【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学，具体涉及人参中化合物γ-氨基丁酸双糖苷gabafg的制备分离方法。
技术介绍
1、人参（ panax ginseng c. a. meyer）是我国应用历史悠久，药理活性显著的传统中草药，为五加科植物。归脾、肺和心经，首载于《神农本草经》，列为上品，性甘，微苦，是大补元气，复脉固脱之要药，同时也具有久服轻身延年，增强免疫力以及在神经系统、内分泌系统和血液调节等方面作用，也因此被广泛应用于医药研发和功能性食品等领域，红参是当前人参加工最具代表性的炮制品，是经高温蒸制和烘干而成的红棕色的熟制品，在其加工过程中含有的氨基酸和还原糖明显减少，会产生精氨酸双糖苷afg、组氨酸双糖苷（hfg）、精氨酸乳糖苷（afga）等成分，这是由于二者发生梅拉德反应的缘故。2型糖尿病（t2dm）是最常见的糖尿病类型，特征是血糖水平升高，通常伴有胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍。胰岛β细胞对葡萄糖敏感，能分泌胰岛素以调节血糖，当机体受到氧化损伤时会导致胰岛β细胞功能障碍，减少胰岛素分泌。近年来的研究表明afg在抗糖尿病、调节免疫与抗疲劳等方面具有良好的药理活性，随着对梅拉德反应产物的深入研究，发现红参中的梅拉德反应产物是红参发挥其药理作用的重要药效物质基础。近年来，红参中一种新的梅拉德反应产物被发现，并命名为γ-氨基丁酸双糖苷（gabafg）其结构鉴定如图4至8所示，结构式如下：
2、
3、其具有良好的抗氧化活性，可用于抗糖尿病药物的研发。
4、目前，g
技术实现思路
1、本专利技术公开一种从人参相关加工产品中高效提取梅拉德产物gabafg的方法，为一种新的提取方法：红参粉末用水饱和正丁醇萃取除去杂质，沉淀用有机酸（醋酸）水溶液混合一定量的无机盐超声提取，过滤，去除不溶部分，滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶和聚丙烯酰胺凝胶柱得gabafg，具有操作简易，安全环保，得率高，产物刺激性小和稳定性高等特点。
2、本专利技术通过以下技术方案来实现：
3、一种高效提取γ-氨基丁酸双糖苷（gabafg）的方法，具体包括如下步骤：
4、人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取三次，得沉淀，再用含有氯化锌/硫酸锌的ph为4.5~5.0的醋酸水溶液进行超声提取，过滤，从滤液中获得γ-氨基丁酸双糖苷。
5、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述人参相关加工品包括但不限于红参，生晒参，人参果实，西洋参。
6、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述的过筛处理包括20-100目筛，优选为80目。
7、作为本专利技术的一种优选技术方案，人参相关加工品粉末的重量与醋酸水溶液的体积的比，按g/ml为1：15。
8、作为本专利技术的一种优选技术方案，人参相关加工品粉末重量与无机盐质量的比，按照g/g为1：0.3。
9、作为本专利技术的一种优选技术方案，前述的方法进一步包括：滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用75%的乙醇水溶液进行洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含gabafg成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶（bio-gel p-2）柱，收集富含gabafg的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得gabafg。
10、作为本专利技术的一种优选技术方案，人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取包括：人参相关加工品过80目筛，粉末加入到水饱和正丁醇中，萃取3次，离心，过滤，去除上清液，人参相关加工品粉末重量与水饱和正丁醇体积的比，按g/ml为1：150。
11、通过大量的实验研究发现，gabafg在酸性条件下比较稳定，优选ph为4.5~5.0的酸性水溶液，酸度过高或过低均会影响红参中gabafg的提取与分离，优选醋酸的酸性溶液。更为重要的是，与一定量的氯化锌组合能提高gabafg的得率并增加物质的稳定性，可使gabafg的得率提高20%-30%。
12、本专利技术提取物通过hplc柱前衍生分析与hplc-elsd检测计算出gabafg的纯度可高达97%以上。
13、作为本专利技术的一种优选技术方案，本专利技术γ-氨基丁酸双糖苷的提取包括，包括以下步骤：
14、将人参相关加工品粉末（80目）用水饱和正丁醇萃取三次，离心，过滤，去除上清液，收集沉淀，再用ph为4.5的醋酸水溶液混合一定量的无机盐超声提取，过滤，去除不溶部分，滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过200-300目硅胶柱，用75%乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含gabafg成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶（bio-gel p-2）柱，用0.2%的醋酸水溶液洗脱，收集富含gabafg的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得gabafg。
15、作为本专利技术的一种优选技术方案，3 g红参粉末，置于450 ml的水饱和正丁醇萃取三次，沉淀置于45 ml的ph为4.5的醋酸水溶液混合0.9 g的氯化锌中，超声提取60 min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200-300目硅胶与聚丙烯酰胺凝胶（bio-gel p-2）柱得gabafg。作为其优选技术方案：提取液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用75%乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含gabafg成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶（bio-gel p-2）柱，用0.2%醋酸水溶液洗脱，进行薄层色谱法（tlc）分析，收集rf=0.28富含gabafg的洗脱液如图1，浓缩冷冻干燥即得gabafg，进行高效液相色谱-蒸发光散射检测及高效液相色谱柱前衍生测定纯度如图2至图3所示。
16、本专利技术进一步提供了所述的化合物在制备抗糖尿病药物中的应用，具体地，在制备预防、治疗或者改善h2o2诱导的ins-1细胞并抗糖尿病药物中的应用。
