【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫分析，具体涉及一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸。
技术介绍
1、4-氯苯氧乙酸(4-chlorophenoxyaceticacid，4-c)，俗称防落素，是一种植物生长调节剂，在农业上常常用于作物从发芽到成果的各个阶段，因成本低廉使用量逐年增加，药物残留极易经皮肤和呼吸道导致人体中毒，过量摄入可引起儿童发育早熟、女性生理紊乱、诱发肿瘤及癌症等。因此，建立4-c的快速检测方法意义重大。
2、基于精密仪器的分析法包括气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用法、液质联用法等已陆陆续续被开发于4-氯苯氧乙酸的检测，例如我国出入境检验检疫行业标准sn/t3725-2013采用液质联用法，检测限(lod)为0.01mg/kg。吉林省食品安全地方标准dbs22/009-2013采用高效液相色谱法，用于豆芽检测，检测限0.1mg/kg。尽管色谱分析法灵敏度高，可重现性良好，但因前处理繁琐、检测设备昂贵等因素，不利于现场批量检测。免疫分析法具有操作技术简单、特异性好、灵敏度高、适合批量检测等优点而被广泛应用，常应用于各种有害物质的快速高通量检测。
3、基于单克隆抗体的免疫侧流层析试纸(lfia)在真实样品检测中具有明显优势，它可以在5-15min内快速实现样品检测的可视化，几十年来一直致力于不同种类有毒物质的检测。众所周知，常规lfia是以抗体与胶体金结合所形成的复合物为免疫探针，通过抗原抗体反应使免疫探针聚集在t线处形成肉眼可见的颜色条带信号，从而实现检测结果的可视化。花瓣状金纳米颗粒是一种
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸，以实现4-氯苯氧乙酸的高灵敏快速可视化检测。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、杂交瘤细胞株4c-6f6在制备检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸中的应用，所述杂交瘤细胞株4c-6f6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4c-6f6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmccno.45807。
4、一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸，所述试纸包括免疫探针结合垫，所述免疫探针结合垫上滴加有金纳米花免疫探针，所述金纳米花免疫探针由抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6与金纳米花偶联形成，所述抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6由杂交瘤细胞株4c-6f6分泌产生；所述杂交瘤细胞株4c-6f6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4c-6f6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmcc no.45807。
5、进一步的，上述金纳米花免疫探针的制备方法为：取20ml金纳米花溶液置冰水浴，向其中含缓慢滴加100μl 0.1m的k2co3并低速搅拌5min，再缓慢滴加25μl 0.60mg/ml的抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6并继续搅拌1h，然后加入终浓度为0.5wt％的peg20000并继续搅拌45min，再加入终浓度1wt％的bsa并继续搅拌45min，静置4℃平衡体系过夜，然后置4℃、1500r/min离心10min，得上清1和沉淀1；将上清1置4℃、6000r/min离心5min，得上清2和沉淀2；将上清2置4℃、6500r/min离心10min，得上清3和沉淀3；将上清3置4℃、6500r/min离心20min，得上清4和沉淀4；将上清4置4℃、6500r/min离心30min，得上清5和沉淀5；合并沉淀2、沉淀3、沉淀4和沉淀5，用含1wt％bsa、0.5wt％甘氨酸、5wt％海藻糖和0.5vol％吐温20的1×pbs缓冲液按1/10体积重悬，得金纳米花免疫探针重悬液。
6、进一步的，上述金纳米花溶液的制备方法为：在搅拌状态下向100ml ddh2o中依次加入500μl胶体金溶液、350μl 1wt％的haucl4水溶液、300μl 1wt％的柠檬酸三钠水溶液，混匀5min，在剧烈搅拌下迅速加入1.0ml 30mm的对苯二酚，持续剧烈搅拌30min，得金纳米花溶液。
7、进一步的，上述试纸还包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上设置有c线和t线，所述c线上包被有羊抗小鼠igg抗体，所述t线上包被有由4-氯苯氧乙酸和bsa偶联得到的完全抗原4c-bsa。
8、一种检测4-氯苯氧乙酸的检测卡，其包括上述的金纳米花免疫侧流层析试纸，以及包装上述金纳米花免疫侧流层析试纸的塑料外壳；所述塑料外壳的卡壳上盖设有加样孔和观察窗，所述加样孔在样品垫的上方并通过所述观察窗观测t线和c线。
9、上述的金纳米花免疫侧流层析试纸、检测卡在检测4-氯苯氧乙酸中的应用。
10、本专利技术的显著优点在于：
11、1)本专利技术提供的一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸对4-氯苯氧乙酸的检测阈值(消除t线)为400ng/ml，可视化检测限(vlod)为6.25ng/ml。
12、2)本专利技术提供的一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸与常规的胶体金试纸相比，可视化检测限(vlod)提升8倍。
