【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及通过微流体技术制备经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液的方法。本专利技术还涉及通过所述方法获得的包含多个经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液，其用于诊断和/或治疗性处理。
技术介绍
1、相变造影剂(pcca)或声学激活纳米液滴在超声波诊断和治疗递送中越来越受欢迎。除了通常由液态全氟碳化合物组成的核心之外，纳米液滴显示出与商业上可得的充气微泡相似的组成。由于声学液滴汽化(acoustic droplet vaporization，adv)过程，当暴露于超过汽化阈值的超声波能量时，所包封的液滴转变成气泡。事实上，超声波充当远程触发器，以可控、非侵入性和局部的方式促进液滴的汽化。由于与传统微泡相比，纳米液滴的尺寸更小，因此它们表现出延长的体内循环和通过血管外空间深入组织的渗透。此外，在汽化阈值以下，它们是超声稳定的，具有低声学衰减，并且可以在感兴趣的位置被声学汽化。
2、全氟碳化合物纳米液滴(“pfc-nd”)在许多诊断和治疗应用中作为血管外超声造影剂呈现出真正的潜力，包括超声透化、热消融、血脑屏障(bbb)破坏、多模态成像模式，并且允许被动(由于在肿瘤组织中增强的渗透性和滞留(epr)效应)或主动靶向(通过引入靶向配体)用于治疗性药物或基因的局部递送。pfc-nd的另一个潜在的有价值的特征在于，它们可能应用于新型成像策略，例如超声超分辨率成像(ultrasound super-resolutionimaging)，因为这些试剂可以通过施加间歇声学脉冲按需激活和失活。
3、纳米液滴的
4、melich等人，2020年报道了使用快速和受控的微流体混合来制造具有不同稳定化壳的各种类型的pfc-nd。
5、wo2019/023706公开了pfc-nd(即，肽体(peptisomes))，其具有含有装载物，例如治疗活性剂的全氟碳化合物液体核心，以及包含氟化疏水段如氟化疏水氨基酸序列、交联基序和亲水性氨基酸序列的多个可交联两亲肽分子。通过溶剂交换过程获得肽体，在该过程中，将水缓慢添加到肽和pfc的有机乳液，最终导致肽在pfc纳米液滴表面处自发组装。
6、到目前为止，据申请人所知，这样的由所述可交联两亲性肽稳定的pfc-nd尚未通过微流控技术制备。
7、申请人现在已经开发了用于制备组合物的微流体方法，该组合物包含由两亲性肽稳定的经校准的(全)氟碳化合物交联的囊泡。
8、通常在现有技术中，术语“经校准的”也表示为“尺寸受控的”、“尺寸均匀的液滴”、“单分散(的)”或“单尺寸(的)”。
技术实现思路
1、本专利技术的一个方面涉及用于制备经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液的方法，所述方法包括以下步骤：
2、a)制备水相，其中所述水相的温度为至少10℃；
3、b)制备有机相，
4、其中
5、i)所述水相包含可交联两亲性肽，和所述有机相包含氟碳化合物
6、或
7、ii)所述有机相包含可交联两亲性肽和氟碳化合物；
8、c)将所述水相注入微流体筒的第一入口和将所述有机相注入微流体筒的第二入口，由此在微流体筒的混合部分中混合所述水相和所述有机相，以获得的经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液；
9、d)从微流体筒的出口通道收集经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液，和
10、e)使可交联两亲性肽交联，以获得经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液。
11、在一个优选的实施方案中，在步骤a)中，所述水相的温度为至少15℃，更优选至少18℃，还更优选至少19℃。水相的温度典型地不高于所述有机相组分的沸点，优选不高于具有最低沸点的有机相组分的沸点。例如，水相的温度为低于60℃，更优选低于30℃，还更优选低于25℃，优选低于22℃，更优选该温度为至少20℃。
12、优选地，该温度为至少20℃±1(即，室温)。
13、优选地，所述水相包含可交联两亲性肽，和有机相包含氟碳化合物。
14、优选地，所述氟碳化合物为全氟碳化合物。
15、在另一个实施方案中，所述水相包含ph低于7.0，更优选低于6.5，还更优选低于6.0，更优选低于5.5，更优选低于5，更优选低于4.5，还更优选低于4.0，直至例如0，优选直至1.0的水性液体组分。
16、在一个实施方案中，所述水相包含选自以下的水性组分：水、乙酸钠缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液或其混合物。
17、在另一实施方案中，所述有机相包含选自以下的有机溶剂：乙醇、甲醇或其混合物。
18、在一个实施方案中，所述可交联两亲性肽为式i的化合物：
19、hb-cl-hp(i)
20、其中，hb为氟化的疏水性聚合物，cl为交联基序，和hp为亲水性氨基酸序列。
21、在一个优选的实施方案中，可交联两亲性肽为式(ii)的化合物：
22、hb’-cl-hp(ii)
23、其中，hb’为氟化的疏水性氨基酸序列；cl为交联基序；和hp为亲水性氨基酸序列。
24、在另一个优选的实施方案中，可交联两亲性肽为式iv的化合物：
25、
26、其中，疏水性部分为五氟苯基丙氨酸，交联基序为gggccgg，亲水性肽为氨基酸序列丙氨酸甘氨酸丙氨酸(即，aga)，和r为-oh或nh2。
27、当r为-oh时，式iv的化合物被称为ffffffgggccggkgaga(seq id no:2)。
28、当r为-nh2时，式iv的化合物被称为ffffffgggccggkgaga-nh2(seq id no:3)。
29、在一个实施方案中，该方法另外包括任选的步骤d’)，所述步骤包括稀释经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液。
30、在另一实施方案中，该方法另外包括任选的步骤f)，所述步骤包括洗涤所获得的经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液。
