【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物工程的，更具体地说，涉及一种可透皮的多型重组胶原蛋白、重组胶原蛋白液及其制备方法和应用。
技术介绍
1、胶原蛋白是由三条肽链相互缠绕而成的纤维状蛋白质，广泛存在于动物的结缔组织中，是哺乳动物体内分布最广的功能性蛋白。迄今为止，研究人员已发现了28种胶原蛋白，根据结构和功能的不同，他们可分为成纤维胶原和非成纤维胶原。常见的成纤维胶原包括ⅰ型、ⅱ型、ⅲ型、ⅳ型、v型、vi型、ⅺ型；而非成纤维胶原为ⅹⅶ型胶原蛋白(col17)，包括网状胶原、锚定胶原和跨膜胶原等。ⅹⅶ型胶原蛋白在上皮细胞基底膜的作用中发挥着重要作用，包括调控上皮细胞的黏附、分离和发育分化，以及维持皮肤中相关干细胞的稳态和毛发生长。因此，ⅹⅶ型胶原蛋白在延缓皮肤衰老和促进毛囊方面存在极大的作用。胶原蛋白ⅰ型，由紧密堆积的纤维构成，占人体胶原蛋白的90％，为皮肤、骨骼、肌腱、纤维软骨、结缔组织和牙齿提供结构。胶原蛋白ⅲ型由成纤维细胞和其他间充质细胞类型分泌，使其成为各种炎症驱动的病理学的主要参与者，例如肺损伤、病毒和非病毒性肝病。胶原蛋白ⅳ型是在基底膜中发现的主要胶原蛋白类型，是形成网络的胶原蛋白，是上皮细胞和内皮细胞的基础，可作为组织隔室之间的屏障。研究表明，紫外线(ultraviolet，uv)辐射产生的大量自由基对机体大分子有损伤作用，可引起皮肤细胞损伤、凋亡，随着臭氧层逐渐变薄，人类接触紫外线的强度不断增加，由紫外线辐射所引起的疾病也越来越多，如近年，皮肤癌和白内障的发病率大幅上升。ⅵ型胶原蛋白作为一种结构蛋白，可刺激间质细胞合成dna增加，促进细胞
2、胶原蛋白作为天然的生物高分子材料，具有良好的生物相容性、生物可降解性和吸收性、促进细胞形成及促上皮细胞形成等功能，可广泛应用在医学、美容、化妆品、保健品等领域中，其在皮肤损伤修复、整形美容、增强机体免疫力等方面的作用亦已获得共识。目前，胶原蛋白的来源主要包括动物提取和基因工程。动物提取的胶原蛋白因可能存在人畜共患疾病，因此应用可能存在一定风险；基因工程来源的重组胶原蛋白是目前广泛被认可的一种传统胶原蛋白替代产品。
3、为了更全面地为皮肤补充胶原蛋白，通常情况下技术人员会在配方中加入多种类型的胶原蛋白，通过胶原蛋白组合物的形式施用于皮肤表面，从而达到全面补充皮肤所需胶原蛋白成分的目的。但是，上述情况下需要单独制备不同类型的胶原蛋白，使得胶原蛋白应用的制备工艺和生产成本较高。
技术实现思路
1、为了提供低成本且种类丰富的胶原蛋白，本申请提供一种可透皮的多型重组胶原蛋白、重组胶原蛋白液及其制备方法和应用。
2、本申请利用基因融合的方式，将5种不同dna片段、可促进分子经皮渗透的透皮短肽以及特定的酶切位点串联成一段由5种不同胶原蛋白螺旋域组成的融合蛋白。通过微生物发酵表达，利用蛋白酶切割出5段不同类型的胶原蛋白片段。该复合肽无需复配，制备成本低，并且可被皮肤有效吸收。
3、第一方面，本申请提供一种可透皮的多型重组胶原蛋白，采用如下的技术方案：
4、一种可透皮的多型重组胶原蛋白，所述重组胶原蛋白包括i型胶原蛋白、ⅲ型胶原蛋白、ⅳ型胶原蛋白、ⅵ型胶原蛋白和ⅹⅶ型胶原蛋白；
5、所述i型胶原蛋白包括如seq id no.1所示的氨基酸序列，拷贝数为m，m≥1；
6、所述ⅱ型胶原蛋白包括如seq id no.2所示的氨基酸序列，拷贝数为n，n≥1；
7、所述ⅲ型胶原蛋白包括如seq id no.3所示的氨基酸序列，拷贝数为o，o≥1；
8、所述ⅳ型胶原蛋白包括如seq id no.4所示的氨基酸序列，拷贝数为p，p≥1；
9、所述ⅹⅶ型胶原蛋白包括如seq id no.5所示的氨基酸序列，拷贝数为q，q≥1；
10、所述i型胶原蛋白、所述ⅱ型胶原蛋白、所述ⅲ型胶原蛋白、所述ⅳ型胶原蛋白、所述ⅹⅶ型胶原蛋白以及各类型胶原蛋白的拷贝数之间均通过可被蛋白酶识别并剪切的序列连接；
11、所述重组胶原蛋白的n段或c端通过linker序列连接有透皮短肽；所述透皮短肽包括如seq id no.6所示的氨基酸序列。
12、可选地，所述i型胶原蛋白、所述ⅱ型胶原蛋白、所述ⅲ型胶原蛋白、所述ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅹⅶ型胶原蛋白的拷贝数之比为：
13、m:n:o:p:q＝(6-14):(2-6):(2-10):(1-6):(1-6)。
14、可选地，所述i型胶原蛋白、所述ⅱ型胶原蛋白、所述ⅲ型胶原蛋白、所述ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅹⅶ型胶原蛋白的拷贝数之比为：
15、m:n:o:p:q＝(8-10):(3-4):(4-8):(2-3):(2-3)。
16、在一个具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，i型胶原蛋白对应的数值可以为6、8、10、14。
17、在一些具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，i型胶原蛋白对应的数值范围可以为6-8、6-10、6-14、8-10、8-14、10-14。
