【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物制剂，具体涉及一种增强抗炎与自噬的ros响应性靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统、制备方法及应用。
技术介绍
1、子宫内膜异位症(ems)是一种在雌激素影响下子宫内膜组织异位生长引起的慢性炎症性妇科疾病，影响全球近10％的育龄妇女。有研究表明，ems的病因与炎症和内分泌的异常有关子。宫内膜组织的异位生长和周期性出血会导致炎症和纤维化，最终导致慢性盆腔疼痛和不孕。免疫状态的异常有助于ems病变的进展，例如炎症条件下，子宫内膜异位组织内存在高炎症，高雌激素，高ros环境，进一步促进病灶组织的生长与进展。然而，目前ems的治疗手段仍然很局限。手术治疗创伤较大且清除的病灶有限，激素疗法也难以彻底改变病灶的病理状态且容易导致内分泌紊乱。因此，深入探索ems的发病机制并针对性的找出合适的药物对ems的治疗极有必要。
2、目前的研究发现，雌激素水平和促炎细胞因子的升高可以促进异位子宫内膜基质细胞(eescs)的增殖，导致ems的发展。据《神农本草经》和《中国药典》中记载，益母草是一种促进血液循环、调节月经的妇科药物，长期以来一直被用于治疗妇产科相关疾病，如月经不调、痛经等。益母草的有效活性成分益母草碱具有抗炎、抗氧化等多种药理活性。但益母草碱的低溶解度、高治疗剂量、低生物利用度等缺陷限制了益母草碱的临床治疗价值。而纳米科技的进步可以克服这些障碍。脂质体作为药物递送常见的纳米载体，具有磷脂双分子层结构，能够成功的包载益母草碱。鉴于ems的异位病灶的高ros水平，可以通过制备ros响应性的脂质体实现药物的定点释放，增
技术实现思路
1、鉴于此，有必要设计一种靶向子宫内膜异位症病灶的细胞来源纳米囊泡涂层的ros响应性仿生纳米递药系统，还有必要设计一种ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统的制备方法；还有必要设计一种ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统在制备用于治疗子宫内膜异位症的药物的应用。本专利技术的目的在于构建一种靶向子宫内膜异位症病灶的细胞来源纳米囊泡涂层的ros响应性仿生纳米递药系统及其制备方法，增加中药活性成分益母草碱在子宫内膜异位症病灶的靶向性，增强其治疗效果。
2、一种靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，包括包封益母草碱的ros响应性脂质体纳米载体和中性粒细胞来源的纳米囊泡，ros响应性纳米脂质体通过薄膜水化法制备，益母草碱通过ph梯度法装载，ros响应性益母草碱脂质体和细胞来源纳米囊泡通过膜挤出器共挤出实现包覆外膜。
3、优选的，所述细胞来源纳米囊泡为hl-60细胞系通过dmso诱导分化得到，细胞来源纳米囊泡表面表达相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体；细胞来源纳米囊泡依次经过机械研磨、超高速离心提取获得；所述相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体包括lfa-1、tnf-αr、il-1r、cxcr2和ccr2。
4、优选的，所采用包封益母草碱为中药益母草有效成分益母草碱，脂质体纳米载体为ros响应性磷脂与胆固醇。
5、优选的，磷脂为聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg)、二油酰基卵磷脂(dopc)、硫醚磷脂酰胆碱(s-pc)及胆固醇中的一种或几种的混合；有机溶剂的种类为乙醇、氯仿中的一种或几种的混合。
6、优选的，ros响应性脂质体结构为磷脂双分子层中空结构，相应包封率在40.21％～84.78％之间，载药量在3.85％～14.53％之间。
7、优选的，ros响应性脂质体与细胞来源纳米囊泡通过共挤出10～20次使之相互融合。
8、优选的，ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统遇到高水平ros后加快所包载药物的释放。
9、优选的，所述ros响应性脂质体平均粒径为110～130nm，ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统粒径为120～150nm。
10、一种靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，包括以下步骤：
11、步骤一，提取细胞来源纳米囊泡；
12、步骤二，以聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg)、二油酰基卵磷脂(dopc)、硫醚磷脂酰胆碱(s-pc)及胆固醇为原材料用薄膜水化法制备脂质体，利用柠檬酸盐缓冲液通过ph梯度法包载益母草碱药物，制备成ros响应性脂质体益母草碱；
13、步骤三，将预先制备的ros响应性脂质体益母草碱和细胞来源纳米囊泡共孵育并以膜挤出器反复过膜挤压后，获得ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统。
14、优选的，步骤一中，提取细胞来源纳米囊泡，hl-60细胞以dmso诱导分化后表达lfa-1，tnf-αr，il-1r，cxcr2和ccr2，经机械研磨并超高速离心后提取的细胞来源纳米囊泡保存在-80℃。
15、优选的，步骤一中，hl-60细胞以imdm培养基+20％ fbs+1％ ps在细胞培养箱中传代扩增，在细胞培养液中添加dmso诱导细胞分化，离心去除上清后，洗涤；用膜提取缓冲液重悬细胞，冰上机械匀浆，离心，去除细胞核结构，上清再次离心，去除线粒体结构，上清离心后冻干后储存备用。
16、优选的，所述imdm培养基+20％ fbs+1％ ps在37℃，co2浓度占比为5％的细胞培养箱中传代扩增，在细胞培养液中添加浓度为1.25％的dmso诱导细胞分化4天，以1000rpm/min离心5min去除上清后，用pbs缓冲液洗涤3次，pbs缓冲液的温度为4℃，离心洗涤的转速为1000rpm/min，洗涤时间为5min。
17、优选的，膜提取缓冲液由225mm甘露醇、75mm蔗糖、0.5％ bsa、0.5mm edta、30mmtris-hcl和1％蛋白酶抑制剂配置而成，离心冻干后-80℃储存备用。
18、优选的，步骤二中，按照原料一：二油酰基卵磷脂、聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇摩尔比为1：(0.02-0.2)：(0.3-1)精确称量并溶于氯仿，或者，原料二：硫醚磷脂酰胆碱、聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇摩尔比为1：(0.1-0.3)：(0.2-0.5)精确称量并溶于氯仿，制备薄膜水化法制备空白脂质体。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统为一种细胞来源纳米囊泡涂层的ROS响应性仿生纳米递药系统，包括包封益母草碱的ROS响应性脂质体纳米载体和细胞来源纳米囊泡，ROS响应性脂质体纳米载体通过薄膜水化法制备，益母草碱通过pH梯度法装载，ROS响应性益母草碱脂质体和细胞来源纳米囊泡通过共挤出实现包覆外膜。
