【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及用于向细胞递送分子载荷(molecular payload)(例如，寡核苷酸)的靶向复合物及其用途，特别是与疾病的治疗相关的用途。参考电子序列表电子序列表(d082470074wo00-seq-cbd.xml；大小：467,675字节；以及创建日期：2022年11月3日)的内容通过引入整体并入本文。
技术介绍
1、肌营养不良(muscular dystrophy，md)是一组以进行性无力和肌肉量减少为特征的疾病。这些疾病是由编码形成健康肌肉组织所需蛋白质的基因中的突变引起的。面肩肱型肌营养不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy，fshd)是一种显性遗传的md类型，其主要影响面部、肩肱和上臂的肌肉。fshd的其他症状包括腹肌无力、视网膜异常、听力下降以及关节痛和炎症。fshd是影响成人和儿童二者的9种md类型中最普遍的，其中全世界发病率为约每8,300人中1人。fshd是由双同源框4(double homeobox 4，dux4)的异常产生引起的，双同源框4是功能未知的蛋白质。编码dux4蛋白的dux4基因位于4号染色体上的d4z4重复区域中，并且通常仅在胎儿发育中表达，此后，其会被包围dux4基因并使之紧凑的d4z4重复的超甲基化所抑制。已经描述了两种类型的fshd，1型和2型。占病例的约95％的1型与4号染色体上d4z4重复的缺失相关。未受影响的个体通常具有在4号染色体的亚端粒区中排列的多于10个重复，而fshd的最常见形式(fshd1)是由阵列收缩至少于10个重复引起的，
技术实现思路
1、在一些方面中，本公开内容提供了被设计为靶向dux4 rna的寡核苷酸。在一些实施方案中，本公开内容提供了与dux4 rna互补的寡核苷酸，其可用于降低与面肩肱型肌营养不良(fshd)病理学特征相关的dux4 mrna和/或蛋白质的水平，所述病理学特征包括肌肉萎缩、炎症以及降低的分化潜能和氧化应激。在一些实施方案中，本文中提供的寡核苷酸靶向dux4 rna的3’utr。在一些实施方案中，本文中提供的寡核苷酸被设计为指导dux4 rna的降解。在一些实施方案中，寡核苷酸被设计为阻断用于产生dux4蛋白的dux4 rna的翻译。在一些实施方案中，寡核苷酸被设计为具有期望的生物利用度和/或血清稳定性特性。在一些实施方案中，寡核苷酸被设计为具有期望的结合亲和力特性。在一些实施方案中，寡核苷酸被设计为具有期望的毒性和/或免疫原性谱。
2、根据一些方面，本公开内容提供了靶向肌细胞(例如，原代成肌细胞)以用于将分子载荷(例如，本文中所述的dux4靶向寡核苷酸)递送至那些细胞目的的复合物。在一些实施方案中，本文中提供的复合物特别可用于递送抑制dux4的表达或活性的分子载荷，例如在患有或怀疑患有面肩肱型肌营养不良(fshd)的对象中。因此，在一些实施方案中，本文中提供的复合物包含与肌细胞表面上的受体特异性结合以用于将分子载荷递送至肌细胞的目的的肌肉靶向剂(例如，肌肉靶向抗体)。在一些实施方案中，复合物通过受体介导的内化被摄取到细胞中，然后分子载荷可被释放以在细胞内部执行功能。例如，经改造以递送寡核苷酸的复合物可释放该寡核苷酸，使得该寡核苷酸可抑制肌细胞中的dux4基因表达。在一些实施方案中，通过对连接复合物的寡核苷酸和肌肉靶向剂的共价接头进行内体切割而释放该寡核苷酸。
3、本公开内容的一些方面提供了复合物，所述复合物包含与被配置成用于降低dux4的表达或活性的寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(anti-transferrin receptor 1，tfr1)抗体，其中所述抗tfr1抗体包含表2至7中列出的抗tfr1抗体中任一者的重链互补决定区1(heavy chain complementarity determining region 1，cdr-h1)、重链互补决定区2(heavy chain complementarity determining region 2，cdr-h2)、重链互补决定区3(heavy chain complementarity determining region 3，cdr-h3)、轻链互补决定区1(light chain complementarity determining region 1，cdr-l1)、轻链互补决定区2(light chain complementarity determining region 2，cdr-l2)、轻链互补决定区3(light chain complementarity determining region 3，cdr-l3)，并且其中所述寡核苷酸包含反义链，所述反义链包含seq id no:160或seq id no:365中所示的dux4序列的互补区。
4、在一些实施方案中，所述抗tfr1抗体包含表3中列出的抗tfr1抗体中任一者的重链可变区(heavy chain variable region，vh)和轻链可变区(light chain variableregion，vl)。在一些实施方案中，所述抗tfr1抗体包含重链可变区(vh)和/或轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含与seq id no:76具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与seq id no:75具有至少95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗tfr1抗体包含含有seq id no:76的氨基酸序列的vh和含有seq id no:75的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，所述抗tfr1抗体是fab，任选地其中所述fab包含表5中列出的抗tfr1 fab中任一者的重链和轻链。在一些实施方案中，所述fab包含重链和/或轻链，所述重链包含与seq id no:101具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链包含与seq id no:90具有至少85％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述fab包含含有seq id no:101的氨基酸序列的重链和含有seq id no:90的氨基酸序列的轻链。
5、在一些实施方案中，所述寡核苷酸的长度为20至30个核苷酸。在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含seq id no:160或seq id no:365中所示的dux4序列之至少15个连续核苷酸的互补区。在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含seq id no:161至168或213至288中任一者所示的dux4序列之至少15个连续核苷酸的互补区。在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.复合物，其包含与被配置成用于降低DUX4的表达或活性的寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(TfR1)抗体，其中所述抗TfR1抗体包含表2至7中列出的抗TfR1抗体中任一者的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)、重链互补决定区3(CDR-H3)、轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)、轻链互补决定区3(CDR-L3)，并且其中所述寡核苷酸包含反义链，所述反义链包含SEQ ID NO:160或SEQ ID NO:365中所示的DUX4序列的互补区。
