【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及基于t细胞受体(tcr)的序列的结合蛋白。结合蛋白能识别包括人白细胞抗原a2(hla-a2或hla-a*02)的主要组织相容性复合体(mhc)ⅰ类中的人末端脱氧核苷酸转移酶(tdt)的片段。本文公开的结合蛋白及其表达细胞可用于癌症疗法。
技术介绍
1、基于表达嵌合抗原受体(car)的自体淋巴细胞的癌症治疗已广为人知。在过去十年中，已经公开了靶向肿瘤相关抗原的各种car。然而，传统car的主要缺点是其只能靶向细胞表面蛋白的能力。
2、急性淋巴细胞白血病(all)是一种急需新疗法的血癌。在b细胞all(b-all)中，以b细胞特异性抗原cd19为靶点的cart细胞疗法经常诱导完全缓解。然而，大约40-50％的b-all患者在经抗cd19 car-t细胞疗法后复发(maude et al.,new england journal ofmedicine 378:439-448,2018；s.a.grupp et al.,blood 132,895-895(2018))，最常见的原因是癌症导致cd19的缺失(shah&fry,nature reviews clinical oncology 16:372-385,2019)。此外，由于cd19不是肿瘤特异性抗原，正常和恶性b细胞都会被抗cd19 car-t细胞疗法杀死。虽然b细胞缺乏具有相对较好的耐受性，但它需要终生使用免疫球蛋白替代物，并且持续使用cd19特异性car-t细胞的长期效果尚不清楚。因此，既能保护正常的b淋巴细胞生成，又不产生与同种异体造血干细胞
3、尽管有多种t细胞特异性标记物，但没有一种car疗法被批准用于t细胞all(t-all)，该疗法有效靶向所有t-all亚型的恶性细胞，并同时保留成熟、健康的t细胞。这一点至关重要，因为耗尽健康的t细胞产生令人望而却步的毒性，或者甚至与生命不相容。此外，在t-all中尚未发现肿瘤特异性靶标，并且临床试验也未证明免疫疗法有效。在化疗失败的情况下(15-20％)，t-all预后不佳，总存活率低于25％(sellar et al.,british journalof haematology 181:515-522,2018)。
4、本专利技术人已经鉴定细胞内酶末端脱氧核苷酸转移酶(tdt)是b-all和t-all免疫疗法的靶标。tdt的功能是在t细胞受体(tcr)和b细胞受体基因的重组期间向v-d-j连接添加n-核苷酸(komori et al.,science 261:1171-1175,1993)，并且因此tdt的表达受限于b细胞系和t细胞系。tdt在80-94％的all和b细胞和t细胞来源的淋巴细胞淋巴瘤中过表达(drexler et al.,acta haematologia 75:12-17,1986)，但在造血干细胞中不表达(pellin et al.,nature communications 10:2395,2019)，并且因此骨髓组织生成(包括红细胞生成和血小板生成)应不受tdt靶向的影响，并且由于tdt在分化期间下调(li etal.,journal of experimental medicine 178:951-960,1993)，应保留正常成熟的b和t细胞。本专利技术人已经生成了可识别tdt来源肽的tcr，其可用于all疗法。tdt先前已被鉴定为癌症免疫疗法的潜在靶标(us2017/0290897)，但目前靶向tdt的治疗法尚未知。
5、本文提供的tcr靶向all中的癌t细胞和b细胞，但只针对健康t细胞和b细胞的小亚群。因此，本文提供的tcr为治疗大多数t-all亚型提供了首创免疫疗法，并为b-all提供了一种改进的免疫疗法，这种疗法不会引起终生免疫损伤。
技术实现思路
1、本公开提供的结合蛋白能够与呈递seq id no:1或seq id no:15所示的tdt肽的人白细胞抗原复合物i类特异性结合。这种结合蛋白(或表达结合蛋白的细胞)可用于靶向表达tdt，特别是all的癌细胞。如实例中所表明，在生理条件下，所要求保护的结合蛋白对呈递seq id no:1所示的tdt肽或seq id no:15所示的tdt肽的hla-a*02:01具有极好的特异性。值得注意的是，hla-a*02:01在患有all的欧洲、中东或北非血统的大部分患者中表达。因此，提供了对于t-all和b-all的新型疗法，其可能对化疗耐药患者特别有益。
2、因此，在第一方面，本文提供了一种结合蛋白，所述结合蛋白能与呈递具有seq idno:15所示的氨基酸序列alydktkrifl的肽的人白细胞抗原(hla)复合物a2型特异性结合；