18、在一个具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅱ型胶原蛋白对应的数值可以为2、3、4、6。
19、在一些具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅱ型胶原蛋白对应的数值范围可以为2-3、2-4、2-6、3-4、3-6、4-6。
20、在一个具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅲ型胶原蛋白对应的数值可以为2、4、6、8、10。
21、在一些具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅲ型胶原蛋白对应的数值范围可以为2-4、2-6、2-8、2-10、4-6、4-8、4-10、6-8、6-10、8-10。
22、在一个具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅳ型胶原蛋白对应的数值可以为1、2、3、4、6。
23、在一些具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅳ型胶原蛋白对应的数值范围可以为1-2、1-3、1-4、1-6、2-3、2-4、2-6、3-4、3-6、4-6。
24、在一个具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅹⅶ型胶原蛋白对应的数值可以为1、2、3、4、6。
25、在一些具体的实施方案中，在上述拷贝数之比中，ⅹⅶ型胶原蛋白对应的数值范围可以为1-2、1-3、1-4、1-6、2-3、2-4、2-6、3-4、3-6、4-6。
26、可选地，所述重组胶原蛋白包括如seq id no.7-seq id no.10所示的氨基酸序列。
27、可本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述重组胶原蛋白包括I型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和ⅩⅦ型胶原蛋白；
2.根据权利要求1所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述I型胶原蛋白、所述Ⅱ型胶原蛋白、所述Ⅲ型胶原蛋白、所述Ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅩⅦ型胶原蛋白的拷贝数之比为：m:n:o:p:q=(6-14):(2-6):(2-10):(1-6):(1-6)。
3.根据权利要求2所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述I型胶原蛋白、所述Ⅱ型胶原蛋白、所述Ⅲ型胶原蛋白、所述Ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅩⅦ型胶原蛋白的拷贝数之比为：m:n:o:p:q=(8-10):(3-4):(4-8):(2-3):(2-3)。
4. 根据权利要求1所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述重组胶原蛋白包括如SEQ ID NO.7-SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述蛋白酶选自TEV蛋白酶、EK蛋白酶、胶原酶或Thrombin凝血酶。
...【技术特征摘要】
1.一种可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述重组胶原蛋白包括i型胶原蛋白、ⅱ型胶原蛋白、ⅲ型胶原蛋白、ⅳ型胶原蛋白和ⅹⅶ型胶原蛋白；
2.根据权利要求1所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述i型胶原蛋白、所述ⅱ型胶原蛋白、所述ⅲ型胶原蛋白、所述ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅹⅶ型胶原蛋白的拷贝数之比为：m:n:o:p:q=(6-14):(2-6):(2-10):(1-6):(1-6)。
3.根据权利要求2所述的可透皮的多型重组胶原蛋白，其特征在于，所述i型胶原蛋白、所述ⅱ型胶原蛋白、所述ⅲ型胶原蛋白、所述ⅳ型胶原蛋白以及所述ⅹⅶ型胶原蛋白的拷贝数之比为：m:n:o:p:q=(8-10):(3-4):(4-8):(2-3):(2-3)。
4. 根据权利要求1所述的可透皮的多型重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：阮仁全，
申请(专利权)人：美尔健深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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