【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，更具体地说是涉及一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质及其制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，由于病毒引起的疫情越来越多，抗病毒药物的研究也越发成为生物医药研发热点，但是针对抗病毒药物，尤其是中和抗体类药物，生物学活性的测定成为业界一大核心问题，虽然生物学活性测定的方法基本为病毒滴度检测，但由于缺少检测方法标准，故导致最终测定的活性无法实现互认，活性单位(iu)无法溯源至国际si单位。数字pcr的低检测限和高精准度使其可应用于超敏定量反应，这种技术的应用大大提高了病毒检测的准确性，同时又具有良好的抗干扰能力。因此，数字pcr往往被用于核酸标准品的定值。
2、针对病毒形式的标准物质，量值单位几乎都是溯源至“copy”，如中国计量院研制的gbw09300新型冠状病毒全序列假病毒rna标准物质、广州邦德盛生物科技有限公司研制的gbw(e)091257甲型h1n1流感病毒假病毒核酸标准物质等。但这些标准物质基本都是用于病毒核酸检测，尚无标准物质可用于抗病毒药物的生物活性评价。
3、因此，如何提供一种制备假病毒标准物质的方法，并将其用于抗病毒药物生物活性测定中是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质及其制备方法和应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，包括以
4、(1)采用化学合成法合成病毒目的基因序列，在上下游插入xbai和noti酶切位点；
5、(2)通过无缝克隆将载体质粒和病毒目的基因片段双酶切后酶连，得到酶连产物；
6、(3)将酶连产物转化至大肠杆菌中，扩增，并采用碱裂解法提取质粒后进行测序分析，确保载体质粒中含有目的基因序列；
7、(4)将含有目的基因的载体质粒与辅助质粒共转染至细胞后进行假病毒颗粒的包装，得到分泌在上清中已包装目的基因的假病毒颗粒；
8、(5)收集步骤(4)中含有假病毒颗粒的培养基，经过0.22μm滤膜过滤并收集于无菌超速离心管中，80000g超速离心4h弃上清后，用virus store buffer重悬沉淀，所得沉淀即为假病毒标准物质。
9、进一步地，步骤(1)中，所述病毒包括但并不仅限于狂犬病毒、人类免疫缺陷病毒。
10、进一步地，步骤(2)中，所述载体质粒为fv115，所述载体质粒的框架结构为cmv-mcs-3flag-ubi-zsgreen-ires-puromycin。
11、进一步地，步骤(4)中，所述转染细胞为hek293t细胞。
12、进一步地，步骤(4)中，所述辅助质粒为pspax2、pmd2g。
13、作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种采用上述方法制备得到的抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质。
14、作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种上述抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的定值方法，包括：以上述假病毒标准物质中核酸为模板，与靶标基因的引物和探针及扩增试剂混合，进行数字p cr，根据数字pcr结果计算病毒拷贝数。
15、作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种上述抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质在抗病毒药物生物活性检测中的应用。
16、作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种检测抗病毒生物活性的试剂盒，所述试剂盒包括上述假病毒标准物质。
17、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质及其制备方法和应用，有益效果：采用本专利技术的方法制备得到的假病毒标准物质可通过病毒滴度实验测定中和抗体的生物活性，同时具备特征核酸片段，可通过数字pcr进行绝对定量；最终将生物活性单位(iu)和病毒核酸单位(copy)实现量值的统一，可实现抗病毒药物生物活性的绝对定量检测。
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1.一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述病毒包括但并不仅限于狂犬病毒、人类免疫缺陷病毒。
3.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述载体质粒为FV115，所述载体质粒的框架结构为CMV-MCS-3Flag-Ubi-ZSGreen-IRES-Puromycin。
4.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述转染细胞为HEK293T细胞。
5.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述辅助质粒为psPAX2、pMD2G。
6.一种根据权利要求1-5任一所述的方法制备得到的抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质。
7.根据权利要求6所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准
8.根据权利要求6所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质在抗病毒药物生物活性检测中的应用。
9.一种检测抗病毒药物生物活性的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的假病毒标准物质。
...【技术特征摘要】
1.一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述病毒包括但并不仅限于狂犬病毒、人类免疫缺陷病毒。
3.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述载体质粒为fv115，所述载体质粒的框架结构为cmv-mcs-3flag-ubi-zsgreen-ires-puromycin。
4.根据权利要求1所述的一种抗病毒药物生物活性检测用假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述转染细胞为hek293t细胞。
5.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：林婧，张雨晨，范宇宸，徐昇，朱文，王尚君，雍雪青，王齐鑫，
申请(专利权)人：南京市计量监督检测院，
类型：发明
国别省市：
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