【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用和烟草品种鉴定的检测试剂盒，属于分子标记和烟草品种鉴定。
技术介绍
1、烟草作为我国重要的经济作物之一，是卷烟生产的主要原料。我国将普通烟草划分为烤烟、香料烟、晾烟、晒烟和白肋烟五大类型，其中烤烟是我国，也是世界上种植面积最大的普通烟草类型。香料烟、晾烟、晒烟和白肋烟虽然种植面积相对较少，但由于其独特的性状，常被用作优良性状基因源和混合卷烟成分，为烤烟育种和烟草工业提供了不可或缺的有力补充。烟草品种对于优质烟叶的生产至关重要，同时也是影响烟叶品质的主要因素之一。然而，我国面临着烟草主栽品种遗传背景狭窄、形态学上相似难以区分的问题，而在基因水平上对烟草品种的区分鉴定是解决这一问题的有效手段之一。
2、分子标记技术包括限制性片段长度多态性标记、随机扩增多态性标记、序列特异性扩增区域标记、内含子长度多态性标记、单核苷酸多态性、简单序列重复标记等，而在烟草鉴定领域，主要采用的是ssr标记技术和snp标记技术。但是目前，研究主要集中在烤烟品种鉴定上，对于不同种质资源材料的品种鉴定研究较为有限。传统的田间种植表型鉴定方法存在着规模大、鉴别项目多、周期长、易受环境影响和主观性较强等问题，导致鉴定错误率较高。因此，挖掘烟草不同品种的特征标记及将其应用于烟草品种鉴定方面显得尤为迫切。
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的是提供一种snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，以解决现有技术中烟草不同品种的特征标记较少的问题。>
2、本专利技术的第二个目的是提供一种烟草品种鉴定的检测试剂盒，以解决现有技术中采用田间种植表型鉴定方法，导致鉴定错误率较高的问题。
3、为了实现上述目的，本专利技术中一种snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用所采用的技术方案是：
4、一种snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，所述snp分子标记组合由3个snp分子标记组成；所述snp分子标记1的核苷酸序列如seq id no.1所示，5’端起第409位碱基为a或c；所述snp分子标记2的核苷酸序列如seq id no.2所示，5’端起第371位碱基为g或a；所述snp分子标记3的核苷酸序列如seq id no.3所示，5’端起第225位碱基为a或g。
5、上述技术方案的有益效果在于：本专利技术的snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用为开拓性专利技术。本专利技术通过对samsun、basma、红花大金元、vam、beinhart1000-1、florida301、小花青和塘蓬8个烟草种质资源材料的snp进行分型，初筛获得7526个snp位点，再进一步地分层筛选，最终获得鉴定上述烟草品种的3个snp分子标记的组合。通过后续的实验证明，使用本专利技术的分子标记组合即可有效地区分鉴定上述8个烟草品种，具有快速、简便、准确性高、重复性好的优点，有望为相关烟草品种的种质资源保护与利用、卷烟原料鉴定以及遗传进化研究等需求提供技术手段。
6、作为进一步地改进，所述烟草品种包括samsun、basma、红花大金元、vam、beinhart1000-1、florida301、小花青和塘蓬。
7、上述技术方案的有益效果在于：samsun、basma、红花大金元、vam、beinhart1000-1、florida301、小花青和塘蓬是常见的烟草品种，涵盖了烟草主要类型。其中samsun和basma属于香料烟，红花大金元和vam分别是重要的烤烟与白肋烟，beinhart1000-1和florida301属于雪茄烟品种，而小花青和塘蓬是重要的晒烟品种资源。通过对这五类烟草资源的代表品种进行基因型差异分析，筛选出鉴定这8个烟草品种的snp位点组合，为卷烟工业原料鉴定与烟草育种提供一定遗传基础。
8、作为进一步地改进，对待测样品s1～s3的基因型进行检测，根据表1中snp分子标记1～3的基因型与所述烟草品种的关系，对待测样品的品种进行鉴定区分。
9、表1
10、 snp分子标记1基因型 snp分子标记2基因型 snp分子标记3基因型 samsun c a a basma a g g 红花大金元 a g a vam c g a beinhart1000-1 c g g florida301 c a g 小花青 a a g 塘蓬 a a a
11、作为进一步地改进，采用下述方法对分子标记的基因型进行检测：以提取的待测样品dna为模板，利用核苷酸序列如seq id no.4～9的引物进行pcr扩增反应，对扩增产物测序后，判断基因型。
12、为了实现上述目的，本专利技术中一种烟草品种鉴定的检测试剂盒所采用的技术方案是：
13、一种烟草品种鉴定的检测试剂盒，所述试剂盒包括检测snp分子标记组合基因型的pcr引物组；所述snp分子标记组合由3个snp分子标记组成；所述snp分子标记1的核苷酸序列如seq id no.1所示，5’端起第409位碱基为a或c；所述snp分子标记2的核苷酸序列如seq id no.2所示，5’端起第371位碱基为g或a；所述snp分子标记3的核苷酸序列如seq idno.3所示，5’端起第225位碱基为a或g。
14、上述技术方案的有益效果在于：本专利技术的烟本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种SNP分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：所述SNP分子标记组合由3个SNP分子标记组成；所述SNP分子标记1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，5’端起第409位碱基为A或C；所述SNP分子标记2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，5’端起第371位碱基为G或A；所述SNP分子标记3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，5’端起第225位碱基为A或G。
2.根据权利要求1所述的SNP分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：所述烟草品种包括Samsun、Basma、红花大金元、VAM、Beinhart1000-1、Florida301、小花青和塘蓬。
3.根据权利要求1或2所述的SNP分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：对待测样品S1～S3的基因型进行检测，根据表1中SNP分子标记1～3的基因型与所述烟草品种的关系，对待测样品的品种进行鉴定区分。
4.根据权利要求3所述的SNP分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：采用下述方法对分子标记的基因型进行检测：以提取的待测样品DNA为模
5.一种烟草品种鉴定的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测SNP分子标记组合基因型的PCR引物组；所述SNP分子标记组合由3个SNP分子标记组成；所述SNP分子标记1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，5’端起第409位碱基为A或C；所述SNP分子标记2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，5’端起第371位碱基为G或A；所述SNP分子标记3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，5’端起第225位碱基为A或G。
6.根据权利要求5所述的烟草品种鉴定的检测试剂盒，其特征在于：所述PCR引物组包括对应检测所述SNP分子标记1～3的第一引物对至第三引物对；所述第一引物对至所述第三引物对的核苷酸序列如序列SEQ ID NO.4～9所示。
...【技术特征摘要】
1.一种snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：所述snp分子标记组合由3个snp分子标记组成；所述snp分子标记1的核苷酸序列如seq id no.1所示，5’端起第409位碱基为a或c；所述snp分子标记2的核苷酸序列如seq id no.2所示，5’端起第371位碱基为g或a；所述snp分子标记3的核苷酸序列如seq id no.3所示，5’端起第225位碱基为a或g。
2.根据权利要求1所述的snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：所述烟草品种包括samsun、basma、红花大金元、vam、beinhart1000-1、florida301、小花青和塘蓬。
3.根据权利要求1或2所述的snp分子标记组合在烟草品种鉴定中的应用，其特征在于：对待测样品s1～s3的基因型进行检测，根据表1中snp分子标记1～3的基因型与所述烟草品种的关系，对待测样品的品种进行鉴定区分。
4.根据权利要求3所述的snp分子标记组...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐馨，杨军，罗朝鹏，王中，武明珠，谢小东，李锋，王晨，李冰雨，潘婷，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：
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