【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测领域，具体涉及一种免疫原体外检测方法。
技术介绍
1、过敏原测试是指对过敏性疾病患者进行过敏原检测，找到引发过敏的真正原因，从而进行有针对性的预防和治疗。很多过敏性疾病的发生都与接触过敏原有关。在临床上很多皮肤病的发生与发展都与接触了过敏原有关。而临床上多数过敏性疾病的患者通常只是做缓解症状的治疗，而没有找到引发过敏的真正原因，因而也就做不到针对性的预防和治疗，导致病情反复加重、迁延不愈。因而建议经常过敏的患者，一定要做一下过敏原筛查检测。
2、unicap检测瑞典法玛西亚公司研制的unicap全自动体外诊断系统是目前国际上最先进的检查过敏原实验室系统，已获得国际临床实验室标准委员会的确认。以其安全性高、检测结果准确可靠，得到了世界卫生组织的确认，被国际上誉为“过敏原检测的金标准”。其主要测试原理为过敏原共价结合于cap的纤维素固相载体上，与患者血清样品中的特异性ige抗体反应。基于世界卫生组织(who)的ige参考品绘制标准曲线，由荧光强度可推算出样品中的ige浓度。检测种类可检测包括吸入、食物等600多种过敏原。通过简单的血样采集，就可快速而准确的得到检测结果，同时还可检测出过敏的程度。由于该检测精确并可以定量测出过敏程度，大大减少人为错误，保障检测结果的可信性，但是鉴于成本问题仍然得不到普及。
3、综上所述，目前过敏原的检测鉴于成本问题，依然没有办法得到普及。因此本申请提供一种免疫原体外检测方法。
技术实现思路
1、有过敏反应的患者体
2、将抗原小分子交联在核酸的片段上，然后在抗体结合小分子抗原后会产生空间位阻的效应，从而可以抑制核酸酶对核酸的作用。这种原理可以用于对抗原抗体的特异性研究。本申请是根据核酸外切酶活性特点，它可以将dna底物降解，核酸外切酶的活性可以通过底物的消失或产物的生成而测得。如果dna上含有小分子物质，并不影响核酸外切酶的活性。但是反应体系中一旦有小分子抗原的特异性抗体或其特异性的结合物时，核酸外切酶的活性将被抑制。dna底物将不会被降解。保留下来的dna底物和产物都可以被测量。残留dna底物的量和dna外切酶的水解成反比，和反应系统中的抗体或小分子的结合物质成正比。相反，dna外切酶的水解产物与系统中的抗体量成反比。所以，根据系统中残余双链dna或产物的量可以计算得到反应体系中的抗体或抗原结合物存在的量。
3、本申请的技术方案：
4、一种免疫原体外检测方法，包括如下步骤：
5、s1.合成dna底物体系：合成dna底物，并在dna底物中加入抗原与dna底物末端交联得到交联dna底物；
6、s2.建立外切酶体系：向s1的交联dna底物中加入荧光标记物和核酸外切酶得到荧光标记交联dna底物，通过荧光强度定量判断核酸外切酶对交联dna底物的水解情况；
7、s3.抗原检测：向s2的荧光标记交联dna底物中加入含有特异性抗体的患者血清或血浆样品，通过荧光强度读取特异性抗体的浓度，进而判断抗原种类。
8、优选的，s1所述dna底物是双链dna、单链dna或dnmp中的任意一种，s1所述合成dna底物需要的碱基对数目为几个至几千。
9、优选的，s1所述dna底物是双链dna；s1所述合成dna底物需要的碱基对数目为100～1000。
10、优选的，s1所述抗原为天然小分子有机物或者人工合成小分子有机物。
11、优选的，所述小分子有机物为硫酸镍、羊毛脂醇、硫酸新霉素、重铬酸钾、卡因、香料、松香、环氧树脂、喹啉、秘鲁香脂、二盐酸乙二胺、对叔丁酚、芳香、卡巴、炭黑橡胶、异噻唑啉酮、巯基苯并噻唑、对苯二胺、硫柳汞或秋兰母中的任意一种。
12、优选的，s1所述抗原与dna底物末端交联方式为通过共价键交联、直接在核苷酸的分子上交联或通过6～12个碳链接交联中的任意一种或多种。
13、优选的，s2所述荧光物质为能够标记dna底物双链dna、单链dna或dnmp中的一种。
14、优选的，s2所述核酸外切酶为能够水解dna底物双链dna、单链dna或dnmp中的一种。
15、优选的，s2所述荧光强度是以480nm波长作为激发波长，520nm波长为检测波长读取的数据。
16、优选的，s3所述荧光强度是以480nm波长作为激发波长，520nm波长为检测波长读取的数据。
17、本申请的有益效果：
18、(1)本申请基于核酸外切酶活性特点，将标记物与dna底物末端交联，加入核酸外切酶和特异性抗体，通过荧光强度，测定引起过敏的抗原类型和相应的抗体含量。该方法不仅可以大大提高检测的效率，降低检测成本，且方便易操作，同时本申请选用的检测方法属于体外检测，这种检测方法可以避免皮试。
19、(2)本申请所选用的底物可以是双链dna、单链dna或dnmp，底物种类的的增加，同时扩大了核酸外切酶的可选种类，减少了客观条件的限制。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种免疫原体外检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S1所述DNA底物是双链DNA、单链DNA或dNMP中的任意一种，S1所述合成DNA底物需要的碱基对数目为几个至几千。
3.根据权利要求2所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S1所述DNA底物是双链DNA；S1所述合成DNA底物需要的碱基对数目为100～1000。
4.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S1所述抗原为天然小分子有机物或者人工合成小分子有机物。
5.根据权利要求4所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，所述小分子有机物为硫酸镍、羊毛脂醇、硫酸新霉素、重铬酸钾、卡因、香料、松香、环氧树脂、喹啉、秘鲁香脂、二盐酸乙二胺、对叔丁酚、芳香、卡巴、炭黑橡胶、异噻唑啉酮、巯基苯并噻唑、对苯二胺、硫柳汞或秋兰母中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S1所述抗原与DNA底物末端交联方式为通过共价键交联、直接在核苷酸的分子上交联或通过6～12个
7.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S2所述荧光物质为能够标记DNA底物双链DNA、单链DNA或dNMP中的一种。
8.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，其特征在于，S2所述核酸外切酶为能够水解DNA底物双链DNA、单链DNA或dNMP中的一种。
9.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S2所述荧光强度是以480nm波长作为激发波长，520nm波长为检测波长读取的数据。
10.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，S3所述荧光强度是以480nm波长作为激发波长，520nm波长为检测波长读取的数据。
...【技术特征摘要】
1.一种免疫原体外检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，s1所述dna底物是双链dna、单链dna或dnmp中的任意一种，s1所述合成dna底物需要的碱基对数目为几个至几千。
3.根据权利要求2所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，s1所述dna底物是双链dna；s1所述合成dna底物需要的碱基对数目为100～1000。
4.根据权利要求1所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，s1所述抗原为天然小分子有机物或者人工合成小分子有机物。
5.根据权利要求4所述的一种免疫原体外检测方法，其特征在于，所述小分子有机物为硫酸镍、羊毛脂醇、硫酸新霉素、重铬酸钾、卡因、香料、松香、环氧树脂、喹啉、秘鲁香脂、二盐酸乙二胺、对叔丁酚、芳香、卡巴、炭黑橡胶、异噻唑啉酮、巯基苯并噻唑、对苯二胺、硫柳汞或秋兰母中的任意一种。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘珊琳，夏东元，王乔，
申请(专利权)人：石家庄禾柏生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。