【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种sars-cov-2广谱疫苗及其制备方法与应用。
技术介绍
1、新型冠状病毒，也称covid-19，是由sars-cov-2感染导致的一种急性呼吸道传染病。sars-cov-2属于冠状病毒科β-冠状病毒属，具有囊膜，基因组为正链rna。sars-cov-2是一种高传染性的新型冠状病毒，已导致全球范围内的急性呼吸系统疾病的大流行，对人类健康和公共安全造成了严重威胁。
2、目前，研发sars-cov-2亚单位疫苗的主要策略为：抗原选择和的抗原聚集方式。现有sars-cov-2亚单位疫苗选择s蛋白rbd为抗原，聚集方式为二聚化(微生物所/智飞)或基于铁蛋白(ferritin)纳米颗粒表面的抗原展示(国家cdc/生物物理所)。然而，这些策略均存在缺陷：(1)sars-cov-2的变异主要发生在rbd，单一种类rbd疫苗失效快；(2)铁蛋白纳米颗粒自身分子量过大，免疫原性强；(3)抗原-铁蛋白复合体不稳定。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种sars-cov-2广谱疫苗及其制备方法与应用。
2、第一方面，本专利技术要求保护一种sars-cov-2亚单位疫苗。
3、本专利技术所要求保护的sars-cov-2亚单位疫苗具体可按照包括如下步骤的方法制备得到的：
4、(a1)制备spycatcher-2c融合蛋白；
5、所述spycatcher-2c融合蛋白由spycatcher蛋白与肠道病
6、(a2)制备spytag-抗原融合蛋白；
7、所述spytag-抗原融合蛋白由spytag蛋白与sars-cov-2的抗原融合而成；
8、(a3)将所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白混合，两者依靠spycatcher和spytag之间的共价连接以及肠道病毒的2c蛋白的自我寡聚作用，自发组成多抗原聚集体，获得sars-cov-2亚单位疫苗。
9、在本专利技术的具体实施方式中，步骤(a1)中，所述肠道病毒的2c蛋白可为脊髓灰质炎病毒(pv)的2c蛋白。当然，所述肠道病毒的2c蛋白也可以为其他肠道病毒如肠道病毒a71型(ev-a71)的2c蛋白等。
10、在本专利技术的具体实施方式中，步骤(a2)中，所述sars-cov-2的抗原可为sars-cov-2的刺突蛋白的受体结合结构域(rbd)。当然所述sars-cov-2的抗原也可以为sars-cov-2的其他抗原如m蛋白或n蛋白等。
11、进一步地，步骤(a3)中，将所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白混合具体可为：将所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白按照1:3的摩尔比在缓冲体系中混合。
12、更进一步地，混合后还可包括如下步骤：在冰上静置20h，从而依靠所述spycatcher蛋白和所述spytag蛋白之间的共价连接作用，完成所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白的组装。
13、在本专利技术的具体实施方式中，所述缓冲体系具体为gf缓冲液；所述gf缓冲液组成如下：10mm hepes ph 7.4；150mm nacl。
14、在本专利技术的具体实施方式中，所述spycatcher蛋白的氨基酸序列为seq id no.1的第16-132位。所述肠道病毒的2c蛋白为肠道病毒71型的2c蛋白，其氨基酸序列如seq idno.1的第145-358位。所述spytag蛋白的氨基酸序列为seq id no.2的第21-33位(或seq idno.3的第21-33位或seq id no.4的第21-33位)。
15、在所述sars-cov-2亚单位疫苗中，所述spytag-抗原融合蛋白可为如下(b1)-(b3)中任一种：
16、(b1)spytag-rbd wt融合蛋白；
17、所述spytag-rbd wt融合蛋白由所述spytag蛋白和rbd wt蛋白融合而成；所述rbdwt蛋白为sars-cov-2原始毒株的rbd蛋白；所述rbd wt蛋白的氨基酸序列为seq id no.2的第45-243位；
18、(b2)spytag-rbd delta融合蛋白；
19、所述spytag-rbd delta融合蛋白由所述spytag蛋白和rbd delta蛋白融合而成；所述rbd delta蛋白为sars-cov-2的delta型变异毒株的rbd蛋白；所述rbd delta蛋白的氨基酸序列为seq id no.3的第27-225位；
20、(b3)spytag-rbd omicron融合蛋白；
21、所述spytag-rbd omicron融合蛋白由所述spytag蛋白和rbd omicron蛋白融合而成；所述rbd omicron蛋白为sars-cov-2的omicron型变异毒株的rbd蛋白；所述rbdomicron蛋白的氨基酸序列为seq id no.4的第27-225位。
22、具体地，所述spytag-rbd wt融合蛋白的氨基酸序列为seq id no.2；所述spytag-rbd delta融合蛋白的氨基酸序列为seq id no.3；所述spytag-rbd omicron融合蛋白的氨基酸序列为seq id no.4。