17、本专利技术相对于现有技术的有益效果包括：
18、本专利技术中，首次使用水饱和正丁醇作为萃取媒介，醋酸水溶液混合一定量的无机盐作为提取溶剂提取gabafg，提高了得率的同时降低了提取成本，且提取过程安全环保。
19、以水饱和正丁醇为萃取媒介，沉淀中皂苷、多糖和色素残留量少，易于后续分离提纯；以ph为4.5的醋酸水溶液混合一定量的无机盐提取gabafg，抑制了gabafg的水解，提高了gabafg的得率，简化了提取步骤，节约了成本。
20、最重要的是，醋酸作为易挥发的成分，不会对后续分离纯化产生影响，且对人体无伤害，无机盐作为容易被过滤去除的物质，其增加了gabafg的稳定性，使得率增加。
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1.人参中化合物γ-氨基丁酸双糖苷GABAFG的制备分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：人参相关加工品经粉碎过筛处理，使用水饱和正丁醇萃取，得沉淀，再用含有0-1.2g的无机盐pH为4.5-5.0的醋酸水溶液进行超声提取，过滤，从滤液中获得γ-氨基丁酸双糖苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述人参相关加工品包括红参，生晒参，人参果实，西洋参；所述的过筛处理包括20-100目筛；所述的人参相关加工品粉末的重量与醋酸水溶液的体积的比，按g/mL为1：15；人参相关加工品粉末重量与无机盐质量的比，按照g/g为1：0.3；所述的无机盐包括氯化锌或硫酸锌。
3.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：进一步包括：滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用75%的乙醇水溶液进行洗脱，收集各部分洗脱液，收集富含GABAFG的洗脱液，浓缩冻干即得GABAFG。
4.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取，包括：人参相关加工品过80目筛，粉末加入到水饱和正丁醇中，萃取3次，离心
5.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：将人参相关加工品过80目筛粉末用水饱和正丁醇萃取，离心，过滤，去除上清液，沉淀再用pH为4.5的醋酸水溶液并混合氯化锌超声提取，过滤，去除不溶部分，滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过200-300目硅胶柱，用75%乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含GABAFG成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶Bio-gel P-2柱，用0.2%的醋酸水溶液洗脱，收集富含GABAFG的洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得GABAFG。
6.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：3 g粉末，置于450 mL的水饱和正丁醇萃取3次，沉淀置于45 mL 的pH 为4.5 的醋酸水溶液混合0.9 g 的氯化锌中，超声提取60 min，提取液经乙醇醇沉洗脱，抽滤得粗提取物，过200-300目硅胶与聚丙烯酰胺凝胶Bio-gel P-2柱得GABAFG。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：提取液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过200-300目硅胶柱，用75%乙醇水溶液洗脱，收集各部分洗脱液，合并富含GABAFG成分的洗脱液，浓缩后继续过聚丙烯酰胺凝胶（Bio-gel P-2）柱，用0.2%醋酸水溶液洗脱，收集富含GABAFG的洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得GABAFG。
8.根据权利要求1所述的方法，制备得到的化合物γ-氨基丁酸双糖苷。
9.根据权利要求8所述的化合物在制备抗糖尿病药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为在制备预防、治疗或改善过氧化氢H2O2诱导的INS-1细胞药物的应用。
...【技术特征摘要】
1.人参中化合物γ-氨基丁酸双糖苷gabafg的制备分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：人参相关加工品经粉碎过筛处理，使用水饱和正丁醇萃取，得沉淀，再用含有0-1.2g的无机盐ph为4.5-5.0的醋酸水溶液进行超声提取，过滤，从滤液中获得γ-氨基丁酸双糖苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述人参相关加工品包括红参，生晒参，人参果实，西洋参；所述的过筛处理包括20-100目筛；所述的人参相关加工品粉末的重量与醋酸水溶液的体积的比，按g/ml为1：15；人参相关加工品粉末重量与无机盐质量的比，按照g/g为1：0.3；所述的无机盐包括氯化锌或硫酸锌。
3.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：进一步包括：滤液用无水乙醇沉淀，抽滤去除上清液，沉淀过硅胶柱，用75%的乙醇水溶液进行洗脱，收集各部分洗脱液，收集富含gabafg的洗脱液，浓缩冻干即得gabafg。
4.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：人参相关加工品粉末用水饱和正丁醇萃取，包括：人参相关加工品过80目筛，粉末加入到水饱和正丁醇中，萃取3次，离心，过滤，去除上清液，人参相关加工品粉末重量与水饱和正丁醇体积的比，按g/ml为1：150。
5.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于：将人参相关加工品过80目筛粉末用水饱和正丁醇萃取，离心，过滤，去除上清液，沉淀再用ph为4.5的醋酸水溶液并混合氯化锌超声提取...
【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，王梓，侯云逸，李新殿，张竞天，胡俊男，唐姗，姜爽，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：
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