【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物农药领域，具体涉及合成campesines类化合物的工程菌，还涉及campesines类化合物的制备方法和应用。
技术介绍
1、大蜡螟是完全变态昆虫，别称蜡蛾、巢虫、棉虫等，在生物分类学上属于螟蛾科、螟蛾属昆虫。大蜡螟对温度非常敏感，在高海拔地区或高纬度地区较少见，在热带及亚热带地区极为普遍，我国广东、广西、云南、海南等地均有分布，福建、江西、湖南、贵州、四川、浙江、台湾、安徽、湖北等地也常有发生。大蜡螟是一种世界性的蜜蜂害虫，尤其是我国本土蜂种中华蜜蜂的主要害虫，其幼虫取食蜂群巢房，对养蜂生产危害极大，轻者影响蜂群健康和蜂蜜的产量和质量，严重时蜂群无法抵御不得不弃巢迁飞，对养蜂业造成了严重的经济损失。目前，主要采取强群饲养和保持蜂箱卫生清洁等预防措施，高效、安全的大蜡螟绿色防控技术尚属空白。
2、生物农药因其天然无公害、低毒、低残留、易降解、高效且环境友好型等原因，成为近年农药开发的新趋势。目前，市场上的植物源杀虫剂仍是生物农药的重要组成部分，而关于微生物源的杀虫剂的报道还很少。生物碱类化合物因其结构多样性和广泛的活性一直是研究的热点，大部分生物碱类含有复杂的含氮杂环，且结构复杂多变，对不同靶标作用机制不同。市场上的藜芦碱、小檗碱、苦参碱等植物源生物碱类杀虫剂是植物源农药的重要组成部分，但与此同时，植物源杀虫剂产品在应用推广方面仍然面临一定的问题：大多药用植物只能在特定环境及气候下生长；同时，各主产地因自然环境、细分品种差异导致植物活性物质含量不同，容易造成产品生产成本的波动；另外，文献报道有效的
3、因此，筛选出全新、高效、安全的微生物来源有效杀虫成分拥有广阔的应用价值。微生物源杀虫剂或能弥补植物源杀虫剂的一些缺点，更好地推广高效低毒低残留农药，逐渐替代高毒高残留农药；另一方面，生物合成技术的实施能够有效解决原材料资源短缺的问题，避免珍稀野生药用植物资源过度采伐的风险。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种合成campesines类化合物的工程菌；本专利技术的目的之二在于提供由所述工程菌合成的抗大蜡螟活性campesines类化合物；本专利技术的目的之三在于提供具有抗大蜡螟幼虫活性的campesines类化合物在制备防大蜡螟的农药中的应用。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、合成campesines类化合物的工程菌，所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株，重组表达来自aspergillus campestris ibt 28561菌株的cpsa基因、cpsb基因、cpsd基因、cpse基因和cpsf基因中的至少一个；所述cpsa基因的核苷酸序列如seq id no.1所示、cpsb基因的核苷酸序列如seq id no.2所示、cpsc基因的核苷酸序列如seq id no.3所示、cpsd基因的核苷酸序列如seq id no.4所示、cpse基因的核苷酸序列如seq id no.5所示和cpsf基因的核苷酸序列如seq id no.6所示。
4、本专利技术优选的，所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株重组表达来自aspergilluscampestris ibt 28561菌株的cpsa基因和cpsb基因；
5、或cpsa基因、cpsb基因、cpsf基因；
6、或cpsa基因、cpsb基因、cpse基因；
7、或cpsa基因、cpsb基因、cpsd基因、cpse基因和cpsf；
8、或cpsa基因、cpsb基因、cpse和cpsd基因；
9、或cpsa基因、cpsb基因、cpsf和cpsd基因；
10、或cpsa基因、cpsb基因、cpsc基因、cpsd基因、cpse和cpsf。
11、本专利技术优选，所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株重组表达来自aspergilluscampestris ibt 28561菌株的cpsd基因。
12、2、由所述工程菌合成的抗大蜡螟活性campesines类化合物，其特征在于：所述化合物的通式如下：
13、
14、本专利技术优选的，所述化合物如下：
15、
16、本专利技术优选的，由所述工程菌通过添加底物制备得到的具有抗大蜡螟活性的campesines类化合物，
17、添加底物campesine c和campesine h得到化合物campesine i；
18、添加底物campesine c和campesine j得到化合物campesine k；
19、其化合物结构式如下：
20、
21、3、所述具有抗大蜡螟幼虫活性的campesines类化合物在制备防大蜡螟的农药中的应用。
22、本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过微生物异源表达平台，发酵分离得到了一系列结构新颖的campesines生物碱产物，筛选出具有抗大蜡螟活性的campesines类化合物；通过基因组挖掘和组合生物合成方式得到不同修饰基团的campesines类似物；通过化学合成对不同位置氮上进行甲基化修饰得到人工底物，再组合生物合成获得具有不同多元环系的campesines衍生物；所得化合物大多具有不同程度的抗大蜡螟活性，其中campesine g活性最佳，其在～12ug/g剂量时能杀死约40％的大蜡螟幼虫，为后期农业生产上大蜡螟的防治提供更多高效、安全的候选药物。
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1.合成campesines类化合物的工程菌，其特征在于：所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株，重组表达来自Aspergillus campestris IBT 28561菌株的cpsA基因、cpsB基因、cpsD基因、cpsE基因和cpsF基因中的至少一个；所述cpsA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、cpsB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示、cpsC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示、cpsD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示、cpsE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示和cpsF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述合成campesines类化合物的工程菌，其特征在于：所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株重组表达来自Aspergillus campestris IBT 28561菌株的cpsA基因和cpsB基因；
3.根据权利要求1所述合成campesines类化合物的工程菌，其特征在于：所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株重组表达来自Aspergillus campestris IB
4.由权利要求1或2所述工程菌合成的抗大蜡螟活性campesines类化合物，其特征在于：所述化合物的通式如下：
5.根据权利要求4所述工程菌合成的抗大蜡螟活性campesines类化合物，其特征在于：所述化合物如下：
6.由权利要求3所述工程菌通过添加底物制备得到的具有抗大蜡螟活性的campesines类化合物，其特征在于：
7.权利要求1～6任一项所述具有抗大蜡螟幼虫活性的campesines类化合物在制备防大蜡螟的农药中的应用。
...【技术特征摘要】
1.合成campesines类化合物的工程菌，其特征在于：所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株，重组表达来自aspergillus campestris ibt 28561菌株的cpsa基因、cpsb基因、cpsd基因、cpse基因和cpsf基因中的至少一个；所述cpsa基因的核苷酸序列如seq id no.1所示、cpsb基因的核苷酸序列如seq id no.2所示、cpsc基因的核苷酸序列如seq id no.3所示、cpsd基因的核苷酸序列如seq id no.4所示、cpse基因的核苷酸序列如seq id no.5所示和cpsf基因的核苷酸序列如seq id no.6所示。
2.根据权利要求1所述合成campesines类化合物的工程菌，其特征在于：所述工程菌以构巢曲霉为出发菌株重组表达来自aspergillus campestris...
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