【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本披露涉及用于确定能够诱导软骨形成的化合物的生物活性的方法。
技术介绍
1、软骨是通过被称为软骨形成的过程而形成的。体内软骨形成首先涉及间充质干细胞分化成软骨细胞，然后软骨细胞分泌分子(例如，胶原蛋白和蛋白聚糖)形成包含软骨的细胞外基质。软骨可能像任何其他组织一样受损；然而，与其他组织不同，软骨的修复能力非常有限。结果是受损的软骨会随着时间的推移逐渐恶化。事实上，骨关节炎(oa)是影响全世界3亿多人的最常见的退行性关节疾病，其标志是关节软骨的进行性破坏。oa进展由软骨基质的酶促降解和缺陷型软骨基质形成介导。由于迄今为止唯一的治疗选择是疼痛管理和/或关节置换，因此通过开发能够诱导软骨形成的治疗剂，例如通过开发刺激内源性间充质干细胞分化为软骨细胞的治疗剂，已经进行了大量的研究工作以针对改善软骨的自我修复，从而使得关节软骨再生。然而，诱导软骨形成的治疗剂的鉴定可能具有挑战性且耗时。因此，需要开发能够快速且准确地确定此类治疗剂的诱导软骨形成的活性的方法。
技术实现思路
1、本披露提供了一种确定angptl多肽的诱导软骨形成活性的方法。在一些实施例中，该方法包括将细胞培养物暴露于angptl多肽，测量软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平，以及将表达和/或分泌水平与未暴露于所述angptl多肽的细胞培养物进行比较。在一些实施例中，如与未暴露于angptl多肽的细胞培养物相比，生物标志物的表达和/或分泌水平增加。在其他实施例中，如与未暴露于angptl多肽的细胞培养物相比，生物标志物的表达和/
2、在一些实施例中，angptl多肽是angptl2、antptl3、angptl4或其衍生物。在优选的实施例中，angptl多肽是seq id no:2。在一个实施例中，所使用的细胞培养物由软骨细胞组成。在某些实施例中，软骨细胞是永生化软骨细胞。在另一个实施例中，软骨细胞是c-28/12细胞。在另一个实施例中，细胞培养物由间充质干细胞组成。在优选的实施例中，间充质干细胞是人的细胞。
3、在一个实施例中，通过能够定量软骨形成生物标志物表达的方法测量软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平。在一个实施例中，对生物标志物的表达进行定量的方法是免疫吸附测定。在某些实施例中，免疫吸附测定是elisa或蛋白质印迹。在另一个实施例中，软骨形成生物标志物是膜联蛋白a6、cd44、cd151、itm2a、fam20b、foxc1、foxc2、sox5、sox6、sox9、acan、组织蛋白酶b、chad、chadl、软骨粘附素(chondroadherin)、胶原蛋白ii、胶原蛋白iv、胶原蛋白ix、crtac1、dspg3、核心蛋白聚糖、ibsp/唾液蛋白ii、母系蛋白-1、母系蛋白-3、母系蛋白-4、mia、奥托拉普林(otoraplin)/otor、urb、dkk1、fbn2、lep、alpl、corin、clec3b或comp。在优选的实施例中，软骨形成生物标志物是dkk1。
4、在另一个实施例中，本文提供了一种确定诱导软骨形成的angptl多肽的活性的方法。在该实施例中，该方法包括向细胞培养物中添加一定量的angptl多肽并测量dkk1分泌的量，其中与未在其中添加多肽的细胞培养物中dkk1分泌的量相比，暴露于多肽后dkk1分泌的量增加。在一些实施例中，angptl多肽是angptl2、angptl3、angptl4或其衍生物。在优选的实施例中，angptl多肽是seq id no:2。
5、在另一个实施例中，本文提供了一种确定诱导软骨形成的angptl多肽的活性的方法。在该实施例中，该方法包括向细胞培养物中添加一定量的angptl多肽，并测量sox9、acan、comp、lep、alpl、clec3b、corin或fbn2表达和/或分泌的量，(i)其中与未在其中添加多肽的细胞培养物中sox9、acan和comp表达/分泌的量相比，暴露于多肽后sox9、acan和comp表达/分泌的量增加；和(ii)其中与未在其中添加多肽的细胞培养物中lep、alpl、clec3b、corin和fbn2表达/分泌的量相比，暴露于多肽后lep、alpl、clec3b、corin和fbn2表达/分泌的量减少。
6、在一些实施例中，当在本文所披露的测定中测量sox9、acan、comp、lep、alpl、clec3b、corin或fbn2表达和/或分泌时，angptl多肽是angptl2、angptl3、angptl4或其衍生物。在优选的实施例中，angptl多肽是seq id no:2。
7、在一些实施例中，本文提供了鉴定具有诱导软骨形成作用的物质的方法，该方法包括以下步骤：培养能够表达软骨形成生物标志物的细胞，向细胞培养物中添加所述物质，以及在添加所述物质后，测量软骨形成生物标志物的分泌。在一个实施例中，与未暴露于该物质的细胞培养物中生物标志物的水平相比，如果在添加该物质后软骨形成生物标志物的标志物水平发生改变，则该物质具有诱导软骨形成的作用。在某些实施例中，软骨形成生物标志物的水平增加。在其他实施例中，软骨形成生物标志物的水平降低。在某些实施例中，软骨形成生物标志物是膜联蛋白a6、cd44、cd151、itm2a、fam20b、foxc1、foxc2、sox5、sox6、sox9、acan、组织蛋白酶b、chad、chadl、软骨粘附素、胶原蛋白ii、胶原蛋白iv、胶原蛋白ix、crtac1、dspg3、核心蛋白聚糖、ibsp/唾液蛋白ii、母系蛋白-1、母系蛋白-3、母系蛋白-4、mia、奥托拉普林(otoraplin)/otor、urb、dkk1、fbn2、lep、alpl、corin、clec3b或comp。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种确定ANGPTL多肽的诱导软骨形成活性的方法，所述方法包括将细胞培养物暴露于所述ANGPTL多肽，测量软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平，以及将所述表达和/或分泌水平与未暴露于所述ANGPTL多肽的细胞培养物进行比较。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述ANGPTL多肽是SEQ ID NO:2。
