【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽合成，特别是一种灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法。
技术介绍
1、灯盏花乙素(scutellarin)，化学名为4’, 5 ,6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸苷，是从灯盏花中提取的一种黄酮类化合物，其具有增加血流量，改善微循环、扩张血管、降低血粘度、降血脂、促纤溶、抗血栓、抗血小板聚集等作用，可用于治疗心脑血管的损伤。此外，灯盏花乙素还广泛应用于临床治疗其他疾病，包括治疗一些糖尿病并发症、慢性肾脏疾病、低氧性肺动脉高压、慢性肺源性心脏病、类风湿性关节炎及肝功能损害等。由此可知，灯盏花乙素具有广泛、确切的药理活性，但其水溶性和脂溶性均不佳，生物利用度低，半衰期短等特点限制了其临床应用，因此，研究提高灯盏花乙素在水中的溶解度、增加其稳定性及提高生物利用度具有重要意义。
2、目前，已经有研究发现将rgd类多肽与灯盏花乙素结合形成一种灯盏花乙素修饰的多肽产生了预料不到的技术效果，不仅可以改善灯盏花乙素的溶解度，提高靶向性，增加生物利用度，提高药效，减少副作用产生；而且rgd类似物能够和血小板膜表面gpb/a受体结合，拮抗纤维蛋白原和血小板的结合，从而抑制血小板聚集。然而，在生产灯盏花乙素修饰的多肽的工艺过程中，偶联反应所用的缩合剂会与灯盏花乙素的羟基反应，产生难以除去的杂质，进而使目标产物难以得到很好的纯化，导致最终的纯化异常繁琐，纯化过程复杂，收率低。
3、因此，在灯盏花乙素修饰的多肽具有良好临床应用前景的展望下，研发一种成本低、收率高、杂质少、易纯化的制备方法，实现灯盏花乙素修饰的多肽的工业化生
技术实现思路
1、本专利技术的专利技术人研究发现，通过对灯盏花乙素进行预处理连接保护基团保护羟基，能够提高合成效率、减少杂质产生、简化纯化过程，进一步提高了灯盏花乙素修饰的多肽的纯度和含量，适用于灯盏花乙素修饰的多肽大规模产业化生产，在工业和医学领域具有广泛的应用前景。
2、鉴于此，本专利技术提供一种灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，所述方法包括以下步骤：
3、(1)对灯盏花乙素进行预处理连接保护基团r1，得到r1-灯盏花乙素，其中，r1-灯盏花乙素的结构如式(i)所示；
4、
5、(2)通过固相合成方法，将树脂与保护的氨基酸进行偶联，得到具有裸露氨基的多肽-固相树脂
6、(3)将r1-灯盏花乙素与具有裸露氨基的多肽-固相树脂偶联得到r1-灯盏花乙素修饰的多肽树脂
7、(4)对r1-灯盏花乙素修饰的多肽树脂进行切割，纯化，得到灯盏花乙素修饰的多肽。
8、可选地，步骤（1）所述保护基团r1选自bn、trt、ac、tms、tbs、cbz、pmb、dmb、mom、bom或mem中的任意一种。
9、本专利技术实施例中，bn表示苄基，trt表示三苯甲基；ac表示乙酰基；tms表示三甲基硅基；tbs表示叔丁基二甲硅基；cbz表示苄氧羰基；pmb表示对甲氧基苄基；dmb表示2,4-二甲氧基苄基；mom表示甲氧基甲基；bom表示苄氧甲基；mem表示2-甲氧基乙氧基甲基。
10、可选地，步骤（2）和步骤（3）偶联反应中所用的缩合剂选自hbtu/hobt/diea、hbtu/hobt/dic、hobt/dic、hoat/dic、tbtu/hobt/diea、hatu/hobt/dic、dipea/pybop或dipea/pyaop中的任意一种；
11、步骤（2）和步骤（3）偶联反应中所用的溶剂选自dmf、dcm、dmso或吡啶中的一种或多种。
12、可选地，步骤（4）切割反应所用的裂解液选自tfa/tis/h2o、tfa/dcm、tfa/h2o、tfa/h2o/phenol/edt或tfa/h2o/thioanisole/phenol/edt中的任意一种；步骤（4）中纯化为反相高效液相色谱纯化，纯化时流动相a相为0.1%三氟乙酸（v/v）乙腈溶液或0.5%醋酸乙腈溶液，流动相b相为0.5%醋酸水溶液或0.1%三氟乙酸水溶液。
13、可选地，步骤（2）所述多肽-固相树脂中的多肽选自：
14、（1）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)；
15、（2）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-trp(boc)；
16、（3）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-trp(boc)-pro；
17、（4）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)；
18、（5）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)-pro；
19、（6）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-val；
20、（7）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-val-pro；
21、（8）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-phe；
22、（9）homoarg(pbf)-gly-asp(otbu)-phe-pro；
23、（10）arg(pbf)-gly-asp(otbu)；
24、（11）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-trp(boc)；