31、本专利技术的另一方面涉及根据上文定义的方法获得的包含多个经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液，其中所述经校准的(全)氟碳化合物交联的囊泡具有介于100nm与1000nm之间的z均直径和低于0.25的多分散性。
32、在一个优选的实施方案中，所述交联的囊泡具有大于80％，优选至少85％，更优选至少90％，还更优选至少95％的交联度。优选地，交联度为100％。
33、在另一个实施方案中，所述包含多个经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液另外包含药学上可接受的赋形剂。
34、在一个优选的实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂为葡萄糖。
35、另一个方面涉及根据上文定义的方法获得的包含多个经校准的氟碳化合物交联的囊泡的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于制备经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述水相包含可交联两亲性肽表面活性剂和所述有机相包含氟碳化合物。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述氟碳化合物为全氟碳化合物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相包含pH低于7.0的水性液体组分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相包含选自以下的水性液体组分：水、水性缓冲溶液、水性等渗溶液或其混合物。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述水性液体组分选自水、乙酸钠缓冲液和三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相的温度更优选为至少15℃。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述水相的温度为至少20℃。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤e)包括使所述经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液与能够诱发可交联两亲性肽交联的氧化性源接触，以获得经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性
10.根据权利要求9所述的方法，其中使所述氧化性源与所述经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液接触的时间足以诱发90％以上的两亲性肽的交联度。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述氧化性源包括氧化性溶液和氧化性气体的混合物。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中步骤e)为渗析程序。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其另外包括步骤d’)，所述步骤包括稀释所收集的经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其另外包括步骤f)，所述步骤包括洗涤所获得的经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液。
15.能够通过前述权利要求中任一项所限定的方法获得的包含多个经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液，其中所述交联的囊泡具有介于100nm与1000nm之间的z均直径和小于0.25的多分散性。
16.根据权利要求15所述的水性悬浮液，其中所述交联的囊泡具有大于80％，优选至少85％，更优选至少90％，还更优选至少95％的交联度，优选地，交联度为100％。
17.根据权利要求15所述的水性悬浮液，其用于诊断和/或治疗性处理。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于制备经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述水相包含可交联两亲性肽表面活性剂和所述有机相包含氟碳化合物。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述氟碳化合物为全氟碳化合物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相包含ph低于7.0的水性液体组分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相包含选自以下的水性液体组分：水、水性缓冲溶液、水性等渗溶液或其混合物。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述水性液体组分选自水、乙酸钠缓冲液和三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相的温度更优选为至少15℃。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述水相的温度为至少20℃。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤e)包括使所述经校准的氟碳化合物可交联囊泡的水性悬浮液与能够诱发可交联两亲性肽交联的氧化性源接触，以获得经校准的氟碳化合物交联的囊泡的水性悬浮液。
10.根据权利要求9所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·德马托斯，R·梅里彻，A·克劳特，S·沙尔卡维，
申请(专利权)人：博莱科瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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