【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，特别涉及用于哺乳动物的组织因子的纯化方法，以及纯化中所使用的缓冲组合物。
技术介绍
1、哺乳动物的组织因子是一种跨膜糖蛋白，分子量约为42kda。与凝血因子fvii或fviia形成复合物后启动凝血激活途径。许多类型的细胞都表达组织因子，但是在正常情况下，血液因为血管的屏障作用接触不到这些细胞表面的组织因子；在组织损伤致血管完整性遭到破坏时，组织因子在血管破损处被暴露，凝血级联反应也相应被激活。
2、凝血活酶多来自兔脑、胎盘及肺组织的浸出液。sysmex公司的pt试剂的凝血活酶来自胎盘，stago公司、上海太阳等公司的pt凝血活酶来自兔脑组织。由于不同公司的凝血活酶来源不同，浓度不同，敏感度不同，造成产品质量差、不稳定、敏感度差等问题。凝血活酶的主要成分为组织因子(tf)和磷脂。
3、组织因子(tf)是一个由260个氨基酸残基组成的跨膜单链糖蛋白，分子量约为47kda。有三个结构域，胞外区，跨膜区和胞内区，主要发挥作用的是胞外区含有3～5个二硫键结构，具有丝氨酸蛋白酶活性，是激活凝血的重要部位，紧随其后的23个氨基酸则穿过细胞膜，为跨膜区，与细胞膜表面的磷脂结合，提供了与下游因子包括ca2+和vii(七因子)结合的表面。
技术实现思路
1、重组表达的跨膜蛋白在纯化过程中易形成沉淀而失去蛋白活性，因此本专利技术提供一种组织因子的纯化方法及其纯化用的缓冲组合物。
2、本专利技术发现，1.在组织因子的纯化过程中，使用hepes配制
3、本专利技术所用到的关键原材料组织因子的分子结构包含3个结构域：细胞外结构域、跨膜结构域、胞浆结构域。本专利技术所述组织因子的氨基酸序列如seq:no1所示，seq:no1序列如下：
4、adttgray nltwkstnfk tilewepksi dhvytvqist rlenwkskcf ltaetecdltdevvkdvgqt
5、ymarvlsypa rngnttgfpe eppfrnspef tpyldtnlgq ptiqsfeqvg tklnvtvqdartlvrrngtf
6、lslravfgkd lnytlyywra sstgkktatt ntneflidvd kgenycfsvq avipsrkrkqrspesltect
7、sreqgrarem ffiigavvvv alliivlsvt vykcrkarag psgkesspln ia；
8、基于组织因子特殊的结构，纯化过程中，组织因子由于脱离原本的还原性环境，易形成沉淀，回收率低。因此，本专利技术提供一种组织因子纯化方法，在整个纯化过程中，添加海藻糖，以提高组织因子在溶液中的稳定性，有效避免沉淀的形成，提高组织因子的得率。
9、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
10、1、在组织因子的纯化过程中，使用hepes配制缓冲液其ph值受环境温度影响较小，更适合组织因子的纯化，因此在所用的缓冲液中均使用hepes；
11、2、在破菌缓冲液和上样缓冲液中，选择5mm的咪唑，回收率较高以及目的蛋白挂柱率高；
12、3、在平衡缓冲液以及洗脱缓冲液中选择合适的咪唑浓度，同时选择5％的海藻糖浓度，能明显保留目的蛋白的活性，提高组织因子在溶液中的稳定性，有效避免沉淀的形成，提高组织因子的得率。
13、缩略语
14、iptg异丙基-β-d硫代半乳糖苷
15、chaps 3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐
16、hepes 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸
17、rtf蛋白重组组织因子蛋白
18、bl21de3宿主菌
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于纯化组织因子的组合物，所述组合物包含如下成分：
2.如权利要求1所述的组合物，该组合物包含如下成分：
3.如权利要求1所述的组合物，该组合物包含如下成分：
4.一种组织因子纯化方法，其特征在于，所述方法包括：
5.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中破菌缓冲液包含：20mM HEPES，150mM NaCl，5mM咪唑，10mM CHAPS，5％海藻糖,pH8.0。
6.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中上样缓冲液包含：20mM HEPES，150mM NaCl，5mM咪唑，10mM CHAPS，5％海藻糖,pH8.0。
7.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中平衡缓冲液包含：20mM HEPES，150mM NaCl，20mM咪唑，10mM CHAPS，5％海藻糖,pH8.0。
8.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中洗脱缓冲包含液包含：20mMHEPES，150mM NaCl，250mM咪唑，10mM CHAPS，5％海藻糖,pH8.0。
<...【技术特征摘要】
1.一种用于纯化组织因子的组合物，所述组合物包含如下成分：
2.如权利要求1所述的组合物，该组合物包含如下成分：
3.如权利要求1所述的组合物，该组合物包含如下成分：
4.一种组织因子纯化方法，其特征在于，所述方法包括：
5.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中破菌缓冲液包含：20mm hepes，150mm nacl，5mm咪唑，10mm chaps，5％海藻糖,ph8.0。
6.如权利要求4所述的一种组织因子纯化方法，其中上样缓冲液包含：20mm hepes，150mm nacl，5mm咪唑，10mm chaps，5％海藻糖,ph8.0。
7.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：严俊，蒋友红，卿小红，
申请(专利权)人：宝锐生物科技泰州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。