25、（12）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-trp(boc)-pro；
26、（13）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)；
27、（14）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)-pro；
28、（15）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-val；
29、（16）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-val-pro；
30、（17）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-phe；
31、（18）arg(pbf)-gly-asp(otbu)-phe-pro；
32、（19）lys(boc)-gly-asp(otbu)；
33、（20）lys(boc)-gly-asp(otbu)-trp(boc)；
34、（21）lys(boc)-gly-asp(otbu)-trp(boc)-pro；
35、（22）lys(boc)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)；
36、（23）orn(boc)-gly-asp(otbu)-ser(tbu)-pro；
37、（24）orn(boc)-gly-asp(otbu)-val；
38、（25）orn(boc)-gly-asp(otbu)-val-pro；
39、（26）orn(boc)-gly-asp(otbu)-phe；
40、（27）orn(boc)-gly-asp(o本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述保护基团R1选自Bn、Trt、Ac、TMS、TBS、Cbz、PMB、DMB、MOM、BOM或MEM中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)偶联反应中所用的缩合剂选自HBTU/HOBt/DIEA、HBTU/HOBt/DIC、HOBt/DIC、HOAt/DIC、TBTU/HOBt/DIEA、HATU/HOBt/DIC、DIPEA/PyBOP或DIPEA/PyAOP中的任意一种；
4.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(4)切割反应所用的裂解液选自TFA/TIS/H2O、TFA/DCM、TFA/H2O、TFA/H2O/Phenol/EDT或TFA/H2O/thioanisole/Phenol/EDT中的任意一种；步骤(4)中纯化为反相高效液相色谱纯化，纯化时流动相A相为0.1％三氟乙酸(v/v)乙
5.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述多肽-固相树脂中的多肽选自：
6.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述对灯盏花乙素进行预处理连接保护基团R1，得到R1-灯盏花乙素的步骤，包括：
7.根据权利要求6所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述R1-X中的X选自Cl、Br或I中的任意一种；所述强碱选自NaOH、LiOH或KOH中的一种或多种；所述氢化物选自NaH、LiH或KH中的一种或多种；所述指定溶剂为吡啶。
8.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述对R1-灯盏花乙素修饰的多肽树脂进行切割，纯化，得到灯盏花乙素修饰的多肽的步骤，包括：
9.根据权利要求8所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述第一指定条件为15-25℃、钯碳催化、氢气氛围中；所述第二指定条件为以甲醇为溶剂，使用NaOH脱乙酰基。
10.根据权利要求1-9任一项所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述保护基团r1选自bn、trt、ac、tms、tbs、cbz、pmb、dmb、mom、bom或mem中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)偶联反应中所用的缩合剂选自hbtu/hobt/diea、hbtu/hobt/dic、hobt/dic、hoat/dic、tbtu/hobt/diea、hatu/hobt/dic、dipea/pybop或dipea/pyaop中的任意一种；
4.根据权利要求1所述的灯盏花乙素修饰的多肽的制备方法，其特征在于，步骤(4)切割反应所用的裂解液选自tfa/tis/h2o、tfa/dcm、tfa/h2o、tfa/h2o/phenol/edt或tfa/h2o/thioanisole/phenol/edt中的任意一种；步骤(4)中纯化为反相高效液相色谱纯化，纯化时流动相a相为0.1％三氟乙酸(v/v)乙腈溶液或0.5％醋酸乙腈溶液，流动相b相为0.5％醋酸水...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁文锋，
申请(专利权)人：深圳市维琪科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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