【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞培养，特别涉及一种干细胞及其培养方法。
技术介绍
1、干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞，在特定条件下，还可以增殖并定向分化成不同的功能细胞。因此干细胞的研究对生命体各个组织器官的更新和损伤修复有重要意义。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，adscs)是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞。脂肪干细胞能够在体外稳定增殖，且来源丰富、取材方便、细胞获取量较大，适宜大规模培养，具有很高的临床应用价值，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，脂肪干细胞在临床和科研领域被广泛研究和应用，包括再生医学、组织工程、整形美容、慢性疾病治疗等方面。
2、目前用于培养干细胞的培养基中一般都要加入胎牛血清，用于支持细胞生长、执行细胞的功能，但是由于血清组分不确定，不同批次的胎牛血清可能存在差异，包括成分、质量和活性等方面的变异性，这可能影响到干细胞培养的结果和稳定性；其次胎牛血清的价格相对较高，这会增加干细胞培养的成本；另外胎牛血清中含有异种蛋白质，可能引起免疫反应，影响到干细胞的生长和功能。无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，以满足干细胞的培养要求，同时避免因使用血清带来的诸多不利因素。血清替代成分较复杂，包括生长因子、蛋白等营养成分。无血清培养基是干细胞走向临床应用的重要条件，也是近年来的研究热点之一。因此，需要寻求一种高效、无血清培养基的干细胞的培养方法。
技术实现思路>
1、鉴于此，本专利技术提出一种干细胞及其培养方法，解决上述问题。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、一种干细胞的培养方法，包括如下步骤：
4、s1、脂肪干细胞获取：取人脂肪组织，用生理盐水洗涤后剪碎，置于培养皿中，向各培养皿中添加消化酶，于23-25℃下消化25-30min，然后用生理盐水洗涤，进行离心，最后收集沉淀，获得待培养的脂肪干细胞；
5、s2、脂肪干细胞的培养：将待培养的脂肪干细胞置于培养基中进行培养，设定培养条件，定期更换新鲜培养基；待脂肪干细胞长至80％融合时记为p0，收获细胞；
6、所述培养基包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基为dmem/f12培养基，所述添加剂包括：转铁蛋白、血清白蛋白、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、褐藻寡糖、fedratinib、熊果酸。
7、优选的，所述s1向各培养皿中按1～1.5g/l的量添加消化酶；消化酶由胰蛋白酶、α-n-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比6-10：5～7：1～3组成。
8、优选的，所述s1消化酶由胰蛋白酶、α-n-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比8：6：2组成。
9、优选的，所述s1的离心条件为1200～1800r/min离心5～10min。
10、优选的，所述添加剂的浓度为：转铁蛋白25-35μg/ml、血清白蛋白2-5mg/ml、表皮生长因子0.1-5ng/ml、成纤维细胞生长因子5-25ng/ml、褐藻寡糖10-25μg/ml、fedratinib1-5μm、熊果酸15-25μm。
11、优选的，所述添加剂的浓度为：转铁蛋白30μg/ml、血清白蛋白4mg/ml、表皮生长因子3ng/ml、成纤维细胞生长因子15ng/ml、褐藻寡糖18μg/ml、fedratinib 3μm、熊果酸20μm。
12、优选的，所述培养条件为37～38℃、co2浓度5％。
13、本专利技术还提供了一种干细胞，所述干细胞通过上述的方法培养而得。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
15、(1)本专利技术提供的干细胞培养方法采用复合消化酶消化脂肪组织，通过合理配比消化酶组成，有效提高了所提取得到的人体脂肪干细胞的数量和成活率。
16、(2)本专利技术提供的干细胞培养方法中使用的培养基不添加动物血清，可以规避动物血清中的异源体，合理配比添加剂成分，通过添加褐藻寡糖、fedratinib、熊果酸显著提高脂肪干细胞的增殖速率。
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1.一种干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述S1向各培养皿中按1～1.5g/L的量添加消化酶；消化酶由胰蛋白酶、α-N-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比6-10：5～7：1～3组成。
3.根据权利要求2所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述S1消化酶由胰蛋白酶、α-N-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比8：6：2组成。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述S1的离心条件为1200～1800r/min离心5～10min。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述添加剂的浓度为：转铁蛋白25-35μg/ml、血清白蛋白2-5mg/mL、表皮生长因子0.1-5ng/ml、成纤维细胞生长因子5-25ng/ml、褐藻寡糖10-25μg/ml、Fedratinib 1-5μM、熊果酸15-25μM。
6.根据权利要求5所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述添加剂的浓度为：转铁蛋白30μg/ml、血清白蛋白
7.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述S2培养条件为37～38℃、CO2浓度5％。
8.一种干细胞，其特征在于，通过权利要求1～7任一项所述的方法培养而得。
...【技术特征摘要】
1.一种干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述s1向各培养皿中按1～1.5g/l的量添加消化酶；消化酶由胰蛋白酶、α-n-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比6-10：5～7：1～3组成。
3.根据权利要求2所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述s1消化酶由胰蛋白酶、α-n-乙酰半乳糖胺酶与透明质酶按重量比8：6：2组成。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述s1的离心条件为1200～1800r/min离心5～10min。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于，所述添加剂的浓度为：转铁蛋白25-35μ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张菊，王静雪，王晓光，
申请(专利权)人：海南博鳌未来医院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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