【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酿造白酒加工，涉及酿造白酒用大曲中微生物的分离技术，具体涉及凤香型槐瓤大曲中快速分离纯化阿姆斯特丹曲霉、扣囊腹膜孢酵母菌和橙黄嗜热子囊菌的方法。
技术介绍
1、大曲是白酒发酵过程中的糖化发酵剂，为白酒酿造提供了丰富的微生物菌群，是影响白酒香型和品质的关键。对大曲中关键功能微生物菌群的快速精准分离纯化，对调节大曲菌群结构、调整大曲理化指标水平以及决定大曲风味功能物质的质量中发挥着重要作用。
2、酱香、清香、浓香、米香、凤香是白酒代表性的五大香型，酿造不同香型白酒的大曲，其原料及其配比、曲房地理环境，形成过程中的温度、湿度、时间等各不相同，从而形成了酱香、清香、浓香、米香、凤香等独特香型的大曲。大曲制备历史悠久，通常选用大麦、豌豆和小麦为制作原料，采用低温(顶温40℃左右)或中高温(顶温55～60℃)或高温制曲工艺(顶温63℃左右)，一般均经历入房、上霉、晾霉、潮火、大火、后火、晾架、出房和老熟期等九个阶段，从而形成了低温大曲、中高温大曲和高温大曲三种类型，富集了不同的微生物群落，形成了不同香型的大曲。其中，酱香、浓香型大曲采用的是高温制曲工艺，清香型大曲采用的是低温制曲工艺，而凤香型大曲采用的是中高温制曲工艺。
3、凤香型大曲采用的是中高温制曲工艺，因此富集的菌群既具有酱香、清香、浓香大曲中的优势菌群，如优势真菌属有曲霉(aspergillus)、腹膜孢酵母菌(saccharomycopsis)、嗜热子囊菌(thermoascus)等。也具有自身特有的微生物菌落，形成了与西凤酒工艺特色相符合的
4、目前报道的有关阿姆斯特丹曲霉(aspergillus amstelodami)、扣囊腹膜孢酵母菌(saccharomycopsis fibuliger)和橙黄嗜热子囊菌(thermoascus aurantiacus)的分离纯化方法的文献不多，且均采用平板梯度稀释的方法进行分离纯化，即直接采集大曲样品，称取后混合均匀，然后进行稀释悬浮，再进行分离。大曲中这三种菌的分离纯化方法也是如此，而大曲中的微生物种群是自然界中微生物物种最为复杂多样的样品之一，据多样性检测分析结果：细菌和真菌的otu数少者几十个，多者达成百甚至上千个。其中阿姆斯特丹曲霉(aspergillus amstelodami)主要以产生黄色子囊果的形式进行有性繁殖生长，生长速度较慢，一般在最适30℃左右需培养5-7天，而细菌、酵母菌等生长速度快的菌1-3天即可长好，从而抑制了阿姆斯特丹曲霉的生长；扣囊腹膜孢酵母菌(saccharomycopsisfibuliger)属于假丝酵母菌，主要以产假菌丝形式进行无性繁殖生长，一般在最适30℃左右需培养3-5天，生长速度比一般的细菌和非假丝酵母菌的生长速度慢，因此也容易受到杂菌的抑制；橙黄嗜热子囊菌(thermoascus aurantiacus)属于高温真菌，产菌丝和产有性孢子同时生长繁殖，适宜温度为45～50℃，一般需培养5-7天，在此温度下，很容易受到大曲样品中的生长速度快的耐热芽孢细菌、酵母菌、霉菌等的抑制，造成分离困难。
5、由此可见，针对大曲复杂的菌群组成，现有的菌分离方法采集样本目标菌的菌浓度低，分离难度大，另外，如果目标菌生长速度慢，受到生长速度较快的菌如细菌、酵母菌、根霉等的影响，易被生长速度较快的菌覆盖，通常需要在平板上反复多次分离，并同时进行菌体、菌落鉴定，才能富集目标菌，获得目标菌的纯培养物，这无疑导致分离目标菌耗时费力，精准度低，分离难度大。
6、目前未见有文献和专利报道采用本专利技术的方法从凤香型大曲中分离纯化阿姆斯特丹曲霉、扣囊复膜孢酵母和橙黄嗜热子囊菌。
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种凤香型槐瓤大曲中三种真菌的快速分离纯化方法，本专利技术根据凤香型槐瓤大曲特点，从采集样本步骤入手，选择目标菌富集区取样，直接挑选目标菌的子囊果或菌丝体进行培养，提高了目标菌在样本中的浓度，同时避免了杂菌在培养中对目标菌的影响，分离精准度大幅提升，简化了分离纯化步骤。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
3、本专利技术提供一种凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，具体步骤如下：
4、s1：采集目标菌富集样本，所述目标菌为阿姆斯特丹曲霉，扣囊腹膜孢酵母菌和橙黄嗜热子囊菌中的任意一种；
5、s2：将步骤s1所得样本置于体视显微镜下，挑取样本中目标菌制备菌悬液；
6、s3：将步骤s2菌悬液接种相应的平板培养基，培养3～7d，获得目标菌的平板培养物，挑取平板培养物上的目标菌，接种相应的平板培养基，于相应温度培养3～7d，获得目标菌的平板纯培养物，所述培养基为mea、ca、孟加拉红或pda培养基中的任意一种；
7、s4：挑取步骤s3的平板纯培养物中的目标菌，接种斜面培养基，培养，获得分离纯化的目标菌。
8、所述步骤s1中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，富集样本为具有黄色斑点的曲心样本；目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，富集样本为白色雪花状的曲皮表面；目标菌为橙黄嗜热子囊菌，富集样本为云朵状淡红色或紫红色圈形曲心。
