【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学精准医疗领域，提供一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体及其应用。
技术介绍
1、
2、视网膜色素变性78型（retinitis pigmentosa 78, rp78）是一种罕见的遗传性疾病，主要是由c8orf37等基因突变导致。c8orf37（chromosome 8 open reading frame 37）是以该基因所在染色体位置命名，全称是人第8号染色体第37个开放阅读框。研究表明，c8orf37基因突变可能会导致视网膜色素变性、视锥细胞和视杆细胞营养不良以及儿童期出现的早发性视网膜营养不良的伴黄斑萎缩、视力丧失和夜盲症等。c8orf37基因一共包括6个外显子，能致病的突变位点包括“c.156-2a>c”“c.243+2t>c”“c.244-2a>c”“c.374+2t>c”“c.497t>a”“c.529c>t”“c.575delc”“c.555g>a”。目前暂未专利技术在视网膜组织特异敲除c8orf37的疾病模型，限制了视网膜色素变性78型病变以及相关治疗研究。
3、这类疾病长期以来一直被认为是无法治愈的，直至基因治疗等手段的出现，改变了这种困境。由于眼组织一定程度上是一个免疫特权区域，视网膜色素变性是适合使用基因治疗的理想领域，2017年，美国食品和药物管理局第一次批准了治疗遗传性视网膜变性的基因疗法，这一疗法也获得了欧洲药品管理局的批准。临床试验表明，在眼组织中使用腺相关病毒（aav）或者慢病毒（lv）载体递送基因不会
4、该专利技术主要特色是为遗传性视网膜变性病患者的“精准医疗”，即根据患者的基因信息、生物标志物以及疾病的特性来定制个性化的治疗方案：一是提供更加精准的dna增强疗法，通过针对治疗性基因以及调控元件的创新设计，或采用对非目标组织进行去靶向化，新构建的基因组能够在目标组织和细胞表达并具有理想的生物分布和表达水平；二是更加注重不同病患者个体对基因治疗药物的实际反应，利用起源于病患者供体细胞或依托患者的基因信息、生物标志物等属性构建类器官模型，并进行dna增强疗法反应测试，这种方法能够提高治疗的有效性，从而找出最有效的治疗方案。为患者带来更加精准的治疗体验；
5、根据病患者基因信息、生物标志物以及疾病的特性，提供一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体及其应用，并应用体外类器官模型进行c8orf37基因增强疗法反应测试，更加注重不同病患者个体对基因治疗药物的实际反应，从而找出最有效的治疗方案，为患者带来更加精准的治疗体验。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是实现遗传性视网膜变性病患者“精准医疗”，为解决以上技术问题，本专利技术提供了一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体及其应用。
2、本专利技术的第一个目的是，提供c8orf37基因的dna增强疗法腺病毒载体。因为c8orf37基因在体内有两种不同的表达谱，一种是3340 bp的c8orf37l模式，一种是3244 bp的c8orf37s模式。因此本专利技术分别构建了表达c8orf37l和c8orf37s两种不同的腺病毒载体。所述腺病毒载体含有人源化c8orf37（homo sapiens c8orf37, hc8orf37）基因、视锥和视杆细胞特异性启动子人源化g蛋白偶联受体激酶（homo sapiens g protein–coupledreceptor kinase 1, hgrk1p）启动子部分序列、顺势调控元件人源化rbp3（homo sapiensretinol binding protein 3, or homo sapiens interstitial retinol-bindingprotein, hrbp3c）增强子，以及土拨鼠肝炎病毒转录后调节序列wpre等。包括以下步骤：
3、1.获取如seq id no .1所示的人源性hc8orf37l长转录组片段；
4、2.获取如seq id no .2所示的人源性hc8orf37s短转录组片段；
5、3.获取如seq id no .4所示的人源性hgrk1p启动子；
6、4.获取如seq id no .3所示的人源性hrbp3c增强子；
7、5.raav-hrbp3c-hgrk1p-hc8orf37l腺重组病毒的包装、纯化和浓缩；
8、6.raav-hrbp3c-hgrk1p-hc8orf37s腺重组病毒的包装、纯化和浓缩。
9、在上述技术方案的基础上，本专利技术还提供以下可选技术方案：
10、在可选方案中：步骤3-4中获得的hgrk1p启动子和hrbp3c增强子，可以增强转入的人源化c8orf37l长转录组片段和人源化c8orf37s短转录组片段的长期表达。
11、在可选方案中：步骤5-6中腺相关病毒选自aav2、aav5和aav8。
12、相较于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
13、本专利技术的另一目的是提供上述c8orf37基因增强疗法在防治遗传性视网膜变性中的用途，本专利技术以raav-hrbp3c-hgrk1p-hc8orf37l和raav-hrbp3c-hgrk1p-hc8orf37s作为基因治疗药物，对c8orf37基因缺陷视网膜类器官进行转录，可实现腺重组病毒载体介导的hc8orf37基因转导，改善人源化c8orf37的表达。
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1.一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，包含编码人源化C8orf37的核酸序列、人源性hGRK1p启动子以及人源性hRBP3c增强子；
2.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，含有视锥细胞、视杆细胞的特异性启动子及增强子。
3.根据权利要求2所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，所述视锥细胞、视杆细胞特异性启动子为hGRK1p启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，视锥细胞、视杆细胞特异性顺势调控元件为人源性hRBP3c增强子，其核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示。
5.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，所述的病毒载体的序列含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。
6.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，所述的病毒载体序列含有SEQ ID NO:2、
7.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，所述的病毒载体为AAV2型、AAV5型或AAV8型腺相关病毒载体。
8.一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的C8orf37基因增强疗法的药物组合物，其特征在于，含有如权利要求1-7任一项所述用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体。
9.如权利要求1-7任一项所述用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体在制备治疗遗传性视网膜变性药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，包含编码人源化c8orf37的核酸序列、人源性hgrk1p启动子以及人源性hrbp3c增强子；
2.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，含有视锥细胞、视杆细胞的特异性启动子及增强子。
3.根据权利要求2所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，所述视锥细胞、视杆细胞特异性启动子为hgrk1p启动子，其核苷酸序列如seq id no:3所示。
4.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体，其特征在于，视锥细胞、视杆细胞特异性顺势调控元件为人源性hrbp3c增强子，其核苷酸序列如seq idno:4所示。
5.根据权利要求1所述的用于靶向治疗遗传性视网膜变性的病毒载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：龚明喜，
申请(专利权)人：广州湾区生物基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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