【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测，尤其是涉及一种完全区分dna和rna的纯化方法及rna纯化试剂盒。
技术介绍
1、dna、rna和蛋白质构成了生命的三大基本物质。dna转录为rna，而rna翻译合成蛋白质，这一过程是生物体内遗传信息传递和生物功能实现的基础，也是基础科学研究的主要研究对象。核酸提取是科学研究不可或缺的关键步骤，为遗传学、分子生物学和基因组学提供基础材料。此外，核酸提取在医学临床中广泛应用，是疾病分子诊断的重要基础步骤。精确高效的核酸提取是确保分子诊断实验顺利进行的不可或缺的“第一步”，为医学研究提供了可靠的实验基础。
2、1990年，boom等人首次专利技术了硅胶柱法用于核酸提取的方法，研究发现，硅胶对核酸有亲和性，可以通过调整盐浓度和ph来控制核酸在硅胶表面的结合和解离进而实现核酸的纯化和分离。基于硅胶法提取核酸的发现是分子生物学领域的一项重要创新，其基本过程主要分为细胞裂解，硅胶结合，漂洗，核酸洗脱等过程，随着基因检测、个性化给药、产前诊断等技术的普及，生物行业对高通量、自动化的需求日益增长。相较于传统核酸提取方法，硅胶法提取由于具有简单高效，不使用酚和氯仿等有毒试剂，高产量高纯度，自动化高通量等明显优势，使其成为分子生物学研究中广泛应用的核酸提取方法。
3、正常情况下，核酸表面被一层由水分子形成的亲水膜所覆盖，以维持其水溶性。硅胶与核酸在高浓度盐离子和较低ph(≤7.0)的情况下，通过由盐离子形成的阳离子桥效应（硅胶膜和核酸均带有负电荷），核酸能够与硅胶膜有效地发生结合，通过漂洗和洗脱，从而实现
技术实现思路
1、本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种完全区分dna和rna的纯化方法及rna纯化试剂盒。
2、为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
3、第一方面，本申请提供了一种完全区分dna和rna的纯化方法，包括以下步骤：
4、s1、在测试样品中加入dna和rna，同时加入rna去污染液混匀，获得混匀液；
5、s2、取步骤s1获得的混匀液加入硅胶柱，室温离心，然后用dna纯化试剂盒纯化，获得dna样品，质检；
6、s3、收集流穿液，向流穿液中加入乙醇，然后加入硅胶柱，向硅胶柱加入rna漂洗液漂洗，获得rna样品，质检；
7、所述rna去污染液包括质量浓度为1~4m的异硫氰酸胍或者盐酸胍、和质量浓度为0.1m~1m的tris-hcl，所述rna去污染液的ph≥6.8。
8、在本申请的技术方案中，发现在一定浓度的rna去污染液（1-4m异硫氰酸胍或者盐酸胍、和质量浓度为0.1m~1m的tris-hcl，ph≥6.8）的条件下，发现dna和rna与硅胶柱的结合存在明显的拐点，找到了硅胶提取方法完全区分dna和rna的纯化方式。
9、本申请通过大量测试硅胶与dna和rna在不同条件下的结合能力，发现在一定条件下，dna和rna与硅胶结合的理化性质是不一样的，通过这样的理化性质，完全可以把dna和rna区分；将dna和rna经过rna去污染液（1-4m异硫氰酸胍/盐酸胍，0.1m-1m tris-hcl，ph≥6.8）即可区分dna，在这个范围内dna与硅胶结合，而rna不能与硅胶结合而存在于rna流穿液中；然后向流穿液中加入乙醇，rna又能与硅胶结合，因此，找到了硅胶高效完全分离dna和rna的纯化方法，有望兼容高通量自动化rna提取方案的开发。
10、本申请还测试了在无缓冲液体系，极端缓冲液体系中dna和rna的分离效果，仅需要30s即可实现dna污染去除。除去dna污染之后还进行了rna纯化，使其od值260/280 260/230达到了下游兼容核酸质谱检测和高通量测序的最高纯度标准，整个流程仅花费4.5min。
11、采用本申请的纯化方法还可以与其它公司商用rna纯化试剂盒兼容，考虑到硅胶核酸提取方式的普及性，该原理和发现对于推动核酸分离纯化领域的发展和自动化高通量的科研探索和大规模流行病学的临床检测及rna疫苗开发具有重要作用和意义。
12、作为本申请所述完全区分dna和rna的纯化方法的优选实施方式，所述rna去污染液的ph为6.8~10。
