一种谷维素的高效液相色谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种谷维素的高效液相分析方法，属于分析化学领域。应用本发明专利技术的液相方法，可以迅速、准确的分析出谷维素、谷维素提取分离纯化产物、谷维素药品中有效成分环木菠萝烯醇阿魏酸酯和２４－亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯的含量，同时得到其他多种杂质成分的含量。同时本发明专利技术公开的液相方法也可以应用于谷维素药品稳定性、破坏等谷维素药品质量研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了，属于分析化学领域。
技术介绍
谷维素是以环木菠萝醇类为主体的阿魏酸酯和甾醇类的阿魏酸酯所组成的一种天然混 合物，外观为白色至淡黄色晶体粉末、无味。谷维素主要存在于毛糠油及其油脚中，在米糠 油谷维素中，环木菠萝醇类阿魏酸酯含量约为70 80%。经过长期研究，研究人员发现谷维 素具有多种生理功能。主要包括降低血脂、抵抗胆固醇的吸收、降低血清胆固醇、防止脂质氧化和预防心血管疾病。除此之外，谷维素还可以缓和女性进入更年期之后的各种身体障 碍状态和自律神经失调症，改善间脑视床底部功能失调。现有的提纯谷维素的方法主要包括吸附法、弱酸取代法、非极性溶剂萃取法、溶剂分提法等。在谷维素提纯成分中，环木菠萝烯醇阿魏酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯是其 功效的主要成分，其余的成分还包括2， 4-甲基环木菠萝醇阿魏酸酯、2， 4-甲基环木菠萝烯 醇阿魏酸酯、2， 4-乙基环木菠萝醇阿魏酸酯、2， 5-羟基环木菠萝醇阿魏酸酯、e-谷甾醇 阿魏酸酯、豆留醇阿魏酸酯等。以结构而言，这些成分符合如下通式。<formula>formula see original document page 4</formula>上述化学式为阿魏酸酯类物质分子通式，R1，R2为各种修饰基团。<formula>formula see original document page 4</formula>上述结构为植物甾醇类物质结构通式。在谷维素应用中，环木菠萝烯醇阿魏酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯两种成分的 含量和其余杂质成分的控制对谷维素应用效果具有巨大影响，因此检测这两种物质的纯度成为影响谷维素应用的一个重要因素。现有的技术在检测分析谷维素组分含量方面存在一定的 缺陷，往往只能检测四五种成分，并且分离度不高，影响了谷维素的品质。比如在综述性文 献毛米糠油精炼对谷维素含量的影响(四川粮油科技2002.76:13-16) —文中给出了现 有的高效液相分析方法所得到的谷维素液相分析图谱，其只能分辨出约为五种物质，后三种 分离度明显较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，利用本专利技术公开的方法，不 仅可以准确的测定谷维素中主要有效成分环木菠萝烯醇阿魏酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿 魏酸酯的含量还可以同时得到谷维素中其它多种成分的含量，可以同时检测到十余种成分的 含量，相较于现有的液相分析方法，在分析的范围和检出效果上有明显改进。本专利技术的技术方案如下，液相条件为 色谱柱C18柱(250mmX4.6mm， 5nm )洗脱方式梯度洗脱 柱温30。C 50。C，优选35。C 45。C检测波长325nm 进样量10 ul本专利技术进行梯度洗脱所用流动相分别记为流动相A，流动相B.所用流动相A可以是甲醇、 四氢呋喃混合溶液，甲醇、异丙醇的混合溶液，甲醇四氢呋喃，甲醇异丙醇体积比可以 是10: 10 10: 30;所用流动相B为乙腈的水溶液，乙腈水体积比可以是40: 15 60: 15。在依据上述比例配制好流动相以后后，依据下列时间进行梯度洗脱，表格中所示百分比 例代表在不同的时间段内，可供选择的洗脱相配比。表l洗脱相的选择时间(分钟)流动相A (%)流动相B (%)0 1040 5050 603025 3565 7570 10040 5050 60优选为表2洗脱相的优化<table>table see original document page 6</column></row><table>将待检测样品配成溶液，进样，进行分析检测。 — 应用本专利技术的高效液相色谱方法，不仅可以准确得知样品中有效成分环木菠萝烯醇阿魏 酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯的含量，还可以同时检出其余八种杂质成分的含量， 从而为谷维素或者其提纯分离的单一组分或多组分复合物的品质控制提供良好的基础。根据本
