【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及大肠杆菌o157:h7特异性蛋白的抗体及其在该菌富集或分离中的应用。
技术介绍
1、大量的研究表明，肠道微生物组广泛参与宿主的神经、生理、代谢、免疫等各种生命过程和生理活动，与宿主健康息息相关；从正常人或病人粪便中提取分离某一种或某一类特定的天然微生物，对于阐述微生物与疾病关系有着重大作用，此外在粪便移植技术中分离去除致病菌，也为粪便移植提供一种新的方向。通过将识别微生物表面蛋白的抗体偶联至磁珠，然后通过磁场进行分选收集，再经过抗原-抗体解离，可从粪便中获得目的微生物或去除有害微生物。
2、大肠杆菌(escherichia coli)又称大肠埃希氏菌，大小0.5×1-3微米，是埃希氏在1885年发现的，周生鞭毛，大肠杆菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其中很小一部分在一定条件下引起疾病，大肠杆菌的血清型能够引起感染主要是由菌毛抗原和致病性毒素感染引起。大肠杆菌o157:h7是大肠杆菌的其中一个种类型，该种病菌常见于牛只等温血动物的肠道内。这一类型的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致严重的肠道症状，如带血腹泻。
3、o-抗原是由多糖重复单元组成的多聚糖，表达于细菌的外膜，是大肠杆菌最常见的抗原之一，是用于鉴定大肠杆菌的主要手段之一。大肠杆菌o157:h7的主要表面抗原是细胞壁脂多糖(lps；o抗原)和荚膜多糖(ps；k抗原)。这些多糖是在细菌
4、免疫磁珠法分离大肠杆菌o157:h7的主要原理是利用包被有o157特异性抗体的磁珠对大肠杆菌o157:h7进行选择性捕获，然后通过磁力技术完成力学的移动，进而分离大肠杆菌o157:h7。现有分离大肠杆菌o157:h7的免疫磁珠法，使用的抗体为多克隆抗体或某一种单克隆抗体，分离效率低，不能直接从粪便样本中分离大肠杆菌o157:h7，需要先将粪便样本进行增菌培养。本专利技术采用两种抗体复合筛选，产生协同作用，能提高分离效率，使得可以直接从粪便样本中分离o157:h7。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于解决现有技术存在的缺点与不足，提供了大肠杆菌o157:h7特异性蛋白的抗体及其在该菌富集或分离中的应用。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、本专利技术提供的大肠杆菌o157:h7特异性蛋白的抗体，为lps抗体和flic抗体。
4、lps抗体轻链cdr和fr区的氨基酸序列如下所示：
5、fr-l1：evtitc，
6、cdr-l1：sasssvtsmh，
7、fr-l2：wyllkpgqspklliy，
8、cdr-l2：stsnlas，
9、fr-l3：gvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyyc，
10、cdr-l3：qqrssypft，
11、fr-l4：fgggtkleik。
12、lps抗体重链cdr和fr区的氨基酸序列如下所示：
13、fr-h1：evklvesgaelvkpgasvklsckasgytft，
14、cdr-h1：nywmh，
15、fr-h2：wvkqrpgqglewig，
16、cdr-h2：eikpgngrtnynekfst，
17、fr-h3：katltvdkssntayiqlssltsedsavyycsr，
18、cdr-h3：egdydnpayfpy，
19、fr-h4：wgqgtlvtvsa。
20、flic抗体轻链cdr和fr区的氨基酸序列如下所示：
21、fr-l1：dilitqtplslpvslgdqasisc，
22、cdr-l1：rssqrivhsngntyle，
23、fr-l2：wyllkpgqspklliy，
24、cdr-l2：kvfnrfs，
25、fr-l3：gvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyyc，
26、cdr-l3：fqgshvppt，
27、fr-l4：fgggtq。
28、flic抗体重链cdr和fr区的氨基酸序列如下所示：
29、fr-h1：qvqlkesgpgilqpsqtltltcsfsgfsls，
30、cdr-h1：tsgmgvs，
31、fr-h2：wirqpsgkglewla，
32、cdr-h2：hiywdddkryipslms，
