金针菇多孢自交育种方法技术

本发明专利技术公开了一种金针菇多孢自交育种方法，该方法得到的菌株具有生长速度快、产量高、外型美观、遗传稳定、抗逆性强等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食用菌育种领域，具体的说涉及一种用多孢自交育种方法选育金针菇菌种的过程。
技术介绍
金针菇是我国工厂化生产发展最快的食用菌种类。几十年来，为了跟上产业发展 的要求，国内同行一直致力于金针菇新品种的选育。其中应用最频繁的就是直接将两个亲 本杂交配对的育种方法。然而，此种方法的缺点在于，对于亲本的选择具有局限性，即表现 出目的性状的亲本其自身携带的基因多为杂合基因，或带有隐性有害基因，造成目的性状 遗传不稳定，大大降低育种品质和育种效率。所以，我们亟需开辟食用菌遗传育种研究的新 方法。 在作物育种上经常利用自交的方法得到优质品种。据资料显示，在玉米、甘蔗等植 物的自交后代中，会表现出亲本所没有的优良性状，即若干性状出现超亲现象。自交育种在 遗传与育种中有以下重要作用1.杂合基因分离、纯化；2.淘汰有害隐性基因，改良遗传组 成；3.稳定遗传性状。然而，目前还未见将自交的方法应用到金针菇等食用菌的选育研究， 并且，未见运用多孢自交的方法成功选育出金针菇优秀新菌种的研究和报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种，应用于金针 菇工厂化栽培优秀新菌种的选育中。 本专利技术的，包括以下步骤 (1)孢子收集收集不同亲本菌株的子实体单孢子； (2)多孢自交群体的建立分别将各个亲本的单孢子混合，在培养基上进行多孢 自交； (3)多孢自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株； (4)单孢分离收集优良自交菌株的子实体单孢子，培养获得单核菌丝； (5)杂交群体的建立单核菌丝杂交配对，获得杂交菌种； (6)杂交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。 具体方法步骤为 (1)孢子收集收集不同菌株的子实体单孢子 分别取不同亲本菌株发育完全的金针菇鲜子实体，于无菌环境下剪去菌柄，将有 菌褶一面平贴在平皿上，过夜，收集孢子印。(2)多孢自交群体的建立分别将亲本的单孢子混合，在培养基上进行多孢自交； 上述孢子液涂布于PDA平板中，23t:下黑暗中倒置培养5 10d，在平板上肉眼可见 大片密集菌落后，用接种针挑小菌丝块转接于PDA平板上，继续培养3 5d。在菌落外缘挑小 菌丝块压水玻片于显微镜下(放大400倍)观察菌丝有无锁状联合，菌丝有锁状联合的为所需双核体，即多孢自交后代。在4t:条件下保存备用。(3)多孢自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株； 工厂化条件下进行栽培。测量日均生长速度，观察生长势。子实体成熟时采收，并 拍照。记录子实体单瓶产量、颜色、菌柄长度、直径、菌盖直径及出菇期、栽培周期等数据。 按照性状筛选优良菌株。筛选标准为菇体白色，单瓶产量高(大于180g)，栽培期 短(小于45d)，燕形整齐、美观(菌盖直径1 2. 5cm，菌柄长度大于13cm，菌柄直径1 3cm。) (4)单孢分离收集优良自交菌株的子实体单孢子，培养获得单核菌丝； 孢子收集方法同上。将50iiL孢子液涂布于PDA平板中后，23t:下黑暗中倒置培 养3 5d，在平板上肉眼可见微小菌落后，用接种针挑单个菌落转接于PDA平板上，继续培养 3 5d(条件同上)。在菌落外缘挑小菌丝块压水玻片于显微镜下(放大400倍)观察菌丝有无锁状联合，菌丝无锁状联合的为所需单核菌丝。在4t:条件下保存备用。(5)杂交群体的建立单核菌丝杂交配对，获得杂交菌种； 每个菌株随机挑选30个单核体，按预定组合进行单核体间的相互配对，配对的2 个单核体间距lcm接种在PDA平板上，23t:黑暗培养3 5d，用接种针在交界菌落边缘挑小菌 丝块(约0.5X0.5cm2)转接于PDA平板上，培养3 5d，重复挑取转接培养广2次。在菌落 外缘挑取菌丝，观察有无锁状联合，有锁状联合的为配对成功的双核体，即杂交菌种。 (6)杂交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。 