟嘧磺隆半抗原的摩尔比为1:40～50；
43、所述步骤(4)中，反应温度为20～25℃，反应时间为2～4h中；
44、所述步骤(5)中，将步骤(4)中的反应液离心，吸取上清液，加入透析袋中透析3～3.5天，透析液为0.02～0.05mo l/l的pbs，每天更换2次透析液，透析结束后，将透析袋中的溶液吸出，得到烟嘧磺隆免疫原，烟嘧磺隆免疫原分装冻存备用。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于，烟嘧磺隆半抗原的结构式为：
2.根据权利要求1中所述的一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法包括：以甲酰胺磺隆为原料，经氧化反应，酰化反应两步对甲酰胺磺隆进行修饰，合成烟嘧磺隆半抗原。
3.根据权利要求2中所述的一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法还包括以下步骤：
4.一种烟嘧磺隆检测用抗原，其特征在于：为权利要求1所述半抗原通过EDC法和混合酸酐法，分别和牛血清蛋白以及卵清蛋白偶联合成得到的烟嘧磺隆免疫原和烟嘧磺隆包被原；
5.根据权利要求4中所述的一种烟嘧磺隆检测用抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆免疫原的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求4中所述的一种烟嘧磺隆检测用抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆包被原的制备方法包括以下步骤：
7.一种烟嘧磺隆检测用抗体，其特征在于：为权利要求4中的烟嘧磺隆免疫原或烟嘧磺隆包被原经动物免疫的得到抗体，所述抗体能与烟嘧磺隆发生特异性免疫反应。
8.一种烟嘧磺隆检测试纸条，其特征在
9.根据权利要求8中所述的一种烟嘧磺隆检测试纸条，其特征在于：所述胶体金定性检测试纸条用于检测土壤中烟嘧磺隆的存在。
...【技术特征摘要】
1.一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于，烟嘧磺隆半抗原的结构式为：
2.根据权利要求1中所述的一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法包括：以甲酰胺磺隆为原料，经氧化反应，酰化反应两步对甲酰胺磺隆进行修饰，合成烟嘧磺隆半抗原。
3.根据权利要求2中所述的一种烟嘧磺隆半抗原，其特征在于：所述烟嘧磺隆半抗原的制备方法还包括以下步骤：
4.一种烟嘧磺隆检测用抗原，其特征在于：为权利要求1所述半抗原通过edc法和混合酸酐法，分别和牛血清蛋白以及卵清蛋白偶联合成得到的烟嘧磺隆免疫原和烟嘧磺隆包被原；
5.根据权利要求4中所述的一种烟嘧磺隆检测用抗原，其特征在于：所述烟嘧磺...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡杨，丁以纾，柴云霞，布云虹，周任虎，张红艳，赵联晶，孙嘉娴，徐世斌，周灵，李鹏恋，贾茹安，杨萌，
申请(专利权)人：云南省烟草公司楚雄州公司，
类型：发明
国别省市：
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