【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质及其筛选方法和应用。
技术介绍
1、厚壳贻贝(mytilus coruscus)隶属软体动物门(mollusca)，双壳纲(bivalvia)，贻贝目(mytiloida)、贻贝科(mytilidae)、贻贝属(mytilus)。
2、在厚壳贻贝生活史中需要经历一个不可逆的附着变态过程，从受精卵开始到眼点幼虫为浮游幼虫阶段，在眼点幼虫阶段发生附着变态，而后成为稚贝和成贝营底栖生活。贻贝通过足组织中的腺体分泌足丝蛋白，经海水固化形成具有韧性的足丝，将自身附着于固体附着基上。
3、贻贝足丝附着与贻贝养殖产量紧密相关。贻贝通过分泌足丝附着在养殖绳上，直至渔民将成串的贻贝从浮筏上解下完成收获，若贻贝从养殖绳上掉落则直接影响养殖贻贝产量。在海洋生物工程领域，足丝是特有的生物材料，具有出色的粘附和弹性特性。近年来，足丝附着机制已成为生物材料领域的研究热点，虽然贻贝分泌足丝是一种个体的主动性过程，但贻贝足丝分泌受其体内哪种内源性因子调控仍是未知。
4、目前针对贻贝足丝分泌数量的研究仅局限于环境领域，例如温度、盐度等，但是基于使用特定的神经递质或其类似物来刺激贻贝足组织分泌足丝的研究尚未报道。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质及其筛选方法和应用，涉及使用特定的神经递质或其类似物来刺激贻贝，从而提高贻贝足丝分泌数量，实现通过注射神经递质显著促进厚壳贝分泌足丝
2、为达到上述目的，本专利技术采用的具体技术方案如下：
3、本专利技术的第一方面，是提供一种促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，所述外源注射神经递质为肾上腺素(epi)。
4、本专利技术的第二方面，是提供外源注射神经递质epi的筛选方法，包括以下步骤：
5、s1.贻贝的筛选：选择壳长为7-8cm的二龄厚壳贻贝作为实验对象；
6、s2.贻贝足丝分泌不同时期神经递质含量测定：将贻贝静止期、足探索期、足丝分泌期、足丝分泌后期的足组织作为样品，分别进行神经递质含量测定，结果表明，肾上腺素(epi)和五羟色胺(5-ht)在足探索期的相对含量显著高于静止期；
7、s3.神经递质注射后贻贝足丝分泌数量的变化测定：对贻贝注射神经递质肾上腺素和五羟色胺，并在注射后不同时间点对贻贝足丝分泌数量进行统计；结果表明，经注射10-3m肾上腺素72h后贻贝足丝分泌数量显著高于对照组，而五羟色胺注射无显著促进足丝分泌作用。
8、优选的，步骤s2中，将贻贝放入水中静止5-10分钟取足组织作为静止期样品；贻贝足伸出体外进行探索时取足组织作为足探索期样品；在贻贝分泌足丝时取足组织作为足丝分泌期样品；在贻贝分泌完足丝缩回体内5-10分钟后取足组织作为足丝分泌后期样品。
9、优选的，步骤s2中，收集的所有贻贝足组织需迅速置于液氮中，不同阶段的足组织样品数需大于等于6。
10、优选的，步骤s3中，所述神经递质的注射部位为贻贝的闭壳肌。在注射部位的选择上，专利技术人还试验过向足部注射神经递质，足丝分泌过多以及不分泌的情况都有出现，表达并不稳定；而且足部难以明显被观察到，注射难度大，针头的角度都会影响注射部位，易注射在足周围其他肌肉组织。厚壳贻贝是开管式循环系统，体液和血液循环一起的，而闭壳肌作为贻贝血液贮存部位，在此注射外源神经递质能够有效并快速传递神经递质，加上闭壳肌呈现明显，不会出现注射错位置的情况，促分泌稳定，最终选择闭壳肌作为注射部位。
11、优选的，步骤s3中，肾上腺素和五羟色胺粉末溶于贻贝生理盐水后进行注射，所述贻贝生理盐水的成分包括：20mm hepes，436mm nacl，53mm mgso4，10mm kcl，10mm cacl2，该配方贴合贻贝体液离子含量，以便更好控制变量。
12、优选的，步骤s3中，注射液中肾上腺素和五羟色胺的浓度为10-2m～10-5m，注射量为200μl。
13、优选的，步骤s3中，在注射后6h，12h，24h，48h和72h，分别对贻贝所分泌的足丝数量进行统计。
14、本专利技术的第三方面，是提供上述促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质的应用，应用方法是向贻贝的闭壳肌注射肾上腺素，来促进其足丝分泌。
15、本专利技术具有以下有益效果：
16、本专利技术收集厚壳贻贝足丝分泌不同时期(1.静止期；2.足探索期；3.足丝分泌期4.足丝分泌后期)的足组织并进行神经递质靶向分析后，发现了肾上腺素和五羟色胺在厚壳贻贝足探索期相对含量较静止期显著上升(p<0.05)。通过向厚壳贻贝闭壳肌中注射肾上腺素和五羟色胺进行验证。结果表明经注射10-3m epi 72h后贻贝足丝分泌数量显著高于对照组(p<0.05)，然而5-ht注射无显著促进足丝分泌作用(p>0.05)。
17、本专利技术首次发现注射外源神经递质肾上腺素可以显著促进厚壳贻贝分泌足丝，而这在贝类中并没有任何报道，弥补了研究空白。本专利技术方法涉及使用特定的神经递质或其类似物来刺激贻贝，从而提高贻贝足丝分泌数量，对研究贻贝足丝分泌机制及其生理调控作用奠定了重要基础。
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1.一种促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，所述外源注射神经递质为肾上腺素。
2.根据权利要求1所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，所述肾上腺素的筛选方法如下：
3.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤S2中，将贻贝放入水中静止5-10分钟取足组织作为静止期样品；贻贝足伸出体外进行探索时取足组织作为足探索期样品；在贻贝分泌足丝时取足组织作为足丝分泌期样品；在贻贝分泌完足丝缩回体内5-10分钟后取足组织作为足丝分泌后期样品。
4.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤S2中，收集的所有贻贝足组织需迅速置于液氮中，不同阶段的足组织样品数需大于等于6。
5.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤S3中，所述神经递质的注射部位为贻贝的闭壳肌。
6.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤S3中，肾上腺素和五羟色胺粉末溶于贻贝生理盐水后进行注射，所述贻贝生理盐水的成分
7.根据权利要求5所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤S3中，注射液中肾上腺素和五羟色胺的浓度为10-2M～10-5M，注射量为200μL。
8.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，
9.权利要求1所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质的应用，其特征在于，应用方法是向贻贝的闭壳肌注射肾上腺素，来促进其足丝分泌。
...【技术特征摘要】
1.一种促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，所述外源注射神经递质为肾上腺素。
2.根据权利要求1所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，所述肾上腺素的筛选方法如下：
3.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤s2中，将贻贝放入水中静止5-10分钟取足组织作为静止期样品；贻贝足伸出体外进行探索时取足组织作为足探索期样品；在贻贝分泌足丝时取足组织作为足丝分泌期样品；在贻贝分泌完足丝缩回体内5-10分钟后取足组织作为足丝分泌后期样品。
4.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经递质，其特征在于，步骤s2中，收集的所有贻贝足组织需迅速置于液氮中，不同阶段的足组织样品数需大于等于6。
5.根据权利要求2所述的促进贻贝分泌足丝的外源注射神经...
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