运用本专利技术的方法选育出的金针菇菌种具有生长速度快、产量高、外型美观、遗传 稳定、抗逆性强等特点。具体实施例方式— .培养基与培养料的制备 培养基为PDA培养基。配方去皮马铃薯200g煮汁，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水 1000mL，pH 7。置于15 X 150mm小试管中，管口用硅胶塞塞住。 培养料分原种和栽培种培养料。原种培养料配方木屑80%，麸皮20%，含水量 50X，初始pH 6.5。栽培种培养料配方木屑30%，玉米芯20%，棉籽壳20%，麸皮15%， 米糠15%，含水量61% 62%。初始p朋.5。木屑一般使用阔叶树木屑，其它原料必须保 持新鲜、干燥，无虫蛀和霉变现象，颗粒度符合设备和工艺要求。原料保存过程中应通风换 气，保持储藏环境干燥。原料混合时，按配方要求准确定量，使物料充分搅拌均匀，加水至含 水量达到61 % 62% 。根据季节变化调整搅拌时间，防止混合料酸败。使用1100mL耐高 温塑料瓶，要求装料紧实度均匀，中间打孔至瓶底，装瓶后应立即盖上瓶盖。 二.灭菌及冷却 PDA培养基采用高压灭菌，灭菌温度为121°C ，保持30分钟。 培养料在装瓶结束后立即进行灭菌处理，一般采用高压灭菌。灭菌时间为料的中心温度必须达到12rC，并保持120分钟，必须彻底杀灭培养料中的所有微生物。 灭菌后瓶框推入冷却室进行强制冷却，冷却室安装净化装置和制冷设备。冷却至瓶内温度25t:以下，方可接种。 三.接种及培养 接种操作人员必须符合无菌操作的要求，接种量要求盖满培养料表面至瓶口，这样能使菌丝生长均匀，并能有效防止杂菌污染。工厂化栽培使用自动接种机接种，接种量为 3% (v/v)。 然后置于培养室发菌。培养室温度控制在2(TC 22t:，湿度维持在60^ 70^， C02浓度控制在2500ppm以下，直到菌丝发透培养料。待菌丝发透培养料后，采用专用搔菌 刀头进行搔菌处理，去掉表面接种块并使出菇表面平整，向瓶中注满水。催蕾控制温度为 13°C 15。C，湿度为90% 95%， 0)2浓度为2500卯m以下，散射光，直到形成鱼籽般的菇 蕾。看到子实体雏形并长出瓶口 l厘米左右即可套袋。出菇温度控制为4t: 8t:，湿度为 90%以上，0)2浓度为3000 3500卯m，散射光。 实施例一 亲本菌株F3和FM为中国农业微生物菌种保藏中心上海食用菌分中心保藏。(保 藏号分别为4150、4151。) 将发育完全的F3和FM金针菇鲜子实体采集，收集孢子，PDA培养基上进行多孢自 交，获得双核体，即多孢自交后代。 随后将F3和FM的多孢自交后代进行工厂化栽培。然后进行性状测定，挑选出在 生长速度、外观、产量、抗逆性等方面符合育种目标性状的自交后代菌株F3-31、FM-83。 然后将挑选出的自交后代菌株按所述方法收集孢子印，进行单孢分离，得到各个 自交后代的单核菌丝，然后进行单核菌丝的杂交配对，得到杂交双核菌丝，再进行工厂化栽 培及性状测定。最后选育出，由F3-31-10和FM-83-3编号单核菌丝杂交配对而成的，菇体 洁白、生长速度快、菇形整齐美观、产量高、抗逆性强的金针菇新菌种G1。(中国农业微生物 菌种保藏中心上海食用菌分中心保藏。保藏号为4152。) 新菌种Gl与我国传统的单纯杂交的金针菇育种方法得到的菌种FM的比较 选育方法传统方法多孢自交方法代表菌种FMGl本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金针菇多孢自交育种方法，包括以下步骤：（１）孢子收集：收集不同亲本菌株的子实体单孢子；（２）多孢自交群体的建立：分别将各个亲本的单孢子混合，在培养基上进行多孢自交；（３）多孢自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株；（４）单孢分离：收集优良自交菌株的子实体单孢子，培养获得单核菌丝；（５）杂交群体的建立：单核菌丝杂交配对，获得杂交菌种；（６）杂交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐珍，尚晓东，谭琦，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，上海国森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]