13、盐浓度和ph被认为是核酸（dna和rna）硅胶提取核心的两个因素。但是目前不管是dna硅胶提取还是rna硅胶提取基本都在ph小于7的条件下进行（现实情况是ph小于6.8，dna和rna都能与硅胶结合，目前市面上现有所有的商用及实验条件不管分离dna还是分离rna都是用ph小于7的条件，并且认为dna/rna与硅胶的结合在结合阶段是无法区分的），本申请知道硅胶提取需要一定盐浓度（离液盐）必须在有盐的浓度下但这个盐浓度范围较广，同时必须要一定ph，通常认为ph＜7，而目前并不清楚当溶液ph偏离人们认知的合理范围时对dna和rna提取有何影响。
14、本申请发现当ph为6.8 /7.4/8/9/10时，硅胶柱与dna和rna的结合能力完全不同，dna和rna经过rna去污染液（1-4m异硫氰酸胍/盐酸胍，0.1m-1m tris-hcl，ph≥6.8），dna能和硅胶结合，而不与rna结合，所以rna存在于流穿液中，但是本申请又发现了这些流穿液不管ph为多少，只要与等体积乙醇混合，又能重新被硅胶柱高效吸附。通过ph能使dna和rna与硅胶区分结合，这一发现和原理从未被报道；同时不同ph值下rna流穿液通过等体积乙醇混合都能被硅胶柱高效吸附的现象也从未被发现，该原理的发现可应用于自动化的核酸提取方式的开发，因此本申请开发了高效的去dna提rna的纯化方法，整个流程只需4.5min。
15、作为本申请所述完全区分dna和rna的纯化方法的优选实施方式，所述测试样品和rna去污染液的体积比为1：（1.5~4）。
16、采用上述体积比的测试样品和rna去污染液，可以保证盐浓度和ph值，有利于完全纯化dna和rn本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述RNA去污染液的pH为6.8~10。
3.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述测试样品和RNA去污染液的体积比为1：（1.5~4）。
4.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述DNA和RNA的质量比为（1~10）：1。
5.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述流穿液和乙醇的体积比为1:（1~2）。
6.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述RNA漂洗液包括RNA漂洗液I和RNA漂洗液II；
7.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述测试样品包括无缓冲液体系或极端缓冲液体系；
8.如权利要求1所述的完全区分DNA和RNA的纯化方法，其特征在于，所述步骤S2离心的速度为12000g，离心的时间为30s~180s
9.一种RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述RNA纯化试剂盒包括RNA去污染液、RNA漂洗液I和RNA漂洗液II；
10.如权利要求9所述的RNA纯化试剂盒在纯化含有DNA污染的RNA样品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种完全区分dna和rna的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的完全区分dna和rna的纯化方法，其特征在于，所述rna去污染液的ph为6.8~10。
3.如权利要求1所述的完全区分dna和rna的纯化方法，其特征在于，所述测试样品和rna去污染液的体积比为1：（1.5~4）。
4.如权利要求1所述的完全区分dna和rna的纯化方法，其特征在于，所述dna和rna的质量比为（1~10）：1。
5.如权利要求1所述的完全区分dna和rna的纯化方法，其特征在于，所述流穿液和乙醇的体积比为1:（1~2）。
6.如权利要求...
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