【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，特别涉及一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体及在检测试纸条中的应用。
技术介绍
1、猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,sads-cov)是一种新发现的猪肠道冠状病毒，能够引起猪急性腹泻综合征(swine acutediarrhea syndrome,sads)。sads-cov主要感染新生仔猪，能够引起5日龄以下的新生仔猪呕吐、水样腹泻、脱水，死亡率高达90％。此外，sads-cov可以在体外感染多种人类的细胞，可能存在跨物种传播的风险，目前还没有针对该病毒有效的药物和疫苗可用。
2、sads-cov属于冠状病毒科，冠状病毒属，是有囊膜的单股正链rna病毒。sads-cov基因组全长约27kb，其基因组排列顺序为：5’-orf1a/1b-s-orf3-e-m-n-ns7a-ns7b-3’，总共编码4个结构蛋白(s、e、m、n)以及16个非结构蛋白和3个辅助蛋白。其中，核衣壳蛋白(n)在结构蛋白中表达量最高，定位在病毒粒子内部，由376个氨基酸组成，大小约为42kda，包括ntd、ctd和rna结合域，在病毒基因组的复制、翻译和组装中发挥着重要作用。由于n蛋白高度保守且具有较好的免疫原性，因此常被作为病毒早期检测和诊断的靶蛋白。
3、目前sads-cov的检测方法主要有病毒分离、免疫组化、免疫荧光、酶联免疫吸附试验(elisa)、聚合酶链式反应(pcr)和逆转录实时荧光定量pcr(rt-qpcr)等
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体在制备检测试纸条中的应用。
3、本专利技术的再一目的在于提供一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的试纸条。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
5、一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，是单克隆抗体mcab-4或单克隆抗体mcab-5。
6、所述的单克隆抗体mcab-4的重链可变区包括氨基酸序列如seq id no:1所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no:2所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no:3所示的cdr3。
7、所述的单克隆抗体mcab-4的重链可变区为igg2a型，氨基酸序列如下所示：
8、evklqesgaelvrpgafvklsckasefnikdfymdwvrqrpeqglewigridpendntiydpkfqgkatitadtssntaylqlssltsedtavyyctrfllwalmdywgqgtsvtvss；其中，cdr1为efnikdfy，cdr2为idpendnt，cdr3为trfllwalmdy。
9、所述的单克隆抗体mcab-4的轻链可变区包括氨基酸序列如seq id no:4所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no:5所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no:6所示的cdr3。
10、所述的单克隆抗体mcab-4的轻链可变区为kappa型，氨基酸序列如下所示：
11、dilltqtplslsvslgdhasiscrssqsvvhsngntylewylqkpgqspellihkvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdfilkisrveaedlgvyycfqgshvpptfgggtkleik；其中，cdr1为qsvvhsngnty，cdr2为kvs，cdr3为fqgshvppt。
12、所述的单克隆抗体mcab-5的重链可变区包括氨基酸序列如seq id no:7所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no:8所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no:9所示的cdr3。
13、所述的单克隆抗体mcab-5的重链可变区为igg1型，氨基酸序列如下所示：
14、evklqesgpevvrpgvsvkisckgsgytftdydmhwvkqshakslewigvirtyngntdynqnfkgkatmtvdkssstaymelarltsedsaiyycargasyygnyegamdywgqgtsvtvas；其中，cdr1为gytftdyd，cdr2为irtyngnt，cdr3为argasyygnyegamdy。
15、所述的单克隆抗体mcab-5的轻链可变区包括氨基酸序列如seq id no:10所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no:11所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no:12所示的cdr3。
16、所述的单克隆抗体mcab-5的轻链可变区为kappa型，氨基酸序列如下所示：
17、divmtqdelsltvttgekvtmsckssqsllnsgsqknyliwyqqkpgqppklliywastresgvpdrftgsgsgtdftltissvqaedlavyycqndysspftfgggtkleikr；其中，cdr1为qsllnsgsqkny，cdr2为was，cdr3为qndysspft。
18、一种核酸分子，编码上述抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体。
19、所述的单克隆抗体mcab-4的重链可变区的编码核酸的序列如下所示：
20、gaggtgaaactgcaggagtctggggctgaacttgtgaggccaggggcctttgtcaagttgtcctgcaaagcttctgaattcaacatcaaagacttctatatggactgggtaagacagaggcctgaacagggcctggagtggattggacggattgatcctgaaaatgataatactatatatgacccgaagttccagggcaaggctactataacagcagacacatcctccaacaccgcctacctgcagctcagcagcctgacatctgaggacactgccgtctattactgtactagattcctactctgggcacttatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca。
21、所述的单克隆抗体mcab-4的轻链可变区的编码核酸的序列如下所示：
22、gatatcttgctgacccaaactccactctccctgtctgtcagtcttggagatcacgcctccatctcttgcagatctagtcagagcgttgtacatagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaacca本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白单克隆抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，是单克隆抗体McAb-4或单克隆抗体McAb-5；
2.根据权利要求1所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白单克隆抗体，其特征在于：
3.一种核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码权利要求1或2所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：
5.权利要求1或2所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白单克隆抗体在制备SADS-CoV检测试纸条中的应用，其特征在于：所述的检测试纸条使用单克隆抗体McAb-4和单克隆抗体McAb-5中的至少一种制备得到。
6.一种SADS-CoV检测试纸条，其特征在于：含有权利要求1或2所述的单克隆抗体McAb-4和单克隆抗体McAb-5中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的SADS-CoV检测试纸条，包括在底板上依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：在硝酸纤维素膜上设置有质控线和检测线，样品垫、结合垫、
8.根据权利要求7所述的SADS-CoV检测试纸条，其特征在于：还包括外壳，外壳上设置有加样孔和观察窗口；加样孔开口于样品垫的位置，从而可用于加入检测样品；观察窗口能观察到检测线和质控线。
9.根据权利要求7或8所述的SADS-CoV检测试纸条，其特征在于：
10.权利要求6～9任一项所述的SADS-CoV检测试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，是单克隆抗体mcab-4或单克隆抗体mcab-5；
2.根据权利要求1所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于：
3.一种核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码权利要求1或2所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：
5.权利要求1或2所述的抗猪急性腹泻综合征冠状病毒n蛋白单克隆抗体在制备sads-cov检测试纸条中的应用，其特征在于：所述的检测试纸条使用单克隆抗体mcab-4和单克隆抗体mcab-5中的至少一种制备得到。
6.一种sads-cov检测试纸条，其特征在于：含有权利要求1或2所述的单克隆抗体mcab-4和单克隆抗体mcab-5中的至少...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹永长，徐志超，刁晓苑，于海峰，郭铭威，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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