【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶工程，具体地说，本专利技术涉及一种双氧水耐受的非特异性过氧合酶突变体及其应用。
技术介绍
1、非特异性过氧合酶(unspecific peroxygenase，upo，ec 1.11.2.1)是具有高生物技术应用价值的真菌血红素氧化酶(heme-thiolate peroxidase，htp)亚家族的一员。
2、目前研究发现，upo主要存在于双核菌亚界(dikarya)和高等真菌界的子囊菌门(ascomycota)和担子菌门(basidiomycota)中，其催化中心结构与单加氧酶p450相似，且催化过程中不需要添加辅酶因子，仅需利用过氧化氢作为氧供体，且副产物为水，不仅可以实现芳香化合物的羟基化、含有c＝c键化合物的环氧化和硫醚类物质磺化等芳香化合物的氧化，还可以高效催化脂肪酸进行羟基化反应，作为一类潜在的工业用酶，其在食品原料加工、医药行业、环境治理等领域应用潜力巨大。
3、非特异性过氧合酶催化过程仅需利用过氧化氢作为氧供体，但是当酶遇到过量的过氧化氢时，大多数含血红素氧化还原酶活力受到抑制甚至失活，造成生产成本的增加，限制了应用范围，不利于产业化。在双氧水环境下维持较高的非特异性过氧合酶酶活性是实际生物催化过程中的难题。
4、因此，开发双氧水耐受的非特异性过氧合酶在理论和工业应用上具有重要的意义。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的目的在于提供一种非特异性过氧合酶突变体及其应用，该非特异性过氧合酶突变体对双氧水具有很高的
2、实现上述专利技术目的的技术方案包括如下。
3、本专利技术的第一方面，提供了一种非特异性过氧合酶突变体，所述突变体的氨基酸序列如seq id no:3所示或如seq id no:5所示。
4、本专利技术的第二方面，提供了上述非特异性过氧合酶突变体的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4所示或如seq id no:6所示。
5、本专利技术的第三方面，提供了一种插入有非特异性过氧合酶突变体的编码基因的重组表达载体，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4所示或如seq id no:6所示。
6、本专利技术的第四方面，提供了一种表达上述重组表达载体的工程菌。
7、本专利技术的第五方面，提供了上述工程菌的构建方法，包括以下步骤：将上述重组表达载体转化到大肠杆菌表达宿主escherichia coli bl21(de3)中，即得。
8、本专利技术的第六方面，提供了上述非特异性过氧合酶突变体、编码基因、重组表达载体、或工程菌在生物催化反应中的应用。
9、本专利技术具有以下有益效果：
10、在本专利技术中，通过对非特异性过氧合酶mroupo进行定点突变后发现，突变体f160c和i84c的最适过氧化氢浓度不变，在40mm过氧化氢的环境孵育90min，突变体f160c和i84c仍然保存33.8％和17.2％的残余酶活力，半衰期分别为野生型的6倍和5倍。因此，本专利技术的非特异性过氧合酶突变体可在生物催化过程中应用，具有良好的稳定性能，可在应用过程中寿命延长和提高催化效率，更适用于工业领域上的应用，初步解决了upo在工业生产中的瓶颈问题，为其在产业化、商品化提供了工具指导。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种非特异性过氧合酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示或如SEQ ID NO:5所示。
2.权利要求1所述的非特异性过氧合酶突变体在生物催化反应中的应用。
3.一种非特异性过氧合酶突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示或如SEQ ID NO:6所示。
4.权利要求3所述的非特异性过氧合酶突变体的编码基因在生物催化反应中的应用。
5.一种插入有非特异性过氧合酶突变体的编码基因的重组表达载体，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示或如SEQ ID NO:6所示。
6.权利要求5所述的重组表达载体在生物催化反应中的应用。
7.一种表达权利要求5所述的重组表达载体的工程菌。
8.一种构建权利要求7所述工程菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求3所述的非特异性过氧合酶突变体的编码基因克隆到表达载体上，转化大肠杆菌感受态细胞，即得。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述表达
10.权利要求7所述的工程菌在生物催化反应中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种非特异性过氧合酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq idno:3所示或如seq id no:5所示。
2.权利要求1所述的非特异性过氧合酶突变体在生物催化反应中的应用。
3.一种非特异性过氧合酶突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4所示或如seq id no:6所示。
4.权利要求3所述的非特异性过氧合酶突变体的编码基因在生物催化反应中的应用。
5.一种插入有非特异性过氧合酶突变体的编码基因的重组表达载体，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id ...
【专利技术属性】
技术研发人员：靳若尘，王永华，马云建，李晓凤，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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