2.如权利要求1所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：所述细胞来源纳米囊泡为HL-60细胞系通过DMSO诱导分化得到，细胞来源纳米囊泡表面表达相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体；细胞来源纳米囊泡依次经过机械研磨、超高速离心提取获得；所述相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体包括LFA-1、TNF-αR、IL-1R、CXCR2和CCR2。
3.如权利要求2所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：所采用包封益母草碱为中药益母草有效成分益母草碱或其盐，ROS响应性脂质体纳米载体为ROS响应性磷脂与胆固醇；磷脂为聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG)、二油酰基卵磷脂
4.如权利要求1所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：ROS响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统的制备方法，包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：步骤一中，提取细胞来源纳米囊泡，HL-60细胞以DMSO诱导分化后表达LFA-1，TNF-αR，IL-1R，CXCR2和CCR2，经机械研磨并超高速离心后提取的细胞来源纳米囊泡保存在-80℃。
6.如权利要求4所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：步骤一中，HL-60细胞以IMDM培养基+20％FBS+1％PS在细胞培养箱中传代扩增，在细胞培养液中添加DMSO诱导细胞分化，离心去除上清后，洗涤；用膜提取缓冲液重悬细胞，冰上机械匀浆，离心，去除细胞核结构，上清再次离心，去除线粒体结构，上清离心后冻干后储存备用。
7.如权利要求4所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：所述IMDM培养基+20％FBS+1％PS在37℃，CO2浓度占比为5％的细胞培养箱中传代扩增，在细胞培养液中添加浓度为1.25％的DMSO诱导细胞分化4天，以1000rpm/min离心5min去除上清后，用PBS缓冲液洗涤3次，PBS缓冲液的温度为4℃，离心洗涤的转速为1000rpm/min，洗涤时间为5min。
8.如权利要求4所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：膜提取缓冲液由225mM甘露醇、75mM蔗糖、0.5％BSA、0.5mM EDTA、30mM Tris-HCl和1％蛋白酶抑制剂配置而成，离心冻干后-80℃储存备用。
9.如权利要求4所述的ROS响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统的制备方法，其特征在于：步骤二中，按照原料一：二油酰基卵磷脂、聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇摩尔比为1：(0.02-0.2)：(0.3-1)精确称量并溶于氯仿，或者，原料二：硫醚磷脂酰胆碱、聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇摩尔比为1：(0.1-0.3)：(0.2-0.5)精确称量并溶于氯仿，制备薄膜水化法制备空白脂质体。
10.一种如权利要求1所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统在制备用于治疗子宫内膜异位症的药物的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统为一种细胞来源纳米囊泡涂层的ros响应性仿生纳米递药系统，包括包封益母草碱的ros响应性脂质体纳米载体和细胞来源纳米囊泡，ros响应性脂质体纳米载体通过薄膜水化法制备，益母草碱通过ph梯度法装载，ros响应性益母草碱脂质体和细胞来源纳米囊泡通过共挤出实现包覆外膜。
2.如权利要求1所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：所述细胞来源纳米囊泡为hl-60细胞系通过dmso诱导分化得到，细胞来源纳米囊泡表面表达相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体；细胞来源纳米囊泡依次经过机械研磨、超高速离心提取获得；所述相关粘附分子、炎症因子受体和趋化因子受体包括lfa-1、tnf-αr、il-1r、cxcr2和ccr2。
3.如权利要求2所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统，其特征在于：所采用包封益母草碱为中药益母草有效成分益母草碱或其盐，ros响应性脂质体纳米载体为ros响应性磷脂与胆固醇；磷脂为聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg)、二油酰基卵磷脂(dopc)、硫醚磷脂酰胆碱(s-pc)及胆固醇中的一种或几种的混合；有机溶剂的种类为乙醇、氯仿中的一种或几种的混合；
4.如权利要求1所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：ros响应性细胞来源纳米囊泡包被的纳米递药系统的制备方法，包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的靶向治疗子宫内膜异位症纳米递药系统的制备方法，其特征在于：步骤一中，提取细胞来源纳米囊泡，hl-60细胞以dmso诱导分化后表达lfa-1，tnf-αr，il-1r，cxcr2和ccr2，经机械研磨并超高速离心后提取的细胞来源纳米囊泡保存在-80℃。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓琳，朱依谆，唐桩，杜美蓉，
申请(专利权)人：澳门科技大学，
类型：发明
国别省市：
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