【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，具体涉及一种龟鹿补肾片的质量检测方法及其应用。
技术介绍
1、龟鹿补肾片由陈皮(蒸)、淫羊藿(蒸)、续断(蒸)、锁阳(蒸)、狗脊(蒸)、酸枣仁(炒)、制何首乌、炙甘草、鹿角胶(炒)、熟地黄、龟甲胶(炒)、金樱子(蒸)、蜜黄芪、山药(炒)、菟丝子(炒)、覆盆子(蒸)共16味药材组成，具有壮筋骨，益气血，补肾的功效，用于身体虚弱、精神疲乏、腰腿酸软、头晕目眩、夜多小便、健忘失眠等症。
2、方中淫羊藿补肾助阳、强筋健骨，其有效成分朝藿定、淫羊藿苷具有促进造骨细胞增殖和发育、调节免疫等活性，能客观反映淫羊藿的质量；续断功能补肝肾、强筋骨、续折伤，所含成分川续断皂苷ⅵ具有神经保护、心肌保护、抗骨质疏松等作用，为评价续断质量的重要指标；陈皮具有理气健脾、燥湿化痰之效，橙皮苷常作为其质量标准研究的指标性成分。
3、龟鹿补肾片现行质量标准为国家食品药品监督管理局标准ybz05732008，该标准仅以淫羊藿苷为含量测定指标，检测成分单一，存在市面上不法分子以价格相对便宜的化学原料药进行非法替代、添加的风险。现有龟鹿补肾片的定量分析研究的相关报道，也仅对淫羊藿苷单一成分进行测定，难以全面表征处方的物质基础。部分文献报道其不同剂型产品如龟鹿补肾丸、龟鹿补肾液的含量测定方法，由于生产工艺、处方量及成分等差异，并不适用于龟鹿补肾片的质量控制。
4、因此，有必要基于龟鹿补肾片发挥壮筋骨，益气血，补肾功效的多个活性成分，建立一种更科学、全面的质量检测方法，为全面评价及控制龟鹿补肾片的内在质量提供参考
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于，提供一种龟鹿补肾片的质量检测方法，能够同时测定龟鹿补肾片中朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、川续断皂苷ⅵ、橙皮苷6种成分的含量，该方法能准确、快速测定龟鹿补肾片的药效成分的含量，是一种简便可行的龟鹿补肾片多指标成分含量测定方法。
2、本专利技术的第二个目的在于，通过将所述龟鹿补肾片的质量检测方法应用于龟鹿补肾片的质量评价及控制，以解决龟鹿补肾片生产各环节质量评价及控制的难题，确保产品疗效。
3、为实现上述目的，本专利技术公开了以下技术方案：
4、第一方面，本专利技术提供了一种龟鹿补肾片的质量检测方法，所述检测方法检测龟鹿补肾片中的6种成分：橙皮苷、朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷和/或川续断皂苷ⅵ；
5、所述检测方法包括如下步骤：
6、(1)待测样品处理
7、s1，取待测样品，研细，加入有机溶剂，超声提取或回流提取处理≥30min，过滤，取续滤液作为待测样品溶液；
8、s2，取步骤s1续滤液蒸干，残渣用有机溶剂溶解定容，过滤，取续滤液作为待测样品溶液；
9、(2)待测样品中成分测定
10、将步骤(1)获得的待测样品采用高效液相色谱仪进行测定，并依据标准曲线模型，计算得到待测样品中6种成分含量；
11、所述高效液相色谱仪的色谱条件为：
12、c18色谱柱：250mm×4.6mm，5μm；
13、填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
14、流动相a：乙腈；
15、流动相b：甲醇和0.1v/v％磷酸水溶液按体积比为1:30的混合溶剂；
16、洗脱梯度：0～18min，20％a；18～19min，20％～24％a；19～36min，24％a；36～56min，24％～36％a；56～57min，36％～80％a；57～67min，80％a；
17、检测波长：200～220nm；
18、流速：1.0ml/min；
19、柱温：25～30℃；
20、进样量：10μl。
21、进一步地，所述有机溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种。
22、进一步地，所述有机溶剂的浓度为≥50v/v％。
23、更进一步地，所述有机溶剂的浓度为≥70v/v％。
24、进一步地，所述超声提取的功率为100w，频率为40khz。
25、进一步地，所述超声提取处理时间为60min。
26、进一步地，所述柱温为25℃或30℃。
27、进一步地，所述检测波长为212nm。
28、本专利技术从龟鹿补肾片发挥壮筋骨，益气血，补肾药效的指标性成分着手，建立了一种能同时测定龟鹿补肾片中6种活性成分的含量的分析方法。
29、使用dad检测器在波长190nm～400nm间对单个对照品进行扫描，结果显示，当检测波长为200-220nm时，各目标成分峰均有紫外吸收，符合含量测定要求；当检测波长为212nm时，各成分峰的峰型、分离度良好，阴性无干扰，符合含量测定要求，因此优选地，检测波长为212nm。
