【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，特别涉及一种抗siglec-15单克隆抗体电荷异质性的检测方法。
技术介绍
1、唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding ig-like lectin，即为siglec)是唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素家族。它们可以通过识别含有唾液酸的糖链结构来促进细胞-细胞或细胞-病原体之间的相互作用。因此，它们在先天免疫和适应性免疫中具有重要的调节作用。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15(sialic acid-bindingig-like lectin 15，siglec-15)是siglecs家族的一员，编码一个非常短的胞外结构域。尽管siglec-15在破骨细胞分化和骨重建中的作用已有报道，但是其在免疫反应中的功能仍不清楚。蛋白序列分析显示siglec-15胞外结构域包括免疫球蛋白可变区(igv)和2型恒定区常区(igc2)，与b7基因家族有30％以上的同源性，说明siglec-15与b7基因家族关系密切。siglec-15可能具有类似于b7家族成员的免疫调节功能。siglec-15mrna在大多数正常人体组织和各种免疫细胞亚群中均罕见表达。siglec-15蛋白主要在巨噬细胞上表达。tcca数据库分析显示调节siglec-15mrna表达在多种肿瘤包括结肠癌，子宫内膜样癌，甲状腺癌，膀胱癌，肾癌，肺癌和肝癌。为此，靶向siglec-15的药物研发具有非常重要的临床意义。
2、抗体类产品在生产及存储过程中会产生聚集、降解及修饰，从而导致产品产生变体。等电点改变和空间电荷分
3、单克隆抗体中电荷异质性的检测是基于单克隆抗体所带电荷的差异进行的分离检测，通常情况下，与主峰(main peak)相比，等电点低于主峰的，被称为酸性异构体(acidic variants)，等电点高于主峰的，被称为碱性异构体(basic variants)。常用的检测方式有等电聚焦凝胶电泳(ief)、阳离子交换色谱(cex-hplc)、阴离子交换色谱(aex-hplc)、毛细管等电聚焦(cief)，以及全柱成像毛细管等电聚焦(icief)等。其中，ief由于分离度低，手工操作要求高，逐渐被仪器方法所取代；在仪器方法中，cief和icief均需要专门的设备，成本相对较高，并且不能对电荷异构体进行收集，在电荷异构体组分鉴定中不具有优势；而阴阳离子色谱法采用的是用途极为广泛、普及度极高的高效液相色谱仪，但是针对该方法并没有专门针对本专利技术提供的抗siglec-15单克隆抗体的电荷异质性检测，为了能够保证单克隆抗体产品质量的前提下，满足抗siglec-15单克隆抗体的批量生产，急需提供一种专门用于抗siglec-15单克隆抗体电荷异质性检测，且能够快速实现电荷异质体分离并能够准确计算电荷异质体含量的方法。
技术实现思路
1、为了指导纯化过程中对本专利技术提供的抗siglec-15单克隆抗体的收集，优化纯化条件，保证抗siglec-15单克隆抗体在生产工艺过程中的产品质量，本专利技术公开了一种针对抗siglec-15单克隆抗体电荷异质性的检测方法。
2、本专利技术具体技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种抗siglec-15单克隆抗体电荷异质性的检测方法，包括以下步骤：
4、s1、将检测样品用第一流动相稀释配制成混合溶液，所述检测样品为抗siglec-15单克隆抗体；
5、s2、通过设置高效液相色谱仪的检测条件，并对所述混合溶液进行分离并获得色谱图；
6、s3、基于所述色谱图，进行归一化分析后确定所述检测样品中电荷异质体的百分含量；
7、其中，所述抗siglec-15单克隆抗体包括：氨基酸序列如seq id no:1所示的重链互补决定区hcdr1、氨基酸序列如seq id no:2所示的重链互补决定区hcdr2、氨基酸序列如seq id no:3所示的重链互补决定区hcdr3、氨基酸序列如seq id no:4所示的轻链互补决定区lcdr1、氨基酸序列如seq id no:5所示的轻链互补决定区lcdr2、氨基酸序列如seq idno:6所示的轻链互补决定区lcdr3。
8、本专利技术的有益效果如下：本专利技术公开的抗siglec-15单克隆抗体能够与siglec-15特异性结合，阻断siglec-15与细胞表面受体的结合，抑制胞内信号通路的传导，并达到抑制肿瘤生长的作用，用于治疗癌症或免疫性疾病，癌症包括但不限于脑胶质瘤、黑色素瘤、结直肠癌、肾癌、肺癌、淋巴癌或白血病等，免疫性疾病包括但不限于银屑病、克罗恩病、类风湿性关节炎、原发性胆汁性肝硬化、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、溃疡性结肠炎和自身免疫性肝炎等，其次，本专利技术为了能够保证抗siglec-15单克隆抗体药物质量和产品疗效的一致性和均一性，本专利技术筛选出最适宜抗siglec-15单克隆抗体的实验条件，使检测样品中的抗siglec-15单克隆抗体、酸性异构体和碱性异构体等各组分实现有效分离，通过该方法能够实现批量检测，且能够快速检测并计算出不同组分的含量，检测精密度较高，批次间差异较小，该方法能够用于评估抗siglec-15单克隆抗体的异质性，并将不同生产批次的抗siglec-15单克隆抗体的异质性控制在合理的范围内，用于指导纯化过程中对抗siglec-15单克隆抗体的收集，优化纯化条件，并保证抗siglec-15单克隆抗体在生产工艺过程中的产品质量。
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1.一种抗Siglec-15单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗Siglec-15单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述鼠源抗体分子还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区为鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:15所示的鼠源Ck型的恒定区，所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:16所示，所述IgG2a型的恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNo:17所示，所述IgG2b型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:18所示，所述IgG3型的恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNo:19所示。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗Siglec-15单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：HA-Ⅰ：所
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述人源化抗体分子还包括人源化抗体恒定区，所述人源化抗体恒定区包括人源化抗体重链恒定区和人源化抗体轻链恒定区，所述人源化抗体重链恒定区为人的IgG1型、IgG2型或IgG4型的恒定区的一种，所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:20所示，所述IgG2型的恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNo:21所示，所述IgG4型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:22所示，所述人源化抗体轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:23所示的人Ck型的恒定区。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S2中，所述检测条件包括采用弱阳离子色谱柱，设置梯度洗脱条件，并通过第一流动相和第二流动相进行梯度洗脱，所述第一流动相为乙酸铵-乙酸缓冲液，所述第二流动相为乙酸铵和碳酸氢铵溶液的混合物。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述弱阳离子色谱柱为PropacWCX-10色谱柱。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一流动相和第二流动相的流速为0.5-1.0ml/min；所述弱阳离子色谱柱的柱温为30℃-50℃。
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一流动相的pH值为5.0-6.5，所述第一流动相为浓度为20-50mM的乙酸铵-乙酸缓冲液；所述第二流动相的pH值为6.0-8.0，所述第二流动相为浓度为10-50mM的乙酸铵和浓度为0.1-1.0M的碳酸氢铵溶液的混合物；
10.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件设置如下：
...【技术特征摘要】
1.一种抗siglec-15单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗siglec-15单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述重链可变区的氨基酸序列如seq idno:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述鼠源抗体分子还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区为鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:15所示的鼠源ck型的恒定区，所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:16所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq idno:17所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:18所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq idno:19所示。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗siglec-15单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：ha-ⅰ：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:24所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:25所示；
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述人源化抗体分子还包括人源化抗体恒定区，所述人源化抗体恒定区包括人源化抗体重链恒定区和人源化抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：白义，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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