2.权利要求1所述的复合物，其中所述抗TfR1抗体包含表3中列出的抗TfR1抗体中任一者的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。
3.权利要求1或权利要求2中任一项所述的复合物，其中所述抗TfR1抗体包含含有与SEQ ID NO:76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(VH)和/或含有与SEQ IDNO:75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(VL)，
4.权利要求1或权利要求2所述的复合物，其中所述抗TfR1抗体是Fa
5.权利要求4所述的复合物，其中所述Fab包含含有与SEQ ID NO:101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链和/或含有与SEQ ID NO:90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链，
6.权利要求1至5中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸的长度为20至30个核苷酸。
7.权利要求1至6中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含SEQ ID NO:160或SEQID NO:365中所示的DUX4序列之至少15个连续核苷酸的互补区，任选地其中所述寡核苷酸包含SEQ ID NO:161至168或213至288中任一者所示的DUX4序列之至少15个连续核苷酸的互补区。
8.权利要求1至7中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含SEQ ID NO:169至176或289至364中任一者的至少15个连续核苷酸，其中每个胸腺嘧啶碱基(T)可独立且任选地被尿嘧啶碱基(U)替代，并且每个U可独立且任选地被T替代，任选地其中所述寡核苷酸包含SEQ ID NO:169至176或289至364中任一者的核苷酸序列。
9.权利要求1至8中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸不包含SEQ ID NO:151的核苷酸序列。
10.权利要求1至9中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸还包含与所述反义链杂交以形成双链siRNA的有义链。
11.权利要求1至10中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含至少一个经修饰核苷间键联。
12.权利要求1至11中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含一个或更多个经修饰核苷，任选地其中所述一个或更多个经修饰核苷是2’-经修饰核苷。
13.权利要求1至12中任一项所述的复合物，其中所述抗体与所述寡核苷酸通过接头共价连接，任选地其中所述接头是可切割接头，进一步任选地其中所述接头包含缬氨酸-瓜氨酸序列。
14.降低肌细胞中DUX4表达的方法，所述方法包括使所述肌细胞与有效量的权利要求1至13中任一项所述的复合物接触，用于促进所述寡核苷酸内化到所述肌细胞中。
15.权利要求14所述的方法，其中所述细胞是体外的。
16.权利要求14所述的方法，其中所述细胞在对象中，任选地其中所述对象是人。
17.治疗面肩肱型肌营养不良(FSHD)的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的权利要求1至13中任一项所述的复合物，其中所述对象具有DUX4蛋白的异常产生，任选地其中所述对象是人。
18.权利要求16至17中任一项所述的方法，其中所述人对象具有4号染色体中D4Z4重复的一个或更多个缺失。
19.权利要求18所述的方法，其中所述对象具有10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个D4Z4重复或没有D4Z4重复。
20.寡核苷酸，其包含SEQ ID NO:169至176或289至364中任一者的核苷酸序列。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.复合物，其包含与被配置成用于降低dux4的表达或活性的寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(tfr1)抗体，其中所述抗tfr1抗体包含表2至7中列出的抗tfr1抗体中任一者的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)、重链互补决定区3(cdr-h3)、轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)、轻链互补决定区3(cdr-l3)，并且其中所述寡核苷酸包含反义链，所述反义链包含seq id no:160或seq id no:365中所示的dux4序列的互补区。
2.权利要求1所述的复合物，其中所述抗tfr1抗体包含表3中列出的抗tfr1抗体中任一者的重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)。
3.权利要求1或权利要求2中任一项所述的复合物，其中所述抗tfr1抗体包含含有与seq id no:76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)和/或含有与seq idno:75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)，
4.权利要求1或权利要求2所述的复合物，其中所述抗tfr1抗体是fab，任选地其中所述fab包含表5中列出的抗tfr1 fab中任一者的重链和轻链。
5.权利要求4所述的复合物，其中所述fab包含含有与seq id no:101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链和/或含有与seq id no:90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链，
6.权利要求1至5中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸的长度为20至30个核苷酸。
7.权利要求1至6中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含seq id no:160或seqid no:365中所示的dux4序列之至少15个连续核苷酸的互补区，任选地其中所述寡核苷酸包含seq id no:161至168或213至288中任一者所示的dux4序列之至少15个连续核苷酸的互补区。
8.权利要求1至7中任一项所述的复合物，其中所述寡核苷酸包含seq id no:169至176或289至...
【专利技术属性】
技术研发人员：内尔松·赫西亚，罗梅什·R·苏布拉马尼亚，穆罕默德·T·卡塔纳尼，蒂莫西·威登，布伦丹·奎因，科迪·A·德雅尔丹，约翰·纳吉姆，肖恩·斯普林，
申请(专利权)人：达因疗法公司，
类型：发明
国别省市：
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