23、进一步地，在所述sars-cov-2亚单位疫苗的制备方法中，还可包括将步骤(a3)中利用不同的所述spytag-抗原融合蛋白制备得到的不同所述sars-cov-2亚单位疫苗进行等摩尔混合的步骤。混合后得到混合亚单位疫苗，如本专利技术具体实施方式中的rbd mix 2c-vac。
24、第二方面，本专利技术要求保护一种sars-cov-2亚单位疫苗的制备方法。
25、本专利技术要求保护的sars-cov-2亚单位疫苗的制备方法，可包括前文第一方面中所述步骤。
26、第三方面，本专利技术要求保护用于制备前文第一方面中所述sars-cov-2亚单位疫苗的成套产品。
27、本专利技术要求保护的用于制备前文第一方面中所述sars-cov-2亚单位疫苗的成套产品，可包括如下任一：
28、(c1)前文第一方面中所述的spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白。
29、(c2)核酸分子1和核酸分子2；所述核酸分子1为编码(c1)中所述的spycatcher-2c融合蛋白的核酸分子；所述核酸分子2为编码(c1)中所述spytag-抗原融合蛋白的核酸分子。
30、进一步地，所述核酸分子1如seq id no.5所示；所述核酸分子2如seq id no.6(对应所述spytag-rbd wt融合蛋白)或seq id no.7(对应所述spytag-rbd del本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种SARS-CoV-2亚单位疫苗，是按照包括如下步骤的方法制备得到的：
2.根据权利要求1所述的SARS-CoV-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(A1)中，所述肠道病毒的2C蛋白为脊髓灰质炎病毒的2C蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的SARS-CoV-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(A2)中，所述SARS-CoV-2的抗原为SARS-CoV-2的RBD。
4.根据权利要求1-3中任一所述的SARS-CoV-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(A3)中，将所述SpyCatcher-2C融合蛋白和所述SpyTag-抗原融合蛋白混合为：将所述SpyCatcher-2C融合蛋白和所述SpyTag-抗原融合蛋白按照1:3的摩尔比在缓冲体系中混合；
5.根据权利要求1-4中任一所述的SARS-CoV-2亚单位疫苗，其特征在于：所述SpyCatcher蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第16-132位；和/或
6.根据权利要求1-5中任一所述的SARS-CoV-2亚单位疫苗，其特征在于：在所述SARS-CoV-2亚单位疫苗
7.一种SARS-CoV-2亚单位疫苗的制备方法，包括权利要求2-6任一中所述步骤。
8.用于制备权利要求1-6中任一所述SARS-CoV-2亚单位疫苗的成套产品，包括如下任一：
9.权利要求1-6中任一所述SARS-CoV-2亚单位疫苗或权利要求8所述的成套产品在如下任一中的应用：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述SARS-CoV-2为原始毒株或变异毒株；
...【技术特征摘要】
1.一种sars-cov-2亚单位疫苗，是按照包括如下步骤的方法制备得到的：
2.根据权利要求1所述的sars-cov-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(a1)中，所述肠道病毒的2c蛋白为脊髓灰质炎病毒的2c蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的sars-cov-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(a2)中，所述sars-cov-2的抗原为sars-cov-2的rbd。
4.根据权利要求1-3中任一所述的sars-cov-2亚单位疫苗，其特征在于：步骤(a3)中，将所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白混合为：将所述spycatcher-2c融合蛋白和所述spytag-抗原融合蛋白按照1:3的摩尔比在缓冲体系中混合；
5.根据权利要求1-4中任一所述的sars-cov-2亚单位疫苗，其特征在于：所述sp...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔胜，杨威，李智剑，迟晓静，张月丽，秦博，高培翔，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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