【技术实现步骤摘要】
本申请涉及医学和诊断领域，特别是涉及一种生物标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用及诊断活动性结核病的试剂盒。
技术介绍
1、结核病（tuberculosis，tb）是一种由结核分枝杆菌（mycobacteriumtuberculosis）引起的传染病，主要影响肺部，但也可能累及身体其他部位，如淋巴结、骨骼、脑膜、肾脏等。结核病是全球重大的公共卫生问题之一，围绕早期发现、规范治疗及管理结核病患者开展的传染源控制措施，识别和发现结核病患者，是有效控制结核病疫情，降低结核病负担的重要手段。
2、结核分枝杆菌感染者通常存在有三种结果：约5%的人体内可以完全清除病菌，约5%~10%的人会发展为活动性结核病（atb），近90%的感染者处于结核分枝杆菌潜伏感染（ltbi）状态。其中，atb是指具有明显的结核病临床症状和体征，其传播性和危害性最高，是最优先要检测和诊断的类型；ltbi是指机体感染结核分枝杆菌后，对其抗原刺激产生持续性免疫应答反应但没有发生结核病临床表现和影像学改变的持续性感染状态。
3、结核病的诊断以病原学（包括细菌学和分子生物学）检查为主，结合流行病史、临床表现、胸部影像学检查、相关的辅助检查及鉴别诊断等进行综合分析做出诊断。分枝杆菌分离培养检测是结核病实验室诊断的金标准，敏感度较高，但检测周期过长，一般2-6周，且对实验室要求高，不利于结核病的早期诊断；痰涂片寻找结核菌价格低廉、结果报告快、操作简便，但需要5000-10000个菌/ml才能检测出，敏感度低，特异性也差，无法区分肺结核杆菌及其他结
4、综上，现有结核病诊断方法都存在一定局限性，需要开发简便、有效的、能够鉴别诊断atb和ltbi的检测手段。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种生物标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用及诊断活动性结核病的试剂盒。
2、本申请采用了以下技术方案：
3、本申请的第一方面公开了一种生物标志物在制备诊断活动性结核病患者的产品中的应用，所述生物标志物包括fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因、casp1基因和stat2基因中的至少四个基因。需要说明的是，本申请中，提供了一种用于诊断活动性结核病的生物标志物，该生物标志物能够诊断活动性结核病，能够区分个体具有活动性结核病或不具有活动性结核病（结核分枝杆菌潜伏感染和健康人），且具有良好的灵敏度和特异性。
4、本申请的一种实现方式中，所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因和c5基因；或所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因和casp1基因；或所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因、casp1基因和stat2基因。
5、本申请的一种实现方式中，所述产品检测的样本类型为外周血。需要说明的是，痰液是目前结核病诊断的主要样本，其标本质量对检测结果有很大影响，但合格的痰液样本难以获得，因为近1/3的结核病患者无痰或少痰，特别是儿童患者和hiv感染者。基于非痰标本的结核病检测技术，对于发现更多的、现有技术不易发现的结核病患者具有重要意义。本申请中检测的样本类型为外周血，外周血样本是非痰样本中获取最便捷的样本类型之一，能很好地改善结核病诊断能力，且血液样本容易与快速分子检测平台整合，临床转化难度较低，在结核病的诊断和治疗监测方面具有良好的应用前景。
6、本申请的一种实现方式中，所述产品包括检测所述生物标志物的表达水平的试剂或试剂盒。需要说明的是，生物标志物的表达水平可以为生物标志物的转录组水平的表达水平。
7、本申请的一种实现方式中，通过比较所述生物标志物的表达水平以诊断活动性结核病患者。
8、本申请的一种实现方式中，通过所述生物标志物的表达水平得到所述生物标志物的评分值，将所述评分值与截止值进行比较，以诊断活动性结核病患者。
9、本申请的一种实现方式中，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（rt-qpcr）检测所述生物标志物的表达水平。需要说明的是，也可以通过其他技术手段来检测生物标志物的表达水平，例如通过rna测序、蛋白质印迹、免疫组织化学、流式细胞术、原位杂交等技术。本申请中，通过rt-qpcr技术，能够定量基因的mrna水平，检测时间短、检测成本低、且灵敏度和特异性较高。
10、本申请的一种实现方式中，所述评分值为所述生物标志物中各个基因表达量的平均值减去管家基因表达量的平均值。需要说明的是，本申请通过定义评分值为所述生物标志物中各个基因表达量的平均值减去管家基因表达量的平均值，能够提供一种用于计算不同样本的生物标志物的表达情况的计算方法。
11、本申请的一种实现方式中，所述生物标志物中各个基因表达量和所述管家基因表达量为实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测得到的相应基因的ct值。需要说明的是，qpcr检测中的ct值（cycle threshold）是指在pcr扩增过程中，荧光信号达到预先设定的阈值时的循环次数，ct值与样本中目标核酸的含量相关，样本中目标核酸含量越高，达到阈值所需的循环次数就越少，ct值也就越低。因此，本申请中，可以通过ct值来表示某个基因的表达量。例如，fas基因的表达量可以用fas基因的rt-qpcr检测的ct值来表示。