3、其中，所述蛋白包括含有α链可变结构域和β链可变结构域的抗原结合单元；
4、其中，所述α链可变结构域包括三个互补决定区(cdr)：cdr1、cdr2和cdr3，其分别包括seq id no:16、17和18所示的氨基酸序列；以及
5、所述β链可变结构域包括三个cdr：cdr1、cdr2和cdr3，其分别包括seq id no:19、20和21所示的氨基酸序列。
6、在第二方面，本文提供了一种结合蛋白，该结合蛋白能与呈递具有seq id no:1所示的氨基酸序列alydktkri的肽的人白细胞抗原(hla)复合物a2型特异性结合的结合蛋白；
7、其中，所述蛋白包括含有α链可变结构域和β链可变结构域的抗原结合单元；
8、其中，所述α链可变结构域包括三个互补决定区(cdr)：cdr1、cdr2和cdr3，其分别包括seq id no:2、3和4所示的氨基酸序列；以及
9、所述β链可变结构域包括三个cdr：cdr1、cdr2和cdr3，其分别包括seq id no:5、6和7所示的氨基酸序列。
10、在第三方面，提供了编码本文所提供的结合蛋白的重组核酸分子。
11、在第四方面，提供了包括本文提供的重组核酸分子的载体。
12、在第五个方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括编码结合蛋白的第一链的第一重组核酸分子和编码结合蛋白的第二链的第二重组核酸分子，其中：
13、(i)所述第一链包括本公开的第一方面的α链可变结构域，以及所述第二链包括本公开的第一方面的β链可变结构域；或者
14、(ii)所述第一链包括本公开的第二方面的α链可变结构域，以及所述第二链包括本公开的第二个方面的β链可变结构域。
15、第六方面提供了免疫效应细胞，该免疫效应细胞包括本文提供的重组核酸分子、本文提供的载体或本文提供的试剂盒中包括的重组核酸分子对，以及在其细胞膜中表达本文提供的结合蛋白。
16、第七方面提供了药物组合物，包括本文提供的免疫效应细胞。
17、第八方面提供了本文所提供的免疫效应细胞或本文所提供的药物组合物，用于治疗的用途。
18、第九方本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合蛋白，所述结合蛋白能够与呈递具有SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列ALYDKTKRIFL的肽的人白细胞抗原(HLA)复合物A2型特异性结合；
2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其中：
3.一种结合蛋白，所述结合蛋白能够与呈递具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列ALYDKTKRI的肽的人白细胞抗原(HLA)复合物A2型特异性结合；
4.根据权利要求3所述的结合蛋白，其中：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的结合蛋白，其中，所述结合蛋白包括含有所述α链可变结构域的第一链和含有所述β链可变结构域的第二链。
6.根据权利要求5所述的结合蛋白，其中，所述第一链进一步包括细胞外α链恒定结构域，以及所述第二链进一步包括细胞外β链恒定结构域。
7.根据权利要求6所述的结合蛋白，其中，所述细胞外α链恒定结构域包括SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸；
8.根据权利要求6或7所述的结合蛋白，其中，所述第一链和/或所述第二链进一步包括跨膜结构域。>
9.根据权利要求8所述的结合蛋白，其中，所述第一链和/或所述第二链进一步包括细胞质结构域。
10.根据权利要求5至9中任一项所述的结合蛋白，其中：
11.一种重组核酸分子，所述重组核酸分子编码权利要求1至10中任一项所限定的结合蛋白。
12.根据权利要求11所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子包括cDNA分子。
13.根据权利要求11或12所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子编码包括与第二链连接的第一链的多肽，优选地其中，所述第一链通过自剪接接头与所述第二链连接。
14.根据权利要求13所述的重组核酸分子，其中，所述自剪接接头是包括以下的2A肽：SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，或与其具有至少50％序列同一性的氨基酸序列。