33、fr-h3：rltiskdasgnqvflkitsvdtadsatyycar，
34、cdr-h3：tdtsalhwyfdv，
35、fr-h4：wgagttvtvss。
36、本专利技术还提供了上述lps抗体和flic抗体在大肠杆菌o157:h7富集或分离中的应用。
37、本专利技术还提供了包被上述lps抗体的磁珠和包被上述flic抗体的磁珠在大肠杆菌o157:h7富集或分离中的应用。所述的包被抗体的磁珠优选通过使用edc和nhs将抗体偶联到羧基磁珠上得到；所述的磁珠的粒径优选为200nm。
38、本专利技术还提供了一种大肠杆菌o157:h7富集或分离的方法，其采用包被上述lps抗体的磁珠和包被上述flic抗体的磁珠富集或分离待测样品中的大肠杆菌o157:h7。进一步的，所述的大肠杆菌o157:h7富集或分离的方法包括以下步骤：将包被上述lps抗体的磁珠和包被上述flic抗体的磁珠加入到待测样品中进行孵育使大肠杆菌o157:h7结合到磁珠上，利用磁力分离出磁珠；将分离的磁珠重悬后加入木瓜蛋白酶进行孵育使抗体与磁珠解离，再利用磁力吸附磁珠，上清即为富集或分离的大肠杆菌o157:h7悬液。所述的待测样品包括粪便样品；重悬分离磁珠用的溶液包括生理盐水、0.1mol/l pbs、0.2mol/l edta、0.01mol/l半胱氨酸等。
39、本专利技术相对于现有技术具有如下优点和有益效果：
40、本专利技术筛选得到分别识别大肠杆菌o157:h7的lps和flic的特异性抗体。将两种抗体分别偶联至磁珠，两种磁珠用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种大肠杆菌O157:H7特异性蛋白的抗体，其特征在于：所述的抗体为LPS的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如下所示的轻链CDR区：
2.一种编码权利要求1所述的抗体的核苷酸。
3.一种包被权利要求1所述的抗体的磁珠。
4.一种大肠杆菌O157:H7特异性蛋白的抗体，其特征在于：所述的抗体为fliC的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如下所示的轻链CDR区：
5.一种编码权利要求4所述的抗体的核苷酸。
6.一种包被权利要求3所述的抗体的磁珠。
7.权利要求1或4所述的抗体或权利要求3或6所述的磁珠在大肠杆菌O157:H7富集或分离中的应用。
8.一种大肠杆菌O157:H7富集或分离的方法，其特征在于：采用权利要求3和6所述的磁珠富集或分离待测样品中的大肠杆菌O157:H7。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：将权利要求3和6所述的磁珠加入到待测样品中进行孵育使大肠杆菌O157:H7结合到磁珠上，利用磁力分离出磁珠；将分离的磁珠重悬后加入木瓜蛋白酶进行孵育使抗体与磁珠解离
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述的待测样品包括粪便样品；所述的磁珠的粒径优选为200nm。
...【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌o157:h7特异性蛋白的抗体，其特征在于：所述的抗体为lps的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如下所示的轻链cdr区：
2.一种编码权利要求1所述的抗体的核苷酸。
3.一种包被权利要求1所述的抗体的磁珠。
4.一种大肠杆菌o157:h7特异性蛋白的抗体，其特征在于：所述的抗体为flic的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如下所示的轻链cdr区：
5.一种编码权利要求4所述的抗体的核苷酸。
6.一种包被权利要求3所述的抗体的磁珠。
7.权利要求1或4所述的抗体或权利要求3或6所述的磁珠在大肠杆菌o157:h7富...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈鹤霄，吕永玲，李志强，刘磊，闫彩霞，滕兆伟，付广，艾旭，李国龙，周先锋，
申请(专利权)人：美益添生物医药武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：
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