30、本专利技术分别考察了3个不同品牌色谱柱(菲罗门、kromasil、麦吉睿铂)，测得龟鹿补肾片中各主成分峰均能达到良好分离，含量结果相当，表明检测方法适用于不同品牌c18色谱柱。
31、本专利技术发现当柱温设定为25℃、30℃时，龟鹿补肾片中各主成分出峰时间、分离度、峰型、峰面积等各项参数均能达到要求，因此优选柱温为25℃～30℃。
32、本专利技术分别对提取方式(超声提取、回流提取)、提取时间(30min、45min、60min、90min)、提取溶剂(甲醇、70％甲醇、50％甲醇、乙醇、70％乙醇、50％乙醇)等进行考察，发现回流提取与超声提取均能同时提取所有目标成分，且各目标成分含量无明显差异，但超声提取的操作更为便捷。
33、在提取溶剂考察中发现，当使用70％甲醇超声提取的目标成分的峰面积即含量最高，且拖尾因子良好，干扰峰少，便于检测。此外，当超声提取时间≥30min时，各成分峰面积轻微上升，但变化幅度不大，表明成分已基本提取完全。超声60min后，各成分含量达到最高并趋于稳定。因此确定优选的提取方法为70％甲醇超声60min。
34、第二方面，本专利技术提供了第一方面所述的龟鹿补肾片质量检测方法在龟鹿补肾片质量评价及质量控制中的应用。
35、如上所述的龟鹿补肾片质量检测方法主要应用但不限于评价龟鹿补肾片质量综合指标、评价不同厂家龟鹿补肾片质量差异、评价同一厂家不同批次龟鹿补肾片的质量一致性及龟鹿补肾片生产各环节的质量控制等。
36、本专利技术的有益效果：
37、1.本专利技术技术方案以龟鹿补肾片为研究对象，建立其6种活性成分的含量测定方法。所检测的6种成分是龟鹿补肾片壮筋骨，益气血，补肾的药效成分，建立其含量测定方法能更为全面地评价及控制龟鹿补肾片的整体质量，确保产品疗效。
38、2.本专利技术技术方案的样品溶液制备方法简单，重复性好。所述质量检测方法能快速地测定龟鹿补肾片中朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、川续断皂苷ⅵ、橙皮苷的含量，耐本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱法，对龟鹿补肾片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ和/或橙皮苷6种成分进行含量测定；
2.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂的浓度为≥50v/v％。
4.根据权利要求3所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂的浓度为≥70v/v％。
5.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述超声提取的功率为100W，频率为40kHz。
6.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述超声提取处理时间为60min。
7.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述柱温为25℃或30℃。
8.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述检测波长为212nm。
...【技术特征摘要】
1.一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱法，对龟鹿补肾片中朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、川续断皂苷ⅵ和/或橙皮苷6种成分进行含量测定；
2.根据权利要求1所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂的浓度为≥50v/v％。
4.根据权利要求3所述的一种龟鹿补肾片的质量检测方法，其特征在于，所述有机溶剂的浓度为≥70v/v％。
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【专利技术属性】
技术研发人员：林琼英，张秋裕，吴丽琼，蔡荣钦，李锡涛，胡杰雄，胡宏军，李洁旋，戴荣俭，江秀山，
申请(专利权)人：广东心宝药业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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