技术实现思路
，本领域技术人员可以将本专利技术方法应用于多种涉及谷维素质量研究和 控制的领域，这主要包括谷维素提取分离纯化后所得产物的质量研究及杂质分析、药品研究 生产中的谷维素药品的质量研究及杂质分析等(现有的谷维素药品往往是以市售谷维素为原 料经过一定的制剂工艺而得的谷维素制剂，如谷维素片、谷维素注射液等)，这依旧是本发 明方法的使用范围，是落在本专利技术范围之内的。本专利技术申请人在前期研究中，通过对谷维素提取分离纯化获得了一种环木菠萝烯醇阿魏 酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯的含量不低于90%的产物，并对此产物申请了专利(中 国专利申请200810097493. x)。本专利技术的液相方法可以应用于该产物。进一步的，本专利技术方法适用于谷维素分离纯化所得到的单一成分或若干单一成分的复合 物。—同样的，在谷维素药品研究过程中，涉及到的谷维素检测均可以应用本专利技术方法，比如 稳定性研究中研究有关物质、破坏性实验研究等。因此本专利技术高效液相色谱方法还可以应用 于谷维素药品稳定性、破坏等谷维素药品质量研究。 附图说明附图l、 2、 3为紫外扫描谷维素样品、对照品的吸收波长曲线，图l为谷维素样品的紫外扫描图谱；图2为环木菠萝烯醇阿魏酸酯对照品紫外扫描图谱；图3是24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯对照品紫外扫描图谱。附图4为环木菠萝烯醇阿魏酸酯的标准曲线。附图5为24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯的标准曲线。附图6为提取纯化产物样品的HPLC曲线。附图7为市售谷维素原料的HPLC曲线。附图8为市售谷维素药品的HPLC曲线，谷维素提纯后的样品酸破坏三天后的HPLC分析。 具体实施例方式在以下实施例中，提取纯化产物指环木菠萝烯醇阿魏酸酯和24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯的含量不低于90%的产物。 试验仪器和色谱条件LC-20ATVP， SPD-20AVP (日本岛津公司)高效液相色谱仪、TU-1810紫外可见分光 光度计(北京普希通用仪器有限责任公司)色谱柱选用Kromasil C18柱，规格为250mmX4. 6mm， 5um 。流动相A采用甲醇四 氢呋喃10: 20，流动相B采用乙腈水45: 15，流动相A， B的比例依据
技术实现思路
的表2进 行设置。流速设为1. Oml/min，柱温采用35°C，检测波长325nm。 实验药品谷维素原料提取纯化产物样品环木菠萝烯醇阿魏酸酯对照品(自制，纯度>99.0%) 24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯对照品(自制，纯度>99.0%) 甲醇、四氢呋喃、乙腈为HPLC级 水为二次蒸馏水实施例1色谱条件的选择 1.1检测吸收波长用紫外分光光度仪在400nm-200nm波长内对谷维素原料样品、环木菠萝烯醇阿魏酸酯对 照品、24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯对照品进行连续扫描，观察附图1、 2、 3可以发现其 最大吸收波长为325rnn，因此本专利技术选择检"波长为325mn。 1.2样品浓度为了兼顾主成分与杂质含量的测定，必须选择一个合适的样品浓度。浓度太小不利于杂 质出峰，太大会影响主峰超出蜂线范围。经过综合衡量，并参考已有的实验数据，样品溶液 选择为2mg/ml.最终的分析结果(表5)证实该浓度是合适的。 1. 3洗脱方式专利技术人进行的实验研究证实，采用梯度洗脱能够有效本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种谷维素的高效液相色谱分离方法，其特征在于步骤如下：　（１）高效液相色谱条件为：　色谱柱：Ｃ↓［１８］柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）　流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ～１．５ｍｌ／ｍｉｎ　柱温：３０℃～５０℃　 检测波长：３２５ｎｍ　进样量：１０μｌ　洗脱方式：梯度洗脱　流动相包括流动相Ａ，Ｂ．其中流动相Ａ可以是甲醇、四氢呋喃混合溶液，甲醇、异丙醇的混合溶液；Ｂ可以是乙腈的水溶液　（２）配制样品溶液　（３）测定峰面积， 计算各组分含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何乐，张金海，郝守祝，
申请(专利权)人：北京世纪博康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]