15.一种载体，所述载体包括权利要求11至14中任一项所述的重组核酸分子。
16.一种试剂盒，所述试剂盒包括编码结合蛋白的第一链的第一核酸分子和编码结合蛋白的第二链的第二核酸分子，其中：
17.一种细胞，所述细胞包括权利要求11至14中任一项所限定的重组核酸分子、权利要求15所限定的载体或权利要求16所限定的重组核酸分子对，并在其细胞膜中表达权利要求1至10中任一项所限定的结合蛋白。
18.根据权利要求17所述的细胞，其中，所述细胞是免疫效应细胞或其前体。
19.根据权利要求17或18所述的免疫效应细胞，其中，所述细胞为T细胞或自然杀伤细胞，或其前体，或其中，所述细胞为干细胞。
20.根据权利要求19所述的免疫效应细胞，其中，所述细胞是辅助性T细胞或细胞毒性T细胞。
21.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求17至20中任一项所限定的细胞。
22.一种权利要求17至20中任一项所限定的细胞或权利要求21所限定的药物组合物，用于治疗的用途。
23.一种权利要求17至20中任一项所限定的细胞或权利要求21所限定的药物组合物，用于治疗癌症的用途，其中，所述癌症表达末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。
24.根据权利要求23所述用途的细胞，其中，所述癌症是急性淋巴细胞白血病，优选是T细胞来源或B细胞来源的急性淋巴细胞白血病。
25.一种生成对末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)具有特异性的细胞的方法，所述方法包括将权利要求11至14中任何一项所限定的重组核酸分子、权利要求15所限定的载体或权利要求16所限定的重组核酸分子对引入至所述细胞中。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述细胞为T细胞或NK细胞，或者其前体，优选其中，所述T细胞为辅助性T细胞或细胞毒性T细胞。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种结合蛋白，所述结合蛋白能够与呈递具有seq id no:15所示的氨基酸序列alydktkrifl的肽的人白细胞抗原(hla)复合物a2型特异性结合；
2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其中：
3.一种结合蛋白，所述结合蛋白能够与呈递具有seq id no:1所示的氨基酸序列alydktkri的肽的人白细胞抗原(hla)复合物a2型特异性结合；
4.根据权利要求3所述的结合蛋白，其中：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的结合蛋白，其中，所述结合蛋白包括含有所述α链可变结构域的第一链和含有所述β链可变结构域的第二链。
6.根据权利要求5所述的结合蛋白，其中，所述第一链进一步包括细胞外α链恒定结构域，以及所述第二链进一步包括细胞外β链恒定结构域。
7.根据权利要求6所述的结合蛋白，其中，所述细胞外α链恒定结构域包括seq id no:10所示的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸；
8.根据权利要求6或7所述的结合蛋白，其中，所述第一链和/或所述第二链进一步包括跨膜结构域。
9.根据权利要求8所述的结合蛋白，其中，所述第一链和/或所述第二链进一步包括细胞质结构域。
10.根据权利要求5至9中任一项所述的结合蛋白，其中：
11.一种重组核酸分子，所述重组核酸分子编码权利要求1至10中任一项所限定的结合蛋白。
12.根据权利要求11所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子包括cdna分子。
13.根据权利要求11或12所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子编码包括与第二链连接的第一链的多肽，优选地其中，所述第一链通过自剪接接头与所述第二链连接。
14.根据权利要求13所述的重组核酸分子，其中，所述自剪接接头是包括以下的2a肽：seq id no：26所示的氨基酸序列，或与其具...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·奥尔维斯，M·阿里，
申请(专利权)人：奥斯陆大学医院HF，
类型：发明
国别省市：
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