3.如权利要求1-2所述的方法，其中所述细胞培养物由软骨细胞组成。
4.如权利要求1-2所述的方法，其中所述细胞培养物由间充质干细胞组成。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述间充质干细胞是人的细胞。
6.如权利要求1-5所述的方法，其中通过免疫吸附测定测量所述软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平。
7.如权利要求1-6所述的方法，其中所述免疫吸附测定是ELISA或蛋白质印迹。
8.如权利要求1-7所述的方法，其中所述生物标志物是膜联蛋白A6、CD44、CD151、ITM2A、FAM20B、FoxC1、FoxC2、SOX5、SOX6、SOX9、ACAN、组织蛋白酶B、CHAD、CHADL、
9.如权利要求8所述的方法，其中所述生物标志物是DKK1。
10.如权利要求1-9所述的方法，其中与未暴露于所述ANGPTL多肽的细胞培养物相比，所述生物标志物DKK1、SOX9、ACAN或COMP的表达和/或分泌水平增加。
11.如权利要求1-9所述的方法，其中与未暴露于所述ANGPTL多肽的细胞培养物相比，所述生物标志物LEP、ALPL、CLEC3b、CORIN或FBN2的表达和/或分泌水平降低。
12.一种确定诱导软骨形成的ANGPTL多肽的生物活性的方法，所述方法包括向细胞培养物中添加一定量的多肽，以及测量DKK1分泌的量，其中与未添加所述多肽的细胞培养物的DKK1分泌相比，暴露于所述多肽后的DKK1分泌的增加有所增加。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述ANGPTL多肽是ANGPTL2、ANGPTL3或ANGPTL4。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述化合物是ANGPTL3衍生物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述化合物是SEQ ID NO:2。
16.如权利要求12所述的方法，其中所述化合物是ANGPTL2衍生物。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述化合物是SEQ ID NO:4。
18.如权利要求12所述的方法，其中所述化合物是ANGPTL4衍生物。
19.一种鉴定具有诱导软骨形成作用的物质的方法，所述方法包括以下步骤：
20.如权利要求19所述的方法，其中所述软骨形成生物标志物的水平增加。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述软骨形成生物标志物的水平降低。
22.如权利要求20-21所述的方法，其中所述软骨形成生物标志物是膜联蛋白A6、CD44、CD151、ITM2A、FAM20B、FoxC1、FoxC2、SOX5、SOX6、SOX9、ACAN、组织蛋白酶B、CHAD、CHADL、软骨粘附素、胶原蛋白II、胶原蛋白IV、胶原蛋白IX、CRTAC1、DSPG3、核心蛋白聚糖、IBSP/唾液蛋白II、母系蛋白-1、母系蛋白-3、母系蛋白-4、MIA、奥托拉普林(Otoraplin)/OTOR、URB、DKK1、FBN2、LEP、ALPL、CORIN、CLEC3b或COMP。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种确定angptl多肽的诱导软骨形成活性的方法，所述方法包括将细胞培养物暴露于所述angptl多肽，测量软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平，以及将所述表达和/或分泌水平与未暴露于所述angptl多肽的细胞培养物进行比较。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述angptl多肽是seq id no:2。
3.如权利要求1-2所述的方法，其中所述细胞培养物由软骨细胞组成。
4.如权利要求1-2所述的方法，其中所述细胞培养物由间充质干细胞组成。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述间充质干细胞是人的细胞。
6.如权利要求1-5所述的方法，其中通过免疫吸附测定测量所述软骨形成生物标志物的表达和/或分泌水平。
7.如权利要求1-6所述的方法，其中所述免疫吸附测定是elisa或蛋白质印迹。
8.如权利要求1-7所述的方法，其中所述生物标志物是膜联蛋白a6、cd44、cd151、itm2a、fam20b、foxc1、foxc2、sox5、sox6、sox9、acan、组织蛋白酶b、chad、chadl、软骨粘附素、胶原蛋白ii、胶原蛋白iv、胶原蛋白ix、crtac1、dspg3、核心蛋白聚糖、ibsp/唾液蛋白ii、母系蛋白-1、母系蛋白-3、母系蛋白-4、mia、奥托拉普林(otoraplin)/otor、urb、dkk1、fbn2、lep、alpl、corin、clec3b或comp。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述生物标志物是dkk1。
10.如权利要求1-9所述的方法，其中与未暴露于所述angptl多肽的细胞培养物相比，所述生物标志物dkk1、sox9、acan或comp的表达和/或分泌水平增加。
11.如权利要求1-9所述的方法，其中与未暴露于所述angptl多肽的细胞培养物相比，所述生物标志物l...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·S·A·阿勒，C·雅各比，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。