13、3)本专利技术提供的一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸vlod为6.25ng/ml，检测时间为15min，与已报道的检测豆芽中4-氯苯氧乙酸lc-ms/ms法(lod＝10ng/ml)相比，前处理更为简单。
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1.杂交瘤细胞株4C-6F6在制备检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸中的应用，其特征在于：所述杂交瘤细胞株4C-6F6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4C-6F6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.45807。
2.一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述试纸包括免疫探针结合垫，所述免疫探针结合垫上滴加有金纳米花免疫探针，所述金纳米花免疫探针由抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4C-6F6与金纳米花偶联形成，所述抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4C-6F6由杂交瘤细胞株4C-6F6分泌产生；所述杂交瘤细胞株4C-6F6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4C-6F6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.45807。
3.根据权利要求2所述的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述金纳米花免疫探针的制备方法为：取20mL金纳米花溶液置冰水浴，向其中含缓慢滴加100μL 0.1M的K2CO
4.根据权利要求3所述的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述金纳米花溶液的制备方法为：在搅拌状态下向100mL ddH2O中依次加入500μL胶体金溶液、350μL 1wt%的HAuCl4水溶液、300μL 1wt%的柠檬酸三钠水溶液，混匀5min，在剧烈搅拌下迅速加入1.0mL30mM的对苯二酚，持续剧烈搅拌30min，得金纳米花溶液。
5.根据权利要求4所述的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述试纸还包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上设置有C线和T线，所述C线上包被有羊抗小鼠IgG抗体，所述T线上包被有由4-氯苯氧乙酸和BSA偶联得到的完全抗原4C-BSA。
6.一种检测4-氯苯氧乙酸的检测卡，其特征在于：包括如权利要求2~5任一项所述的金纳米花免疫侧流层析试纸，以及包装所述金纳米花免疫侧流层析试纸的塑料外壳；所述塑料外壳的卡壳上盖设有加样孔和观察窗，所述加样孔在样品垫的上方并通过所述观察窗观测T线和C线。
7.如权利要求2~5任一项所述的金纳米花免疫侧流层析试纸、如权利要求6所述的检测卡在检测4-氯苯氧乙酸中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述金纳米花免疫侧流层析试纸、检测卡对4-氯苯氧乙酸的可视化检出限为6.25ng/mL。
...【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株4c-6f6在制备检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸中的应用，其特征在于：所述杂交瘤细胞株4c-6f6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4c-6f6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmcc no.45807。
2.一种检测4-氯苯氧乙酸的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述试纸包括免疫探针结合垫，所述免疫探针结合垫上滴加有金纳米花免疫探针，所述金纳米花免疫探针由抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6与金纳米花偶联形成，所述抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6由杂交瘤细胞株4c-6f6分泌产生；所述杂交瘤细胞株4c-6f6为抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株4c-6f6，已于2024年01月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmcc no.45807。
3.根据权利要求2所述的金纳米花免疫侧流层析试纸，其特征在于：所述金纳米花免疫探针的制备方法为：取20ml金纳米花溶液置冰水浴，向其中含缓慢滴加100μl 0.1m的k2co3并低速搅拌5min，再缓慢滴加25μl 0.60mg/ml的抗4-氯苯氧乙酸单克隆抗体4c-6f6并继续搅拌1h，然后加入终浓度为0.5wt%的peg20000并继续搅拌45min，再加入终浓度1wt%的bsa并继续搅拌45min，静置4℃平衡体系过夜，然后置4℃、1500r/min离心10min，得上清1和沉淀1；将上清1置4℃、6000r/min离心5min，得上清2和沉淀2；将上清2置4℃、6500r/min离心10min，得上清3和沉淀3；将上清...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡培原，章羊羊，林雅婷，陈柔，黄姝祯，余心阳，
申请(专利权)人：闽南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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