9、所述步骤s2中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，挑取样本中目标菌为阿姆斯特丹曲霉的黄色薄壁的闭囊壳子囊果；目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，挑取样本中目标菌为白色雪花状菌丝体；目标菌为橙黄嗜热子囊菌，挑取样本中目标菌为云朵状淡红色或紫红色圈形。
10、所述步骤s3中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，平板培养基为孟加拉红培养基，培养温度为25℃～35℃；目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，培养基为pda培养基，培养温度为30～35℃；目标菌为橙黄嗜热子囊菌，培养基为pda培养基，培养温度为45℃～50℃。
11、所述步骤s4中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，斜面培养基为孟加拉红培养基；培养温度为25℃～35℃；目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，斜面培养基为pda培养基，培养温度为30～35℃；目标菌为橙黄嗜热子囊菌，斜面培养基为pda培养基，培养温度为45℃～50℃。
12、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
13本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S1中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，富集样本为具有黄色斑点的曲心样本。
3.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S2中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，挑取样本中目标菌为阿姆斯特丹曲霉的黄色薄壁的闭囊壳子囊果。
4.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S3中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，平板培养基为孟加拉红培养基，培养温度为25℃～35℃。
5.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S1中，目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，富集样本为白色雪花状的曲皮表面。
6.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S2中，目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，挑取样本中目标菌为白色雪花状菌丝体。
7.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分
8.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S1中，目标菌为橙黄嗜热子囊菌，富集样本为淡红色曲心。
9.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S1中，目标菌为橙黄嗜热子囊菌，挑取样本中目标菌为云朵状淡红色或紫红色圈形。
10.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤S3中，目标菌为橙黄嗜热子囊菌，培养基为PDA培养基，培养温度为45℃～50℃。
...【技术特征摘要】
1.一种凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤s1中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，富集样本为具有黄色斑点的曲心样本。
3.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤s2中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，挑取样本中目标菌为阿姆斯特丹曲霉的黄色薄壁的闭囊壳子囊果。
4.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤s3中，目标菌为阿姆斯特丹曲霉，平板培养基为孟加拉红培养基，培养温度为25℃～35℃。
5.根据权利要求1所述凤香型大曲中快速分离纯化三种真菌的方法，其特征在于，所述步骤s1中，目标菌为扣囊腹膜孢酵母菌，富集样本为白色雪花状的曲皮表面。
6.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕嘉枥，曹丹，楚京赢，许双双，张宇航，刘翠，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：
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