【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
1、d-塔格糖是一种多功能性稀有糖，广泛应用于医疗保健、食品、化妆品、美容等行业，其合成方式主要有化学法与生物法。化学法具有高成本、高污染、纯化工艺复杂等缺点，不利于d-塔格糖的经济生产，生物法因其高效、环保、温和、经济等特点，已经成为目前d-塔格糖生产的主流方法，其中通过l-阿拉伯糖异构酶生物转化合成d-塔格糖受到广泛关注。
2、近年来，针对l-阿拉伯糖异构酶的研究大部分都集中于将各类l-阿拉伯糖异构酶基因克隆并表达到基因工程菌中，对重组酶的酶学性质进行研究，以便利用重组基因工程菌或其重组酶直接进行d-塔格糖的生产。大多数研究选择大肠杆菌作为受体菌，但该菌含有内毒素及毒蛋白，具有一定危险性，并非食品级d-塔格糖生产的最优选择。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌及其构建方法和应用。
2、本专利技术的技术解决方案如下：
3、一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌构建方法，对l.fermentum c6菌株编码l-阿拉伯糖异构酶的基因lai-c6进行了克隆和可溶性异源表达，利用基因工程方法构建得到的；
4、所述lai-c6的基因序列如seq id no.1所示。
5、优选地，包括以下步骤：
6、s1：以l.ferm
7、s2：将扩增产物用限制性内切酶quick cut nde i及quick cut mlu i对二者进行双酶切，双酶切后，利用连接酶将目的基因连接到表达质粒上，获得重组表达载体pma5-l-ai；
8、s3：将重组表达载体转化至感受态细胞e.coli dh5α；经含氨苄青霉素的lb培养基筛选，挑取单菌落进行pcr扩增验证，筛选出阳性克隆菌；
9、s4：从阳性克隆菌中筛选出l-阿拉伯糖异构酶基因lai-c6测序正确的阳性克隆菌；
10、s5：从基因序列正确的阳性克隆菌中抽提pma5-lai质粒转化至b.subtilis wb600感受态细胞中，构建出重组工程菌b.subtilis pma5-lai-wb600。
11、优选地，步骤s1中，所述l.fermentum c6菌株从腌制食品中分离筛选得到。
12、优选地，步骤s1中，pcr扩增用到的引物及引物序列如下所示：
13、f：5'ggaattccatatgcgtaagatgc3'；
14、r：5'cgacgcgtctaatggtgatggtgatgatgcttgatgttgataaag3'；
15、其中f、r分别表示上、下游引物，下划线为酶切位点。
16、本专利技术该公开了一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌，采用如上任一所述的构建方法得到。
17、本专利技术还公开了一种如上所述的重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌在作为全细胞催化剂制备d-塔格糖上的应用。
18、优选地，将重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌进行培养，培养后的菌体作为制备d-塔格糖的全细胞催化剂，d-塔格糖产率达到42.91±0.28％。
19、本专利技术的有益效果是：
20、本专利技术对l.fermentum c6菌株编码l-阿拉伯糖异构酶的基因lai-c6进行了克隆、可溶性异源表达与酶学性质研究，并对所构建的重组工程菌bacillus subtilis pma5-lai-wb600作为d-塔格糖全细胞催化剂的制备工艺进行了优化，为该重组工程菌在生物法生产d-塔格糖的实际应用提供奠定了基础。
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1.一种重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌构建方法，其特征在于，对L.fermentum C6菌株编码L-阿拉伯糖异构酶的基因LAI-C6进行了克隆和可溶性异源表达，利用基因工程方法构建得到的；
2.根据权利要求1所述的一种重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述L.fermentum C6菌株从腌制食品中分离筛选得到。
4.根据权利要求1所述的一种重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤S1中，PCR扩增用到的引物及引物序列如下所示：
5.一种重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌，其特征在于，采用如权利要求1-4任一所述的构建方法得到。
6.一种如权利要求5所述的重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌在作为全细胞催化剂制备D-塔格糖上的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，将重组表达L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌进行培养，
...【技术特征摘要】
1.一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌构建方法，其特征在于，对l.fermentum c6菌株编码l-阿拉伯糖异构酶的基因lai-c6进行了克隆和可溶性异源表达，利用基因工程方法构建得到的；
2.根据权利要求1所述的一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种重组表达l-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤s1中，所述l.fermentum c6菌株从腌制食品中分离筛选得到。
4.根据权利要求1所述的一种重组表...
【专利技术属性】
技术研发人员：李昆太，彭帅英，邱露，谭明辉，张俊，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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