12、本申请的一种实现方式中，所述截止值为-4.965至0.4636。需要说明的是，本申请中，通过检测生物标志物的表达量以及选择截止值为-4.965至0.4636，进行活动性结核病的诊断，能够具有良好的灵敏度和特异性。
13、本申请的一种实现方式中，若所述评分值小于等于所述截止值，则诊断为活动性结核病，若所述评分值大于所述截止值，则诊断为不具有活动性结核病。
14、本申请的一种实现方式中，所述产品包括检测所述生物标志物的引物和探针，引物序列和探针序列选自seq id no.1~seqid no.18所示的序列。
15、本申请的第二方面公开了一种用于诊断活动性结核病患者的试剂盒，所述试剂盒包括检测生物标志物表达水平的试剂，所述生物标志物选自fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因、casp1基因和stat2基因中的至少四个。
16、本申请的一种实现方式中，所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因和c5基因；或所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种生物标志物在制备诊断活动性结核病患者的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物包括FAS基因、TNFSF10基因、TRIM5基因、C5基因、CASP1基因和STAT2基因中的至少四个基因。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物为FAS基因、TNFSF10基因、TRIM5基因和C5基因；或所述生物标志物为FAS基因、TNFSF10基因、TRIM5基因、C5基因和CASP1基因；或所述生物标志物为FAS基因、TNFSF10基因、TRIM5基因、C5基因、CASP1基因和STAT2基因。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品检测的样本类型为外周血。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测所述生物标志物的表达水平的试剂或试剂盒。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测所述生物标志物的表达水平。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，通过所述生物标志物的表达水平得到所述生物标志物的评分值，将所述评分值与截止值进行比较，以诊断活动性结
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述截止值为-4.965至0.4636；若所述评分值小于等于所述截止值，则诊断为活动性结核病；若所述评分值大于所述截止值，则诊断为不具有活动性结核病。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测所述生物标志物的引物和探针，引物序列和探针序列选自SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.18所示的序列。
9.一种用于诊断活动性结核病患者的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测生物标志物表达水平的试剂，所述生物标志物包括FAS基因、TNFSF10基因、TRIM5基因、C5基因、CASP1基因和STAT2基因中的至少四个基因。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测所述生物标志物的引物和探针，检测所述生物标志物的引物序列和探针序列选自SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.18所示的序列。
...【技术特征摘要】
1.一种生物标志物在制备诊断活动性结核病患者的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物包括fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因、casp1基因和stat2基因中的至少四个基因。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因和c5基因；或所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因和casp1基因；或所述生物标志物为fas基因、tnfsf10基因、trim5基因、c5基因、casp1基因和stat2基因。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品检测的样本类型为外周血。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测所述生物标志物的表达水平的试剂或试剂盒。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测所述生物标志物的表达水平。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，通过所述生物标志物的表达水平得到所述生物标志物的评分值，将所述评分值与截止值进行比较，以诊断活动性结核病患者，其中，所述评...
【专利技术属性】
技术研发人员：幸新干，任保彦，方奇勋，徐京平，林康凤，彭玲愿，张玉红，
申请(专利权)人：亚能生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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